导读:本文包含了粘附连接论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:胎儿纤维连接蛋白,血清可溶性粘附分子-1,宫颈长度,早产
粘附连接论文文献综述
夏叶红,孟梅,赵晓娟,邓学东,王宏珍[1]（2018）在《胎儿纤维连接蛋白、可溶性细胞间粘附分子-1及宫颈长度早期鉴别早产的应用价值》一文中研究指出目的探讨胎儿纤维连接蛋白(fFN)、可溶性细胞间粘附分子-1 (sICAM-1)及宫颈长度在早期鉴别早产的临床应用价值。方法选取2015年1月-2017年8月在该院妇产科就诊的先兆早产孕妇86例为研究对象,分为早产组(37例)和正常组(49例),于孕24周及32周分别测定宫颈阴道分泌物f FN含量、孕妇血清s ICAM-1含量及腔内超声测量宫颈长度,观察并比较孕24周及32周时单一特征及联合预测早产的诊断效能。结果 24周及32周时,早产组与正常组间孕妇宫颈阴道分泌物f FN的表达、血清s ICAM-1含量及宫颈长度差异均存在统计学意义(均P<0. 05); 24周时f FN阳性、sICAM-1>235. 5 ng/ml及宫颈长度>25. 5 mm分别及联合预测早产可能的ROC曲线下面积分别为0. 804、0. 936、0. 867、0. 966,32周时f FN阳性、s ICAM-1>235. 5 ng/ml及宫颈长度>28. 5 mm分别及联合预测早产可能的ROC曲线下面积分别为0. 821、0. 938、0. 917、0. 970。结论中孕期、晚孕期孕妇f FN、s ICAM-1及宫颈长度的联合应用预测早产诊断效能高,临床应用潜力巨大,对中孕期高危早产孕妇可提早进行相关治疗和分娩准备,将有效降低围产期发病率和死亡率。(本文来源于《中国妇幼保健》期刊2018年23期）
王碧欧[2]（2017）在《连接粘附分子样蛋白JAML在急性肾损伤中的作用》一文中研究指出研究目的与意义急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)已成为全球性的公共健康问题,其死亡率居高不下且极易发展为慢性肾病及终末期肾病。其常见的诱因包括:肾缺血再灌注、肾毒性药物、脓毒症等。急性肾损伤的病理生理学机制十分复杂,免疫炎症反应在急性肾损伤中发挥了非常关键的作用。急性肾损伤后肾小管上皮细胞发生变性、坏死,释放损伤相关分子模式(damage associated molecular patterns,DMAP),后者被模式识别受体(pattern recognition receptor,PRRs)识别进而激活固有免疫反应。同时,肾小管上皮细胞也表现出免疫细胞的活性,一方面产生炎性介质,另一方面表达模式识别受体和主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类分子等。肾小管周围的微血管内皮细胞通透性增加,表达粘附分子,促进炎症细胞的粘附和迁移。此外,各种免疫炎症细胞在损伤区域浸润,进一步活化释放大量炎性介质,导致炎症反应放大以及肾小管上皮细胞进一步损伤。肾组织内这叁大类效应细胞相互影响,共同参与了肾脏局部固有免疫及适应性免疫功能紊乱,导致肾脏持续处于过度炎性状态,是引起急性肾损伤的主要机制。近年来,连接黏附样分子蛋白(junctional adhesion molecule-like protein,JAML,amical)在免疫细胞活化和炎症反应中的作用日益受到重视。JAML作为新型的连接黏附分子,是一种分泌性的Ⅰ型跨膜糖蛋白。其结构特点使它不仅可以介导细胞间相互作用,而且可以与细胞内蛋白结合从而介导下游信号通路。然而,JAML在急性肾损伤中是否扮演着重要角色,迄今仍未见报道。所以,探讨JAML在急性肾损伤中的作用有非常重要的意义。本课题将探讨JAML如何参与肾脏区域免疫调节,为阐明肾脏的免疫学机制,寻找新的免疫治疗靶点提供理论依据。研究方法1.JAML在肾缺血再灌注小鼠模型中的表达变化1.1体内模型的建立及JAML的检测用雄性野生型(wild type,WT)C57BL/6小鼠构建急性肾缺血再灌注模型,用蛋白质免疫印迹法(westernblot,WB)、实时荧光定量反转录聚合酶链反应法(Real-time RT-PCR)以及免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测JAML在肾缺血再灌注各组织中的表达变化;另外腹腔注射顺铂构建急性肾损伤模型,并用IHC检测JAML的表达变化。1.2 JAML与肾小管不同部位标记物共定位用组织免疫荧光法(immunofluoresce,IF)对JAML与肾小管标记物蛋白进行荧光共定位。1.3体外模型的建立及JAML的检测培养人近曲小管上皮细胞(HK-2),体外模拟肾缺血再灌注模型:糖氧剥夺法(oxygen glucose deprivation,OGD);给药抗霉素A/2-脱氧葡萄糖(AA-2DG);给药氯化钴(CoCl2)。WB检测这几种条件下HK-2细胞中JAML蛋白水平变化。另外,通过缺氧处理的HK-2细胞复氧后,用其上清处理巨噬细胞,WB检测巨噬细胞中JAML的蛋白水平变化。2.JAML在小鼠肾缺血再灌注损伤中的作用2.1野生型与JAML-/-小鼠肾脏功能学指标的对比高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography,HPLC)检测野生型与JAML-/-(JAML knockout)小鼠血清中肌酐含量。罗氏Cobas 8000全自动生化分析仪分析野生型与JAML-/-小鼠血清中尿素氮的含量。2.2野生型与JAML-/-鼠肾脏形态学损伤的对比苏木素-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)对野生型与JAML-/-小鼠的肾脏石蜡切片进行染色,并进行形态学损伤评分。原位末端转移酶标记技术(terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick-end labeling,TUNEL)检测野生型和JAML-/-小鼠肾脏细胞凋亡情况。2.3小鼠肾缺血再灌注模型炎症指标检测Real-time RT-PCR检测野生型与JAML-/-小鼠肾脏炎症因子的含量。IHC检测野生型和JAML-/-小鼠肾脏切片巨噬细胞标记蛋白CD68、中性粒细胞标记蛋白Ly6B。3.在肾缺血再灌注损伤中JAML对下游分子Clec4e的影响通过基因芯片技术分析肾缺血再灌注野生型和JAML-/-小鼠间的差异表达基因,并绘制模式识别受体家族分子热图。Real-time RT-PCR对筛选出来的基因做进一步验证。RT-PCR检测巨噬细胞与HK-2细胞中模式识别受体Clec4e的表达变化。进而,用AA/2-DG刺激HK-2细胞观察Clec4e的变化。研究结果1.JAML在肾缺血再灌注模型中的表达变化1.1小鼠肾缺血再灌注模型中JAML的表达水平显着上升RT-PCR和WB证明JAML在成年小鼠灌流干净的肾脏、脾脏、心脏、小肠、肺中均有表达;Real-time RT-PCR及WB检测小鼠肾脏中JAML表达。结果显示,JAML的mRNA水平与蛋白水平与假手术组相比显着上升,这一结果在IHC中也得到验证。1.2 JAML主要表达在肾近曲小管中IF检测发现,JAML主要表达在近曲小管中,外髓质远曲小管也有表达,髓质集合管中的表达较弱。1.3体外模型条件下JAML的蛋白水平显着升高采用叁种方法OGD、AA-2DG、CoCl2处理HK-2细胞,JAML的蛋白水平均显着升高。用缺氧处理的HK-2上清液培养巨噬细胞后,巨噬细胞中JAML蛋白水平同样升高。2.JAML在肾缺血再灌注损伤中具有促进损伤的作用缺血再灌注后,JAML-/-小鼠血清中肌酐和尿素氮低于野生型小鼠,肾脏损伤减轻,肾脏中浸润巨噬细胞和中性粒细胞数量减少,炎症因子表达下降,凋亡细胞减少。说明JAML的缺失减轻了肾缺血再灌注损伤。3.JAML调控Clec4e参与的体外缺血再灌注肾损伤通过基因芯片技术发现Clec4e和其家族个别成员在缺血再灌注损伤后表达明显上调,JAML缺失可明显恢复损伤所诱导的这些基因的表达。Real-time RT PCR证实了这一结果。RT-PCR检测发现,与巨噬细胞相比,Clec4e在HK-2细胞中基础表达量低,AA/2-DG刺激后诱导其表达升高,说明Clec4e参与了缺氧缺糖诱导的HK-2细胞损伤。结论与创新性1.首次对JAML在急性肾损伤中的表达变化进行表征:肾缺血再灌注损伤小鼠肾脏中JAML的表达显着升高,且这一结果也在顺铂诱导的急性肾损伤模型中得到证实。2.首次证明JAML促进了肾缺血再灌注损伤的发生发展。因此,下调JAML的表达可抑制肾缺血再灌注损伤的发生发展和减轻炎症反应。3.初步探讨了 JAML促进肾缺血再灌注损伤发生发展的机制,证明其对下游模式识别受体Clec4e的正调控作用。综上所述,本课题有助于进一步阐明JAML诱导急性肾损伤的病理生理学机制,一方面为防治急性肾损伤提供潜在药物靶点,另一方面,JAML将有可能作为急性肾损伤发生和发展检测的重要指标。(本文来源于《山东大学》期刊2017-05-17）
宋小珍[3]（2017）在《Par3-aPKC与Vangl2相互作用并参与调节E-cadherin-based粘附连接和管腔化形成》一文中研究指出目的与意义细胞极性是指因胞内物质和细胞器等的不对称分布而造成的细胞形态和结构的不对称性。上皮细胞是构成神经管、消化道等组织的一类特化的极性细胞,具有两种轴向的极性:顶底端极性(apical-basal polarity,ABP)和平面细胞极性(planar cell polarity,PCP)。这类上皮细胞在发育过程中通常形成管腔性结构。ABP通路和PCP通路均由极性蛋白复合物组成。Par3是ABP极性通路最关键的核心蛋白,其突变或缺失会造成多囊肾等管腔形态异常疾病。我们课题组既往研究发现人PARD3罕见致病突变涉及人脑颅神经管缺陷发病机制。Vangl2是PCP极性通路最关键的核心蛋白,其突变或缺失会造成神经管闭合缺陷等管腔异常。E-cadherin是介导细胞粘附连接的经典的粘附分子,也是上皮细胞极性建立和维持的基础,其分布异常会造成神经管闭合缺陷。既往关于ABP通路和PCP通路的研究多独立研究分别阐述,在对果蝇和非洲爪蟾的研究中发现两条通路中部分蛋白存在相互结合,但至今对两条通路,尤其是通路中对管腔化形成最关键的核心蛋白Par3和Vangl2间的相互作用在哺乳动物未见报道。本研究首先探索了 PCP通路核心蛋白Vangl2与ABP通路核心蛋白Par3-aPKC复合物在哺乳动物上皮细胞中是否存在相互作用关系及Par3、Vangl2对E-cadherin-based细胞间粘附连接的调控作用。进而应用体外3D培养细胞模型进一步探索了极性蛋白Vangl2、Par3、粘附分子E-cadherin的表达、分布对管腔化形成的影响。以期通过对管腔形成过程中极性蛋白分子作用的了解进一步探寻管腔化异常疾病神经管闭合缺陷等病症的发病机制。材料与方法1.首先免疫荧光法检测哺乳动物神经上皮细胞形成的管腔性结构和3D培养MDCK细胞形成的管腔性结构中Vangl2与Par3-aPKC的定位表达;利用2D培养的MDCK细胞检测Vangl2与Par3-aPKC的共定位表达情况;采用免疫共沉淀(COIP)、GST-pulldown法检测Vangl2与Par3-aPKC间相互作用;2.利用慢病毒介导RNAi技术分别沉默Par3和Vangl2的表达,筛选获得Par3、Vangl2基因沉默稳定细胞株,结合Real-timePCR、免疫荧光,蛋白印迹多种方法分析Par3敲减对Vangl2表达与定位的影响以及Vangl2敲减对Par3表达与定位的影响;3.基于E-cadherin-based细胞间粘附连接在管腔化形成中的重要性,我们针对Par3的敲减细胞模型,利用免疫荧光、COIP、Transwell实验、细胞迁移实验检测Par3、Vangl2对E-cadherin-based粘附连接的调节作用;4.针对Par3的敲减细胞模型,利用体外3D培养技术模拟管腔化形成,检测Par3、Vangl2和E-cadherin对管腔化形成的影响。结果1.Par3-aPKC与Vangl2富集表达于管腔性结构的顶端,并在哺乳动物极性上皮细胞中存在共定位表达和相互作用。2.Par3敲减不影响Vangl2蛋白及mRNA水平的表达,但可以调节Vangl2的膜定位。3.哺乳动物上皮细胞中Par3、Vangl2和E-cadherin相互结合形成蛋白复合物,并且Par3、Vangl2参与调节E-cadherin-based粘附连接的形成。4.Par3敲减引起3D培养的MDCK细胞形成异常的多囊性和顶端扩张型管腔形态,同时影响Vangl2和E-cadherin在管腔结构中的定位表达。5.在Par3敲减的细胞中过表达Par3与Vangl2可以恢复正常管腔化形成。结论1.哺乳动物极性上皮细胞中PCP通路核心蛋白Vangl2与ABP通路核心蛋白复合物Par3-aPKC存在相互作用,且Par3调控Vangl2的亚细胞定位。2.Par3敲减破坏E-cadherin-based粘附连接的形成,引起Vangl2、E-cadherin蛋白细胞膜顶端部位分布减少并影响Vangl2和E-cadherin间复合体的形成,而细胞顶端区域Par3、Vangl2、E-cadherin的减少和相互作用的破坏可能参与引起异常的管腔化形态。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2017-05-01）
伍婷婷[4]（2017）在《白术多糖通过多胺和Ca~(2+)调节IEC-6细胞迁移及粘附连接蛋白的研究》一文中研究指出研究背景胃肠黏膜损伤是脾虚证的临床表现之一,益气健脾是脾虚证的主要治法,胃肠黏膜保护是益气健脾中药的重要作用之一,含白术的益气健脾方剂如四君子汤、补中益气汤、参苓白术散等对胃肠黏膜损伤有修复作用。胃肠黏膜损伤修复过程包括上皮细胞迁移、增殖、分化、黏附连接和黏膜重建等环节,多胺对此过程是必需的且是焦点指标。本课题组前期研究发现,益气健脾中药黄芪、白术、党参、甘草及四君子汤的提取物(多糖、黄酮提取物等)能促进小肠上皮(IEC-6)细胞迁移,提高多胺及其信号通路指标水平,并对相关抑制剂的抑制有逆转作用,尤其提高细胞内钙离子水平([Ca~(2+)]_(cyt))是关键指标之一;益气健脾中药提取物(黄芪、白术、党参、甘草的多糖提取物及四君子汤水提物等)有防治大鼠应激性溃疡的作用,作用机制与其影响胃或小肠黏膜多胺(精脒)含量有关;还对提取分离纯化得到的白术多糖样品进行了化学结构表征。本研究在此基础上,选择已经过结构表征的白术多糖样品为受试药,观察其对IEC-6细胞迁移、钙离子水平、细胞黏附连接蛋白表达的影响,为探讨益气健脾中药白术胃肠黏膜损伤修复作用机制提供参考。研究目的观察白术多糖对小肠上皮IEC-6细胞迁移、钙离子水平([Ca~(2+)]_(cyt))和细胞黏附连接蛋白(E-钙黏蛋白、α-连环蛋白、β-连环蛋白)表达的影响,为探讨益气健脾中药白术胃肠黏膜损伤修复作用机制提供参考。研究方法(1)划痕法复制细胞迁移模型。(2)流式细胞仪检测[Ca~(2+)]_(cyt)。(3)HE染色法观察IEC-6细胞形态。(4)WesternBlot 法检测 E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-连环蛋白(α-catenin)、β-连环蛋白(β-catenin)表达。(5)免疫荧光法观察 E-cadherin、α-catenin、β-catenin 蛋白表达。研究结果(1)白术多糖对细胞迁移的影响①含钙培养条件下,白术多糖(25或50或100mg·L~(-1),下同)能促进细胞迁移,逆转DFMO(多胺合成抑制剂)所致细胞迁移的抑制,提示白术多糖促进细胞迁移的作用与其影响细胞多胺有关。②无钙培养条件下(以不含Ca~(2+)的培养液代替常规含Ca~(2+)培养液)可致细胞迁移抑制(与含钙培养对照组比较P<0.01),白术多糖在无钙培养时对细胞迁移无明显影响(与无钙培养对照组比较P>0.05),提示若去除胞Ca~(2+)内流途径,则白术多糖对细胞迁移的作用明显减弱。(2)白术多糖对细胞迁移过程[Ca~(2+)]_(cyt)的影响①含钙培养条件下,白术多糖能提高细胞迁移过程[Ca~(2+)]_(cyt),逆转DFMO所致的[Ca~(2+)]_(cyt)降低。②无钙培养条件下,[Ca~(2+)]_(cyt)明显降低(与含钙对照组比较P<0.05);白术多糖对无钙培养所致的[Ca~(2+)]_(cyt)降低无明显影响(与无钙对照组比较P>0.05)。提示若去除胞Ca~(2+)内流途径,则白术多糖对[Ca~(2+)]_(cyt)的作用明显减弱;结合白术多糖在无钙培养条件下对细胞迁移作用明显减弱的结果,提示白术多糖促进细胞迁移和提高[Ca~(2+)]_(cyt)的作用可能与影响胞外Ca~(2+)内流有关。(3)白术多糖对细胞形态的影响含钙培养条件下,细胞与细胞之间边缘突起较明显,胞浆丰富,胞核较大,核仁增生活跃;无钙培养条件下,细胞与细胞之间连接比较平滑,胞浆丰富,细胞核较大,核仁增生活跃。提示含钙培养与无钙培养对细胞形态的影响较小,两者之间虽细胞形态稍有改变,但无本质区别。白术多糖可稍微改变无钙培养所致的细胞之间较平滑的连接,可产生较短的细胞边缘突起,但无法使细胞边缘突起恢复至有钙培养的形态。提示白术多糖对无钙培养条件下细胞形态的影响轻微。(4)白术多糖对细胞粘附连接蛋白表达的影响对E-钙黏蛋白表达的影响:白术多糖可提高E-钙黏蛋白表达,逆转DFMO所致E-钙黏蛋白抑制,但不可逆转无钙培养所致的E-钙黏蛋白表达抑制;提示白术多糖通过提高[Ca~(2+)]_(cyt)而增加E-钙黏蛋白表达,其途径可能主要通过胞外Ca~(2+)内流。对α-连环蛋白表达的影响:白术多糖可提高α-连环蛋白表达,逆转DFMO负荷和无钙培养所致的α-连环蛋白表达抑制。对β-连环蛋白表达的影响:白术多糖可提高β-连环蛋白表达;DFMO对β-连环蛋白表达有轻微抑制作用,白术多糖对DFMO所致的β-连环蛋白表达降低有改善作用;无钙培养对β-连环蛋白表达无明显影响,白术多糖对β-连环蛋白表达也无明显影响。白术多糖对粘附连接蛋白表达影响的结果表明:①正常含钙培养时,白术多糖可提高细胞迁移过程E-钙黏蛋白、α-连环蛋白和β-连环蛋白表达;②含钙培养加DFMO负荷时,白术多糖可逆转DFMO所致的E-钙黏蛋白、α-连环蛋白和β-连环蛋白表达降低,且对前两种蛋白的作用更明显;③无钙培养时,白术多糖对E-钙黏蛋白和β-连环蛋白表达无明显影响,但可使α-连环蛋白表达维持在含钙培养的正常水平。综上结果,提示白术多糖对粘附连接蛋白表达的影响与目标蛋白的特点及不同负荷条件产生的影响有关。研究结论白术多糖可通过多胺和钙离子调节以促进细胞迁移及黏附连接蛋白(E-cadherin、α-catenin、β-catenin)表达,研究结果为探讨益气健脾中药白术胃肠粘膜保护作用机制提供了参考。(本文来源于《广州中医药大学》期刊2017-04-01）
杜京奚,张雅君,段云友,袁丽君[5]（2016）在《动脉粥样硬化斑块稳定性与连接粘附分子A相关性的实验研究》一文中研究指出目的:研究鼠颈动脉粥样硬化斑块稳定性与连接粘附分子A(JAM-A)表达之间的关系。方法:选取8周,雄性Apolipoprotein E-knockout(ApoE-/-)小鼠26只,其中正常组(A组)6只,结扎高脂组(B组)10只,高脂组(C组)10只。24周后,超声(22MHz)检测各组小鼠斑块形成情况,观察斑块内部回声、大小改变:综合斑块处巨噬细胞标记物(CD68)、脂质沉积(油红0染色)、胶原纤维(Masson染色)及平滑肌细胞(α-SMA)数量,利用斑块不稳定指数评价斑块稳定性后进行再分组:易损斑块组(D组)、稳定斑块组(E组);用免疫组化方法检测局部JAM-A的表达,并用Spearman相关系数等统计学方法分析粥样硬化斑块稳定性与粘附分子JAM-A表达之间的关系。结果:超声检查中A组小鼠颈动脉光滑,无斑块形成,B组和C组小鼠颈动脉管壁明显增厚,回声增强,其中45%的小鼠似有斑块稍强回声,25%的小鼠有明显斑块稍强回声,且B组、C组管壁均明显厚于A组(P<0.05),B组和C组之间无明显统计学差异;血脂检测中A组小鼠血脂四项(总胆固醇、甘油叁酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白)均正常,B组和C组小鼠总胆固醇、甘油叁酯和低密度脂蛋白均明显高于A组差异有统计学意义(P<0.05),高密度脂蛋白则明显低于A组差异有统计学意义(P<0.05);各项病理检查中A组小鼠颈动脉管壁结构正常,未见异常染色着色,B组和C组小鼠颈动脉管壁结构均发生病理改变,染色结果均显示有动脉粥样硬化斑块形成;再分组后,D组不稳定指数(2.53±0.25)比E组(1.53±0.44)高(P<0.01);A组小鼠中几乎不表达JAM-A,D组和E组小鼠JAM-A表达明显增多,且D组比E组多(4.05±0.86)%(P<0.01);斑块不稳定指数与斑块JAM-A表达的相关系数为0.719(P<0.01)。结论:高频超声探头(22MHz)可观测小鼠颈动脉斑块的形成;动脉粥样硬化斑块形成时,易损性斑块中JAM-A的表达明显增多,提示JAM-A可能作为一个新的判断斑块稳定性的指标。(本文来源于《中国超声医学工程学会第十叁届全国超声心动图学术会议论文汇编》期刊2016-11-18）
官娟[6]（2016）在《连接粘附分子样蛋白JAML在动脉粥样硬化发生和发展中的作用》一文中研究指出研究目的：动脉粥样硬化(Atherosclerosis, AS)是严重危害人类健康的心脑血管疾病的主要病理基础,其发病机制复杂且尚不完全清楚。越来越多的研究认为AS是一种血管受损后发生的免疫炎症过程。连接粘附分子样蛋白(Junction adhesion molecule-like protein, JAML, Amical)是新近发现的连接粘附分子(Junctional adhesion molecules, JAMs)家族成员,属于分泌性的Ⅰ型跨膜糖蛋白。现有研究表明,JAML主要分布于中性粒细胞、单核/巨噬细胞和多种T细胞等免疫细胞中,通过调节单核细胞的粘附和跨内皮迁移、γδT细胞释放炎症因子和生长因子,在免疫调控、炎症反应和损伤修复中发挥着重要作用。但是,JAML是否参与了AS这种炎症性疾病的发生和发展的病理过程,是否对AS斑块中的炎症反应和巨噬细胞功能具有调控作用,至今尚未见报道。因此,本课题从体内和体外两个方面探讨JAML在AS发生和发展以及对巨噬细胞功能的调节作用,从而为防治AS提供新的药物治疗靶点。研究方法：1.体内实验检测JAML在AS斑块中的表达及变化实验采用冠状动脉粥样硬化性心脏病患者的有明显狭窄和有少量斑块的冠状动脉,用免疫组织化学法观察JAML的分布情况和表达变化；免疫荧光双标法和激光共聚焦技术检测JAML在斑块内的表达和具体细胞定位。采用ApoE基因敲除(Apolipoprotein E gene knockout, ApoE-/-)合并高脂饮食制备的AS模型小鼠及其遗传背景C57BL/6小鼠作为实验对照,利用蛋白免疫印迹法检测JAML在AS斑块组织内表达水平的变化。2.体内实验探讨JAML在AS发生和发展过程中的作用及对斑块内炎症反应和NF-κB信号通路的调节实验利用ApoE-/-小鼠分别制备早期AS斑块模型和晚期AS易损斑块模型,两种实验动物模型均采用慢病毒转染的方法分别转染目的基因JAML shRNA或转染对照shRNA。每组动物采用酶法检测血清中总胆固醇(Total cholesterol, TC)、甘油叁酯(Triglyceride, TG)、低密度脂蛋白(Low-density lipoprotein, LDL)和高密度脂蛋白(High density lipoprotein,HDL)水平；利用大体油红O染色测定主动脉的斑块面积；冰冻切片进行苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin, HE)染色、油红O染色、免疫组织化学染色、天狼猩红染色分别检测斑块面积、脂质含量、巨噬细胞浸润、平滑肌细胞以及胶原含量,并最终计算斑块的易损指数；免疫组织化学方法检测斑块组织中炎症因子白介素(Interleukin-6, IL-6)、肿瘤坏死因子α (Turner necrosis factor-α, TNFα)的表达水平；蛋白免疫印迹技术检测磷酸化p65表达水平观察核因子KB(Neuclear factor-kappa B, NF-κB)信号通路的活化情况。3.体外实验验证JAML在oxLDL活化的单核/巨噬细胞中的作用及对NF-κB信号通路的调控选取可以代表斑块内主要细胞成分的原代脐静脉内皮细胞、人外周血单核细胞、小鼠单核/巨噬细胞RAW 264.7和平滑肌细胞株,采用反转录-聚合酶链式反应(Reverse transcription-PCR, RT-PCR)技术检测了JAML基因的表达水平；小鼠单核/巨噬细胞株RAW 264.7给予不同浓度或不同时间点的氧化型低密度脂蛋白(Oxidized-low density lipoprotein,oxLDL)、脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)、 TNFα不同刺激物刺激,蛋白免疫印迹法检测JAML的表达变化；采用小干扰RNA脂质体瞬时转染技术沉默巨噬细胞中JAML的表达,实时定量RT-PCR方法检测oxLDL刺激的巨噬细胞中炎症因子IL-6、TNF-α、IL-1β、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1, MCP-1)、IL-10 mRNA水平的变化,并且用蛋白免疫印迹的方法检测磷酸化p65的表达观察NF-κB信号通路的活化情况。结果：1.体内实验表明,与有少量斑块的冠状动脉相比,具有明显狭窄的AS患者的斑块组织内JAML的表达量明显升高；免疫荧光双标结果显示JAML在斑块内的巨噬细胞中表达较为丰富,在斑块内其他两种主要细胞成分—内皮细胞和平滑肌细胞中也有少量表达。同样的结果也在小鼠AS模型中得到了进一步的证实,与正常C57BL/6小鼠相比,ApoE-/-AS模型小鼠主动脉中JAML的表达明显上调。2.动物实验进一步证实,早期和晚期两种AS斑块模型均表现为JAML基因沉默与对照组相比,体重无统计学差异,同时血清学检测显示小鼠TC、TG、LDL和HDL水平也无显着性差异；主动脉大体油红O染色显示JAML基因沉默可以明显减少早期AS斑块的形成；各种病理学和免疫组织化学染色显示干扰JAML表达可以减少早期和晚期斑块内的脂质含量和巨噬细胞浸润,增加平滑肌细胞以及胶原含量,最终降低斑块的易损指数,稳定斑块；免疫组织化学染色显示JAML基因缺陷可以明显减轻斑块组织中炎症因子IL-6、TNF-α的表达和NF-κB信号通路的激活。3.体外实验进一步验证了JAML在斑块组织内的细胞定位；用oxLDL或TNF-α刺激巨噬细胞,JAML蛋白表达呈现明显的浓度和时间依赖性的升高,但LPS对JAML的表达量无明显影响。进一步实验结果显示,下调巨噬细胞JAML的表达水平,可明显降低oxLDL刺激所导致的IL-6、TNF-α的mRNA水平的升高,但是对IL-1p、MCP-1、IL-10的mRNA水平的影响无统计学差异；另外,干扰JAML蛋白表达也可以抑制NF-κB信号通路的活化。结论与创新性：1.首次检测了JAML在AS斑块中的表达和细胞定位。证实了JAML在AS斑块中表达升高,且主要在巨噬细胞中表达,在内皮细胞和平滑肌细胞中也有少量表达,提示JAML有可能参与了AS斑块内多种细胞成分的功能调节。2.首次证明了JAML促进AS的发生和发展过程,因此,下调JAML的表达可以抑制AS斑块的形成,减轻斑块中的炎症反应,增加晚期AS斑块的稳定性。3.初步探讨了JAML促进AS发生和发展的机制,验证了JAML可以加重AS斑块中巨噬细胞的功能紊乱,导致巨噬细胞分泌炎症因子增多及NF-κB信号通路的活化。综上所述,本课题一方面将为防治AS提供新的药物治疗靶点,揭示针对JAML的靶向治疗有可能成为临床防治AS特别是抗炎治疗的新的治疗策略；另一方面,JAML作为一种分泌性蛋白将有可能作为AS斑块早期诊断和晚期稳定性监测的重要指标。(本文来源于《山东大学》期刊2016-05-19）
齐康,杨跃进,李向东,李清,崔贺贺[7]（2014）在《通心络缩小糖尿病心肌梗死范围与PPAR-alpha通路介导的粘附连接完整性改善有关》一文中研究指出目的:缺血再灌注导致微血管屏障结构和功能破坏,引起炎症失控和缺血/再灌注损伤。高糖可破坏内皮屏障,可加重心肌缺血/再灌注损伤。通心络是否通过保护心脏微血管内皮细胞减轻糖尿病心肌再灌注损伤尚不清楚。本研究通过在体和离体试验拟证实通心络的心肌保护作用和机制。方法:人心脏微血管内皮细胞(HCMECs)分别在正糖(本文来源于《中国心脏大会2014论文汇编》期刊2014-08-07）
张守超[8]（2013）在《激活的Rap1和H-Ras对E-Cadherin介导的细胞间粘附连接的调节》一文中研究指出粘附连接是E-cadherin（E-钙粘蛋白）介导的上皮细胞间粘附结构，其胞外部分是反式相互作用的E-钙粘蛋白，胞内通过p120-连环蛋白(p120-catenin)、β-连环蛋白(β-catenin)结合到肌动蛋白细胞骨架上。粘附连接不仅将相邻细胞依次连接起来，维持上皮细胞正常的形态和极性，而且参与细胞间及胞内的信号转导，具有抑制肿瘤发生和转移的功能。Ras家族小分子量G蛋白对E-钙粘蛋白有重要的调节作用，Rap1调控E-钙粘蛋白介导的粘附连接的形成和定位，但此过程中Rap1作用的下游信号通路仍是未知的。有文献报道抑制H-Ras的活性能增强E-钙粘蛋白的表达，小鼠胚胎成纤维细胞缺乏H-Ras时表现出较低的增殖和迁移能力，但H-Ras对E-钙粘蛋白是否具有调节作用尚未定论。为阐明Rap1和H-Ras能否协同或拮抗地调节E-钙粘蛋白介导的粘附连接的形成，我们使用Ca~(2+)开关模拟粘附连接解体和重建模型，利用GST-Pull down技术研究了Rap1和H-Ras活性在粘附连接重建过程中的变化规律，发现MCF-7细胞中Rap1和H-Ras在Ca~(2+)饥饿引起的粘附连接解离时均被激活。此外，通过Co-IP技术研究了Rap1和H-Ras在粘附连接重建过程中相互作用蛋白的变化情况，通过FRET技术研究了Rap1和H-Ras在细胞内被激活的位置，研究发现，Rap1和H-Ras的激活均与Ca~(2+)开关实验介导的粘附连接重建有关。Rap1调节E-钙粘蛋白的候补下游因子主要是一些细胞骨架蛋白、细胞骨架调节蛋白以及小分子量G蛋白的GAPs，H-Ras调节E-钙粘蛋白的下游因子可能也包括一些细胞骨架蛋白。Rap1起始活化时核周围的活化水平高于细胞膜处，细胞膜和胞质中的H-Ras活性化水平均在粘附连接解体时上升，粘附连接重建时下调。通过本课题的研究，我们能够进一步了解Rap1和H-Ras之间的联系以及调控E-钙粘蛋白介导的细胞间粘附连接的分子机理。(本文来源于《哈尔滨工业大学》期刊2013-06-01）
解智慧,杨海,张钰,郝佳洁,王明荣[9]（2013）在《KIAA1522,一种新的调控食管癌细胞凋亡过程的粘附连接蛋白》一文中研究指出食管癌发生发展的分子机制尚待阐明。我们最近研究发现一个新的调控食管癌细胞凋亡过程的粘附连接蛋白KIAA1522。编码该蛋白的基因定位于人类染色体1p35.1,已发现四种不同的转录本,可产生四个isform蛋白,大小分别为1094、1046、1035和143个氨基酸。Pubmed上显示KIAA1522是一个功能未知的蛋白。我们在食管癌组织和食管癌细胞系中均检测到四种(本文来源于《细胞—生命的基础——中国细胞生物学学会2013年全国学术大会·武汉论文摘要集》期刊2013-04-19）
于生金,樊建慧,柳林华,张丽君,李楠洋[10]（2012）在《Caveolin-1上调小鼠肝癌细胞与fibronectin的粘附依赖于α-2,6连接唾液酸结构的增加》一文中研究指出目的:陷窝蛋白-1(Caveolin-1)是胞膜窖的主要结构和功能成分,目前认为,其在肝癌中发挥癌基因样作用。α-2,6连接唾液酸结构由α-2,6唾液酰基转移酶-I(ST6Gal-I)催化形成,ST6Gal-I在人肝癌组织中表达水平显着增加。本实验旨在探讨Caveolin-1及α-2,6连接唾液酸结构在小鼠肝癌细胞与细胞外基质粘附过程中发挥的作用及具体的机制。材料和方法:构建稳定表达Caveolin-1的Hepa1-6细胞系(Hepa1-6/Cav-1);利用siRNA表达载体下调Hca-F细胞中Caveolin-1表达;通过siRNA下调Hca-F细胞中ST6Gal-I表达;Real-time PCR分析ST6Gal-I的mRNA水平;Western blot分别检测Caveolin-1、ST6Gal-I、FAK、ERK的总蛋白水平及FAK和ERK的磷酸化水平;Lectin blot检测α-2,6连接唾液酸结构;细胞粘附实验分析细胞粘附能力的改变。结果和分析:Hca-F细胞中高表达Caveolin-1和ST6Gal-I,Hepal-6细胞中Caveolin-1表达缺失并低表达ST6Gal-I。通过RNA干扰技术下调Hca-F中Caveolin-1后,α-2,6连接唾液酸水平明显减少并抑制了Hca-F细胞与纤连蛋白(fibronectin)的粘附及局部粘着斑激酶(FAK)粘附信号;相反,在Hepa1-6细胞中稳定表达Caveolin-1(Hepal-6/Cav-1)后,显着上调了α-2,6连接唾液酸结构及fibronectin介导的细胞FAK磷酸化水平。进一步研究表明,通过siRNA下调Hca-F细胞的ST6Gal-I表达或利用唾液酸酶降解Hepal-6/Cav-1细胞中α-2,6连接唾液酸结构后,明显抑制了fibronectin依赖的细胞粘附及FAK的磷酸化。结论:Caveolin-1能够上调小鼠肝癌细胞α-2,6连接唾液酸结构;Caveolin-1通过增加α-2,6连接唾液酸水平促进细胞与fibronectin的粘附并活化FAK信号。(本文来源于《第叁届泛环渤海（七省二市）生物化学与分子生物学会——2012年学术交流会论文集》期刊2012-08-06）
粘附连接论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
研究目的与意义急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)已成为全球性的公共健康问题,其死亡率居高不下且极易发展为慢性肾病及终末期肾病。其常见的诱因包括:肾缺血再灌注、肾毒性药物、脓毒症等。急性肾损伤的病理生理学机制十分复杂,免疫炎症反应在急性肾损伤中发挥了非常关键的作用。急性肾损伤后肾小管上皮细胞发生变性、坏死,释放损伤相关分子模式(damage associated molecular patterns,DMAP),后者被模式识别受体(pattern recognition receptor,PRRs)识别进而激活固有免疫反应。同时,肾小管上皮细胞也表现出免疫细胞的活性,一方面产生炎性介质,另一方面表达模式识别受体和主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类分子等。肾小管周围的微血管内皮细胞通透性增加,表达粘附分子,促进炎症细胞的粘附和迁移。此外,各种免疫炎症细胞在损伤区域浸润,进一步活化释放大量炎性介质,导致炎症反应放大以及肾小管上皮细胞进一步损伤。肾组织内这叁大类效应细胞相互影响,共同参与了肾脏局部固有免疫及适应性免疫功能紊乱,导致肾脏持续处于过度炎性状态,是引起急性肾损伤的主要机制。近年来,连接黏附样分子蛋白(junctional adhesion molecule-like protein,JAML,amical)在免疫细胞活化和炎症反应中的作用日益受到重视。JAML作为新型的连接黏附分子,是一种分泌性的Ⅰ型跨膜糖蛋白。其结构特点使它不仅可以介导细胞间相互作用,而且可以与细胞内蛋白结合从而介导下游信号通路。然而,JAML在急性肾损伤中是否扮演着重要角色,迄今仍未见报道。所以,探讨JAML在急性肾损伤中的作用有非常重要的意义。本课题将探讨JAML如何参与肾脏区域免疫调节,为阐明肾脏的免疫学机制,寻找新的免疫治疗靶点提供理论依据。研究方法1.JAML在肾缺血再灌注小鼠模型中的表达变化1.1体内模型的建立及JAML的检测用雄性野生型(wild type,WT)C57BL/6小鼠构建急性肾缺血再灌注模型,用蛋白质免疫印迹法(westernblot,WB)、实时荧光定量反转录聚合酶链反应法(Real-time RT-PCR)以及免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测JAML在肾缺血再灌注各组织中的表达变化;另外腹腔注射顺铂构建急性肾损伤模型,并用IHC检测JAML的表达变化。1.2 JAML与肾小管不同部位标记物共定位用组织免疫荧光法(immunofluoresce,IF)对JAML与肾小管标记物蛋白进行荧光共定位。1.3体外模型的建立及JAML的检测培养人近曲小管上皮细胞(HK-2),体外模拟肾缺血再灌注模型:糖氧剥夺法(oxygen glucose deprivation,OGD);给药抗霉素A/2-脱氧葡萄糖(AA-2DG);给药氯化钴(CoCl2)。WB检测这几种条件下HK-2细胞中JAML蛋白水平变化。另外,通过缺氧处理的HK-2细胞复氧后,用其上清处理巨噬细胞,WB检测巨噬细胞中JAML的蛋白水平变化。2.JAML在小鼠肾缺血再灌注损伤中的作用2.1野生型与JAML-/-小鼠肾脏功能学指标的对比高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography,HPLC)检测野生型与JAML-/-(JAML knockout)小鼠血清中肌酐含量。罗氏Cobas 8000全自动生化分析仪分析野生型与JAML-/-小鼠血清中尿素氮的含量。2.2野生型与JAML-/-鼠肾脏形态学损伤的对比苏木素-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)对野生型与JAML-/-小鼠的肾脏石蜡切片进行染色,并进行形态学损伤评分。原位末端转移酶标记技术(terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick-end labeling,TUNEL)检测野生型和JAML-/-小鼠肾脏细胞凋亡情况。2.3小鼠肾缺血再灌注模型炎症指标检测Real-time RT-PCR检测野生型与JAML-/-小鼠肾脏炎症因子的含量。IHC检测野生型和JAML-/-小鼠肾脏切片巨噬细胞标记蛋白CD68、中性粒细胞标记蛋白Ly6B。3.在肾缺血再灌注损伤中JAML对下游分子Clec4e的影响通过基因芯片技术分析肾缺血再灌注野生型和JAML-/-小鼠间的差异表达基因,并绘制模式识别受体家族分子热图。Real-time RT-PCR对筛选出来的基因做进一步验证。RT-PCR检测巨噬细胞与HK-2细胞中模式识别受体Clec4e的表达变化。进而,用AA/2-DG刺激HK-2细胞观察Clec4e的变化。研究结果1.JAML在肾缺血再灌注模型中的表达变化1.1小鼠肾缺血再灌注模型中JAML的表达水平显着上升RT-PCR和WB证明JAML在成年小鼠灌流干净的肾脏、脾脏、心脏、小肠、肺中均有表达;Real-time RT-PCR及WB检测小鼠肾脏中JAML表达。结果显示,JAML的mRNA水平与蛋白水平与假手术组相比显着上升,这一结果在IHC中也得到验证。1.2 JAML主要表达在肾近曲小管中IF检测发现,JAML主要表达在近曲小管中,外髓质远曲小管也有表达,髓质集合管中的表达较弱。1.3体外模型条件下JAML的蛋白水平显着升高采用叁种方法OGD、AA-2DG、CoCl2处理HK-2细胞,JAML的蛋白水平均显着升高。用缺氧处理的HK-2上清液培养巨噬细胞后,巨噬细胞中JAML蛋白水平同样升高。2.JAML在肾缺血再灌注损伤中具有促进损伤的作用缺血再灌注后,JAML-/-小鼠血清中肌酐和尿素氮低于野生型小鼠,肾脏损伤减轻,肾脏中浸润巨噬细胞和中性粒细胞数量减少,炎症因子表达下降,凋亡细胞减少。说明JAML的缺失减轻了肾缺血再灌注损伤。3.JAML调控Clec4e参与的体外缺血再灌注肾损伤通过基因芯片技术发现Clec4e和其家族个别成员在缺血再灌注损伤后表达明显上调,JAML缺失可明显恢复损伤所诱导的这些基因的表达。Real-time RT PCR证实了这一结果。RT-PCR检测发现,与巨噬细胞相比,Clec4e在HK-2细胞中基础表达量低,AA/2-DG刺激后诱导其表达升高,说明Clec4e参与了缺氧缺糖诱导的HK-2细胞损伤。结论与创新性1.首次对JAML在急性肾损伤中的表达变化进行表征:肾缺血再灌注损伤小鼠肾脏中JAML的表达显着升高,且这一结果也在顺铂诱导的急性肾损伤模型中得到证实。2.首次证明JAML促进了肾缺血再灌注损伤的发生发展。因此,下调JAML的表达可抑制肾缺血再灌注损伤的发生发展和减轻炎症反应。3.初步探讨了 JAML促进肾缺血再灌注损伤发生发展的机制,证明其对下游模式识别受体Clec4e的正调控作用。综上所述,本课题有助于进一步阐明JAML诱导急性肾损伤的病理生理学机制,一方面为防治急性肾损伤提供潜在药物靶点,另一方面,JAML将有可能作为急性肾损伤发生和发展检测的重要指标。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
粘附连接论文参考文献
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标签：胎儿纤维连接蛋白; 血清可溶性粘附分子-1; 宫颈长度; 早产;