导读:本文包含了冷休克论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:休克,蛋白,低温,单倍体,莨菪,折迭,细胞。
冷休克论文文献综述
和二斌,罗志荣[1]（2019）在《嗜热冷休克蛋白去折迭的全原子分析》一文中研究指出嗜热冷休克蛋白对于保证生物体功能的正常运作发挥着重要作用,其独特功能和β桶状结构使其非常适合作为研究蛋白质折叠的模型。采用分子动力学模拟的方法,对其在550 K高温下的去折迭行为进行了统计分析。结果表明:嗜热冷休克蛋白的去折迭过程存在多条路径,其去折迭行为主要归因于带电残基间所形成的离子对,离子对的分布决定了不同β股间的作用强弱,从而影响了其动力学行为。同时还发现疏水核心回旋半径的变化与周围水分子数量的变化相一致,说明水分子与去折迭行为之间的关系满足并发机制。(本文来源于《新乡学院学报》期刊2019年03期）
代海滨[2]（2019）在《基于冷休克蛋白低温对蛛网膜下腔出血早期和延迟继发性脑损伤的保护及机制研究》一文中研究指出背景:蛛网膜下腔出血(Subarachnoid hemorrhage,SAH)是由于脑部的血管破裂出血,血液侵入蛛网膜下腔所致的一类高死亡率和高致残率的疾病,分原发性和继发性SAH。,近十几年来临床上对于SAH后血管痉挛的治疗已经有了很大的进步,但是对于SAH的预后改善尚无明显进展,常引起严重的神经功能损伤,包括脑炎性反应等引起的继发性脑损伤会直接影响到SAH患者的生活质量和生存率。SAH发生后72小时内出现的全脑直接损伤(即早期脑损伤)包括早期脑水肿、氧化应激性损害、神经细胞凋亡以及脑梗死。因此,本研究针对早期脑损伤相关的因子CIRP、及抑制剂C23蛋白、延迟继发性脑损伤相关的因子RBM3在神经细胞中的表达反应,以及如何调节此类反应因子和减轻神经元损伤的机制进行研究。方法:本课题首先从C57BL/6小鼠上获取神经元细胞,通过培养建立稳定的神经元细胞培养系,建立细胞SAH模型。通过视交叉池注血法,建立大鼠SAH模型。通过大鼠SAH模型,观察脑部颞叶皮层神经细胞的免疫荧光染色,确定CIRP和RBM3在脑内神经细胞的分布特点,使用real-time PCR和Western Blot法检测神经元细胞在SAH后不同时间点的mRNA相对表达和蛋白表达水平。利用CIRP功能抑制剂C23蛋白抑制大鼠脑内CIRP的功能,应用免疫组化、尼氏染色法、TUNEL细胞凋亡法和大鼠转棒实验,评估大鼠神经功能的损伤和恢复,观察SAH后凋亡相关蛋白、神经元凋亡和运动功能等指标的变化,探讨低温对SAH后神经细胞中CIRP和RBM3因子表达的影响和神经功能的保护作用。结果:大鼠SAH后颞叶皮层脑组织CIRP在建模后12h、1d mRNA和蛋白呈高表达,RBM3在建模后3d和7d mRNA和蛋白呈高表达,与细胞凋亡相关的Bcl-2蛋白呈低表达,Bax,caspase-3,caspase-9蛋白以及细胞色素c呈高表达。经过低温治疗后SAH大鼠都可在7天后,上述指标恢复到对照组(sham组)水平,而低温本身对正常Sham组大鼠,具有提高神经元细胞凋亡率、增加脑部组织损伤的作用。但是,SAH组的低温处理,反而抑制了神经细胞凋亡与脑组织损伤。通过免疫荧光染色,我们发现CIRP、RBM3主要在神经元细胞中表达,而星形胶质细胞只有小部分表达。因此,大鼠神经元细胞是CIRP的主要表达细胞。低温治疗过的SAH大鼠神经元细胞凋亡率明显减少,免疫组化DAB染色显示SAH+低温组的CIRP表达明显减少,尼氏染色和电镜检查都表明低温对SAH大鼠具有降低神经元细胞凋亡和恢复线粒体功能,以及提高转棒功能的作用。同时,我们发现CIRP的拮抗剂C23蛋白对于CIRP与细胞表面受体结合具有抑制作用,此抑制作用可以有效降低SAH引起的脑部神经元凋亡、减轻炎性反应,有助于恢复大鼠的运动功能。并且,从C23不同剂量组的实验结果,我们发现SAH后给予C23蛋白的最高剂量,对CIRP的抑制效果最好。结论:脑组织神经细胞内的CIRP和RBM3分别在SAH后早期和延迟继发性脑损伤时表达升高,并引起凋亡相关蛋白表达变化,诱导了神经元凋亡。低温可减少脑组织CIRP和RBM3表达,并减少凋亡相关蛋白表达,抑制神经元凋亡。在大鼠SAH模型,高剂量的C23可以减轻CIRP诱导的脑组织炎性反应,减少细胞凋亡,改善运动功能。(本文来源于《南京大学》期刊2019-05-01）
张李伟,刘畅,张英华[3]（2018）在《高效表达冷休克蛋白的乳酸菌发酵体系质构特性分析》一文中研究指出以高效表达冷休克蛋白C和D的乳酸菌菌株和对照菌株、发酵脱脂乳,通过检测发酵过程体系的胞外多糖产生量,以及发酵体系酸度和质构的变化趋势,从而确定乳酸菌中冷休克蛋白对发酵乳质构特性的影响。结果表明,超量表达菌株在42℃条件下,4 h内的发酵前期,活菌数略低于对照菌株,进入稳定期之后,3个样品的活菌数趋于一致。超长发酵实验的条件下,表达菌株具有一定的自我修复能力,通过抑制产酸,控制环境pH值的改变量,从而更好的适应环境的变化,保持较高的活菌数和菌体活力。高效表达冷休克蛋白C和D的发酵体系,在发酵初期弹性模量和黏性模量均明显高于对照组。发酵后的样品,在全部的频率范围,表达菌株的弹性模量和粘性模量明显高于对照样品。表达菌株的胞外多糖产量一直明显高于对照组,这一结果可以解释质构分析结果中的差异性。(本文来源于《中国乳品工业》期刊2018年10期）
李萍萍,李明堂,赵寒冬,宋杰,黎浩扬[4]（2018）在《约翰氏不动杆菌冷休克蛋白的多克隆抗体制备》一文中研究指出构建稳定表达约翰氏不动杆菌2种Csp E家族冷休克蛋白(Csp3、Csp4)的原核表达载体,用冷休克蛋白Csp3、Csp4免疫新西兰兔,制备低温条件下约翰氏不动杆菌关键冷休克蛋白的特异性多克隆抗体。利用PCR技术扩增csp3、csp4目的基因片段,回收目的片段克隆至p ET32a表达载体,经IPTG诱导表达,利用SDSPAGE检测融合蛋白的表达情况,使用镍金属作为螯合亲和层析介质纯化融合蛋白,并将其用于免疫新西兰兔,在第4次免疫的2周后采集血清,利用Western Blot检测多克隆抗体的特异性及约翰氏不动杆菌关键冷休克蛋白的表达情况。结果表明:利用目的蛋白作为抗原制备的多克隆抗体能有效检测关键冷休克蛋白Csp3和Csp4的表达情况,可为进一步探究约翰氏不动杆菌在低温条件下关键冷休克蛋白的表达及机制研究奠定基础。(本文来源于《吉林农业大学学报》期刊2018年05期）
王娟,陈辉[5]（2018）在《华山松大小蠹冷休克结合蛋白的鉴定与表达》一文中研究指出【目的】研究华山松大小蠹冷休克结合蛋白基因和表达特性,为揭示冷休克结合蛋白基因在华山松大小蠹适应性、耐寒性分子机制奠定基础。【方法】从华山松大小蠹c DNA转录组中克隆获得的扩增序列经Blast同源比对鉴定基因,应用MEGA软件构建系统发育树和实时荧光定量PCR分析冷休克结合蛋白基因在不同低温环境与时间序列的表达特性。【结果】从华山松大小蠹cDNA转录组序列克隆出1条华山松大小蠹冷休克结合蛋白基因序列,命名为DarmCSP。Blast比对结果显示,华山松大小蠹DarmCSP与黑山大小蠹CSP最为相似,相似性达92%。经实时荧光定量PCR分析华山松大小蠹冷休克结合蛋白基因DarmCSP在越冬期间(9月—次年3月)的表达特性,发现DarmCSP在越冬期间相对表达量呈上调趋势,DarmCSP在1月的相对表达量是9月的4.26倍,3月的2.90倍。越夏成虫(7月)和越冬幼虫(1月)DarmCSP相对表达量均呈现上调表达。华山松大小蠹幼虫在-10℃1~24 h低温胁迫下,DarmCSP的相对表达量随处理时间的延长而升高,24 h时相对表达量达到最大值,而在-2、-4、-6和-8℃低温下胁迫12 h,相对表达量达到最大值,这说明0℃~-10℃低温胁迫均能诱导华山松大小蠹DarmCSP的表达。同时,越夏成虫在4℃~-6℃低温胁迫下DarmCSP也呈上调表达,但相对表达量小于越冬幼虫。【结论】华山松大小蠹冷休克结合蛋白基因DarmCSP的表达受低温诱导,参与了华山松大小蠹对低温适应过程,这对进一步研究华山松大小蠹冷休克结合蛋白信号转导途径和作用机制具有重要的价值。(本文来源于《林业科学》期刊2018年04期）
庄睿娟[6]（2018）在《冷休克蛋白RBM3对鱼藤酮诱导的PD细胞模型的保护作用及机制研究》一文中研究指出背景鱼藤酮(rotenone,ROT)是一种应用广泛的、可以引起多巴胺能神经元变性、死亡的杀虫剂。多项研究表明,外界环境中的鱼藤酮对中枢神经系统的毒性作用,可能是帕金森病(Parkinson,s disease,PD)的病因之一。RBM3是一种高度保守的RNA结合蛋白,编码157个氨基酸,由于对亚低温敏感故又被称为冷休克蛋白。RBM3可结合60S核糖体大亚基、mRNA、miRNA进而增强蛋白质的翻译。已知RBM3对多种神经毒素诱发的神经细胞凋亡具有保护作用,但在PD细胞模型中的作用尚不清楚。本研究中,我们利用ROT诱导的人神经瘤母细胞SH-SY5Y细胞凋亡作为PD的细胞模型,探讨亚低温及RBM3的神经保护作用以及凋亡过程中RBM3对细胞总蛋白合成的影响。目的1.探索在PD细胞模型中,亚低温对ROT诱导的神经毒性的保护效果;2.阐明RBM3对ROT诱导的细胞凋亡的保护效果及分子机制;3.研究ROT处理细胞后,RBM3对细胞总蛋白合成的影响。方法1.ROT对SH-SY5Y细胞凋亡的影响ROT处理SH-SY5Y细胞后,利用MTT法检测不同浓度的ROT处理细胞不同时间后对细胞的毒性。2.亚低温(32℃)对ROT诱导细胞凋亡的影响32℃诱导细胞24 h后,刺激冷休克蛋白RBM3大量表达,加入ROT诱发SH-SY5Y细胞凋亡,采用MTT法检测细胞存活率,Western blotting检测凋亡相关蛋白cleaved caspase3、cleaved PARP、Bcl2和Bax的表达情况,以及TUNEL和DAPI染色法进一步分析细胞凋亡水平。ROT处理细胞后,还对自噬标志物Beclin-1蛋白的表达情况进行分析。3.过表达RBM3对ROT诱导的细胞凋亡的影响构建pXJ40-myc-RBM3过表达质粒,转染SH-SY5Y细胞48 h,ROT处理细胞,采用MTT细胞活力法检测细胞存活率,Western blotting检测凋亡相关蛋白cleaved caspase3、cleaved PARP、Bcl2和Bax的表达情况,以及TUNEL和DAPI染色法进一步分析细胞凋亡水平。同时ROT诱导细胞后,对自噬标志物Beclin-1蛋白水平的影响。4.RBM3对ROT诱导的相关信号通路的影响ROT刺激过表达RBM3细胞组,用Western blotting法检测信号分子p38、JNK、ERK、NF-κB、AMPK和GSK-3β的磷酸化水平,以确定与哪些信号通路有关。5.利用siRNA沉默RBM3后,探讨其保护作用及机制siRNA沉默RBM3的表达,再加药处理细胞,Western blotting检测cleaved caspase3、cleaved PARP的凋亡水平和p38、JNK、ERK的磷酸化水平。6.利用MAPK特异性抑制剂验证ROT诱导细胞凋亡各种MAPK特异性抑制剂处理细胞,利用MTT,Western blotting和DAPI染色技术评价抑制剂对ROT诱导细胞凋亡的情况。7.RBM3对细胞总蛋白合成(GPS)的影响过表达RBM3,利用SUnSET技术分析其对SH-SY5Y细胞总蛋白合成的影响。Western blotting检测RBM3过表达对p-eEF2的影响,以及使用MAPK特异性抑制剂后对eEF2磷酸化的影响。结果1.ROT诱导的细胞毒性存在剂量与时间依赖性;2.亚低温对ROT诱导的SH-SY5Y细胞的神经毒性具有保护作用;3.过表达RBM3基因可模拟亚低温对ROT神经毒性的抵抗效果;4.沉默RBM3基因的表达,亚低温的神经保护作用消失;5.RBM3过表达可以明显抑制ROT诱发的MAPK信号通路的活化;6.MAPK特异性抑制剂处理细胞,可抵抗ROT诱发的细胞凋亡;7.RBM3过表达可刺激细胞总蛋白合成,该效果可能依赖于RBM3对JNK和ERK信号通路的抑制作用。结论在ROT相关的PD细胞模型中,亚低温通过刺激RBM3蛋白的大量合成,来抑制ROT诱发的细胞凋亡,从而发挥神经保护作用。通过研究RBM3神经保护的分子机制,发现RBM3通过抑制JNK、p38和ERK MAPKs信号通路发挥神经保护作用。RBM3可促进细胞总蛋白合成,且该作用可能依赖于JNK、ERK信号通路。这就为RBM3过表达或特异性诱导的策略在治疗PD等神经退行性疾病提供了初步的理论依据。(本文来源于《新乡医学院》期刊2018-04-01）
程少均,罗建锋[7]（2018）在《大剂量山莨菪碱对比多巴胺治疗冷休克中心排血量的影响》一文中研究指出目的:探讨大剂量使用山莨菪碱改善冷休克中心排血量的临床疗效。方法:60例感染性休克后期冷休克患者随机分成治疗组与对照组,每组30例。观察两组治疗前后心排血量、生命体征的变化,评估对比疗效。结果:治疗组治疗6 h后心排血量以及临床疗效优于对照组。结论:大剂量使用山莨菪碱能改善冷休克的心排血量,并改善感染性休克的预后。(本文来源于《吉林医学》期刊2018年01期）
周贺,张蕊,徐其征,麻天宇,江振华[8]（2017）在《冷休克诱导红鳍东方鲀雄核发育单倍体的条件优化》一文中研究指出为探索无需卵子失活仅用冷休克方法诱导雄核发育单倍体,以红鳍东方鲀Takifugu rubripes为研究对象,试验选用L9(34)设计,进行3因素3水平的正交试验,处理温度设为0、2、4℃,处理持续时间设为30、45、60min,处理起始时间设为2、5、8 min,共9个试验组,并对其后代采用单个胚胎染色体计数法进行染色体数目统计及微卫星分。结果表明:冷休克诱导得到的单倍体率最高为第7试验组和第9试验组,分别为受精后8min在4℃下处理30 min和受精后5min在4℃下处理60min,单倍体率分别为86.7%和80.0%;根据正交试验直观分析结果,得出冷休克诱导红鳍东方鲀雄核发育单倍体的3因素最优组合为处理温度4℃、处理持续时间60min、处理起始时间8min;影响冷休克诱导单倍体的3因素主次顺序为处理温度>处理起始时间>处理持续时间;微卫星分析结果表明,单倍体携带的遗传基因全部为父本的遗传基因。研究表明,仅用冷休克方法可以成功诱导红鳍东方鲀雄核发育单倍体,雄核发育单倍体率高达86.7%,为进一步研究诱导红鳍东方鲀雄核发育二倍体奠定了基础。(本文来源于《2017年中国水产学会学术年会论文摘要集》期刊2017-11-08）
马双平[9]（2017）在《冷休克蛋白RBM3对视黄酸诱导的神经母细胞瘤细胞凋亡的影响》一文中研究指出背景全反式视黄酸(all-trans retinoic acid,RA)是维生素A的活性代谢产物,是维生素A生物学功能的主要介导物。RA广泛分布于未成熟组织及成熟组织中,是细胞分化、细胞增殖和程序性死亡的关键调节因子,但过量服用维生素A会对神经系统存在毒副作用。冷休克蛋白RBM3是一种很重要的RNA结合蛋白,广泛参与缺氧-缺血应激、紫外照射应激、细胞增殖、骨骼肌调节、生长发育等多种生理过程,对神经细胞存在显着保护作用。本课题旨在探究RBM3对RA诱导的神经细胞凋亡的影响,并阐明其分子机制。目的1.探索亚低温对RA诱导的神经细胞凋亡的保护作用;2.详细研究RBM3对RA诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的影响极其机制。方法1.利用本实验室已经建立起来的神经细胞凋亡模型SH-SY5Y,作为研究对象。利用MTT法和流式细胞术测定不同浓度的RA的细胞存活率。2.亚低温(32℃)预先处理细胞24 h,随后利用RA诱导SH-SY5Y细胞凋亡。借助Western免疫印迹和MTT检测细胞凋亡标志物cleaved PARP和cleaved caspase 3以及细胞存活率,并结合TUNEL染色方法,分析低温是否有助于减小RA的毒性并提高细胞的存活率。3.亚低温预处理后,检测到冷休克蛋白RBM3的表达量显着上升,进而我们推测亚低温介导的神经保护效果与RBM3的大量表达有关。于是,我们在亚低温条件下,利用siRNA沉默RBM3的基因表达,再加入RA处理24 h,与对照组相比,Western印迹分析RBM3干扰效果以及凋亡标志物表达水平的变化,分析RBM3的沉默对亚低温的神经保护作用的影响。4.过表达RBM3后,进行RA处理,MTT法和Western免疫印迹技术检测细胞存活率以及凋亡标志物,分析RBM3过表达对RA诱导的细胞凋亡是否存在影响,并采用DAPI核染色分析细胞凋亡情况。同时,分析多个压力应激信号通路中的关键激酶的磷酸化水平变化,揭示哪些信号通路介导了RBM3的神经保护效果。5.利用这些信号通路中关键激酶的特异性抑制剂或激活剂来阻断或活化上一步检测到的信号通路,利用MTT法和Western免疫印迹进行探究,借此阐明RBM3对神经细胞SH-SY5Y凋亡的保护机制。结果1.研究显示,低剂量的RA可轻微促进SH-SY5Y细胞增殖,高剂量的RA(5~50μM)会诱导细胞凋亡,且呈现浓度依赖性,结果显示,20μM RA可导致50%左右的细胞凋亡,此浓度用于进一步的实验。2.研究发现,亚低温预处理可保护细胞免受RA诱导的细胞凋亡,同时伴随冷休克蛋白RBM3的表达上调,另外,RBM3基因沉默后显着降低亚低温的神经保护效果,凋亡的标志物cleaved PARP的水平亦出现明显升高。3.为进一步证实RBM3在低温保护中的作用,我们研究了RBM3过表达对RA诱发的细胞凋亡的影响。结果显示,RBM3过表达可显着降低RA对SH-SY5Y细胞的凋亡诱导。此外,RBM3过表达能够明显抑制RA对JNK和p38信号通路的活化,并显着降低RA对AMPK信号通路的抑制,加入相应的特异性阻断剂(SP600125,SB203580)以及AMPK激活剂(AICAR)后,与RA处理组相比,细胞的存活率均显着提升。结论1.亚低温可保护SH-SY5Y细胞免受RA诱导的神经细胞凋亡。2.亚低温对神经细胞的保护作用主要通过RBM3蛋白的诱导表达来实现,即RBM3是亚低温保护的关键介导因子。3.RBM3能够通过抑制JNK和p38信号通路以及激活AMPK信号通路来协同保护神经细胞,可为维生素A滥用导致的神经相关疾病提供有意义的参考。(本文来源于《新乡医学院》期刊2017-04-01）
剧飞[10]（2017）在《冷休克蛋白RBM3对NO诱导的神经细胞凋亡的保护作用及其分子机制研究》一文中研究指出背景一氧化氮(Nitric oxide,NO)作为神经系统中一种重要的信使分子,具有多种生理功能。但过量的NO就会造成神经细胞损伤,并被认为是人类神经退行性疾病的重要致病因素之一。最新研究显示,冷休克蛋白RBM3(RNA-binding motif protein3)具有很强的神经保护作用,能够保护多种应激因素造成的神经细胞凋亡。但RBM3能否保护NO诱导的神经细胞凋亡却并不清楚,其分子机制也鲜有研究。目的1.探究RBM3对神经细胞的保护作用;2.阐述RBM3保护神经细胞的分子机制。方法1.检测亚低温(32℃)处理对NO诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的影响将SH-SY5Y细胞置于32℃的环境中培养24 h后转移至正常条件下培养,在细胞培养基中加入硝普纳(Sodium nitroprusside,SNP)作为NO供体来诱导细胞凋亡。使用MTT法、DAPI核染色法以及WB印迹法检测细胞的凋亡水平。2.使用siRNA技术探究亚低温的保护作用是否依赖于RBM3将针对RBM3的特异性siRNA转染SH-SY5Y细胞后再使用32℃处理细胞24 h,转移至正常条件下培养并加入SNP处理。使用MTT法、DAPI核染色法以及WB印迹法检测细胞的凋亡水平。3.通过过表达检测RBM3对NO诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的影响将RBM3的真核表达质粒转染SH-SY5Y细胞后,在细胞培养基中加入SNP诱导细胞凋亡。使用MTT法、DAPI核染色法、流式细胞术以及WB印迹法检测细胞的凋亡水平。4.使用WB免疫印迹技术检测RBM3能够调控的信号通路过表达RBM3后在细胞培养基中加入SNP诱导细胞凋亡。使用各个信号通路中关键激酶的磷酸化抗体来检测各个信号通路的活化水平,确定哪些信号通路会受到RBM3调控。5.使用关键激酶的特异性抑制剂检测并确定步骤4的结果用关键激酶的特异性抑制剂处理正常细胞后再使用SNP诱导细胞凋亡。使用MTT法、DAPI核染色法以及WB印迹法检测细胞的凋亡水平。6.检测miR-143在RBM3保护细胞过程中发挥的作用通过过表达RBM3、亚低温处理或使用p38特异性抑制剂处理后再在细胞培养基中加入SNP诱导细胞凋亡,使用荧光定量PCR检测mi R-143的变化。7.检测miR-143对NO诱导的细胞凋亡的影响使用miR-143 mimic或miR-143 inhibitor转染SH-SY5Y细胞后再使用SNP诱导细胞凋亡,使用MTT法、DAPI核染色法以及WB印迹法检测细胞的凋亡水平。结果1.亚低温处理对NO诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有保护作用;2.使用RBM3特异性siRNA处理SH-SY5Y细胞后,亚低温对NO诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用显着降低;3.在SH-SY5Y细胞中过表达RBM3能够模拟亚低温处理对NO诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用;4.在SH-SY5Y细胞中,RBM3能够显着抑制NO诱导的p38 MAPK活化;5.使用特异性p38 MAPK抑制剂处理SH-SY5Y细胞能够模拟RBM3对NO诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用;6.RBM3能够通过调控p38 MAPK来下调亲凋亡的miR-143。结论RBM3通过调节p38 MAPK和miR-143来保护NO诱导产生的SH-SY5Y细胞凋亡。这提示我们RBM3能够在神经退行性疾病过程中发挥重要治疗作用,为退行性疾病的预防与治疗提供一条新的途径,对其他的神经系统疾病的治疗也将会有重要的参考价值。(本文来源于《新乡医学院》期刊2017-03-01）
冷休克论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景:蛛网膜下腔出血(Subarachnoid hemorrhage,SAH)是由于脑部的血管破裂出血,血液侵入蛛网膜下腔所致的一类高死亡率和高致残率的疾病,分原发性和继发性SAH。,近十几年来临床上对于SAH后血管痉挛的治疗已经有了很大的进步,但是对于SAH的预后改善尚无明显进展,常引起严重的神经功能损伤,包括脑炎性反应等引起的继发性脑损伤会直接影响到SAH患者的生活质量和生存率。SAH发生后72小时内出现的全脑直接损伤(即早期脑损伤)包括早期脑水肿、氧化应激性损害、神经细胞凋亡以及脑梗死。因此,本研究针对早期脑损伤相关的因子CIRP、及抑制剂C23蛋白、延迟继发性脑损伤相关的因子RBM3在神经细胞中的表达反应,以及如何调节此类反应因子和减轻神经元损伤的机制进行研究。方法:本课题首先从C57BL/6小鼠上获取神经元细胞,通过培养建立稳定的神经元细胞培养系,建立细胞SAH模型。通过视交叉池注血法,建立大鼠SAH模型。通过大鼠SAH模型,观察脑部颞叶皮层神经细胞的免疫荧光染色,确定CIRP和RBM3在脑内神经细胞的分布特点,使用real-time PCR和Western Blot法检测神经元细胞在SAH后不同时间点的mRNA相对表达和蛋白表达水平。利用CIRP功能抑制剂C23蛋白抑制大鼠脑内CIRP的功能,应用免疫组化、尼氏染色法、TUNEL细胞凋亡法和大鼠转棒实验,评估大鼠神经功能的损伤和恢复,观察SAH后凋亡相关蛋白、神经元凋亡和运动功能等指标的变化,探讨低温对SAH后神经细胞中CIRP和RBM3因子表达的影响和神经功能的保护作用。结果:大鼠SAH后颞叶皮层脑组织CIRP在建模后12h、1d mRNA和蛋白呈高表达,RBM3在建模后3d和7d mRNA和蛋白呈高表达,与细胞凋亡相关的Bcl-2蛋白呈低表达,Bax,caspase-3,caspase-9蛋白以及细胞色素c呈高表达。经过低温治疗后SAH大鼠都可在7天后,上述指标恢复到对照组(sham组)水平,而低温本身对正常Sham组大鼠,具有提高神经元细胞凋亡率、增加脑部组织损伤的作用。但是,SAH组的低温处理,反而抑制了神经细胞凋亡与脑组织损伤。通过免疫荧光染色,我们发现CIRP、RBM3主要在神经元细胞中表达,而星形胶质细胞只有小部分表达。因此,大鼠神经元细胞是CIRP的主要表达细胞。低温治疗过的SAH大鼠神经元细胞凋亡率明显减少,免疫组化DAB染色显示SAH+低温组的CIRP表达明显减少,尼氏染色和电镜检查都表明低温对SAH大鼠具有降低神经元细胞凋亡和恢复线粒体功能,以及提高转棒功能的作用。同时,我们发现CIRP的拮抗剂C23蛋白对于CIRP与细胞表面受体结合具有抑制作用,此抑制作用可以有效降低SAH引起的脑部神经元凋亡、减轻炎性反应,有助于恢复大鼠的运动功能。并且,从C23不同剂量组的实验结果,我们发现SAH后给予C23蛋白的最高剂量,对CIRP的抑制效果最好。结论:脑组织神经细胞内的CIRP和RBM3分别在SAH后早期和延迟继发性脑损伤时表达升高,并引起凋亡相关蛋白表达变化,诱导了神经元凋亡。低温可减少脑组织CIRP和RBM3表达,并减少凋亡相关蛋白表达,抑制神经元凋亡。在大鼠SAH模型,高剂量的C23可以减轻CIRP诱导的脑组织炎性反应,减少细胞凋亡,改善运动功能。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
冷休克论文参考文献
[1].和二斌,罗志荣.嗜热冷休克蛋白去折迭的全原子分析[J].新乡学院学报.2019
[2].代海滨.基于冷休克蛋白低温对蛛网膜下腔出血早期和延迟继发性脑损伤的保护及机制研究[D].南京大学.2019
[3].张李伟,刘畅,张英华.高效表达冷休克蛋白的乳酸菌发酵体系质构特性分析[J].中国乳品工业.2018
[4].李萍萍,李明堂,赵寒冬,宋杰,黎浩扬.约翰氏不动杆菌冷休克蛋白的多克隆抗体制备[J].吉林农业大学学报.2018
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[6].庄睿娟.冷休克蛋白RBM3对鱼藤酮诱导的PD细胞模型的保护作用及机制研究[D].新乡医学院.2018
[7].程少均,罗建锋.大剂量山莨菪碱对比多巴胺治疗冷休克中心排血量的影响[J].吉林医学.2018
[8].周贺,张蕊,徐其征,麻天宇,江振华.冷休克诱导红鳍东方鲀雄核发育单倍体的条件优化[C].2017年中国水产学会学术年会论文摘要集.2017
[9].马双平.冷休克蛋白RBM3对视黄酸诱导的神经母细胞瘤细胞凋亡的影响[D].新乡医学院.2017
[10].剧飞.冷休克蛋白RBM3对NO诱导的神经细胞凋亡的保护作用及其分子机制研究[D].新乡医学院.2017
论文知识图
