利用CRISPR/Cas9系统构建致死基因全身性敲除小鼠模型

论文摘要

研究背景:CRISPR/Cas9技术具有实验周期短和编辑效率高的优势,已广泛运用到基因编辑和基因敲除小鼠模型的构建中。但是,由于致死基因缺失会导致动物死亡,利用一般的CRISPR/Cas9技术通常造成致死基因全身性敲除的首建鼠（F0代）无法出生或性成熟前死亡。研究方法:本研究开发了一种可传代繁育的致死基因全身性敲除小鼠模型的制备方法。（1）利用生物信息学系统设计构建致死基因CRISPR/Cas9系统元件;（2）将受精卵体外培养发育至二细胞期进行显微注射;（3）将注射后的二细胞进行胚胎移植,获得嵌合体首建鼠;（4）首建鼠实现传代繁育。对嵌合体首建鼠和后代鼠进行基因测序,均发现了敲除移码突变,成功的建立了致死基因全身性敲除小鼠模型系。结论:本研究综合运用分子克隆、显微操作、胚胎移植、分子测序、CRISPR/Cas9等技术方法,证实了利用CRIPR/Cas9技术,在胚胎的二细胞期进行显微注射的方法可以用于致死基因全身性敲出动物模型的构建。

论文目录

• 摘要
• abstract
• 第1章 引言
•   1 CRISPR/Cas9 基因编辑技术
•     1.1 CRISPR/Cas系统的发现
•     1.2 CRISPR/Cas系统的结构与分类
•     1.3 CRISPR/Cas9 系统基因编辑原理
•     1.4 基因编辑技术的应用进展
•   2 致死基因敲除模型研究简介
•     2.1 现有模型制作方法
•     2.2 两种致死基因简介
•   3 本研究的目的和意义
• 第2章 材料与方法
•   1 实验材料
•     1.1 实验动物
•     1.2 实验仪器
•     1.3 实验试剂
•   2 出生后致死基因Slc17a5全身性敲除小鼠模型制作的方法
•     2.1 CRISPR/Cas9系统元件的构建
•     2.2 小鼠的二细胞胚胎显微注射
•     2.3 胚胎移植
•     2.4 Slc17a5基因敲除首建鼠（F0）的基因型鉴定
•     2.5 Slc17a5基因敲除杂合子F1代鼠的获得
•   3 胚胎致死基因Virma全身性敲除小鼠模型制作的方法
•     3.1 CRISPR/Cas9 系统元件的构建
•     3.2 小鼠的二细胞胚胎显微注射
•     3.3 胚胎移植
•     3.4 Virma基因敲除首建鼠（F0）的基因型鉴定
•     3.5 Virma基因敲除杂合子F1代鼠的获得
• 第3章 结果与分析
•   1 两种致死基因敲除胚胎的移植效率
•   2 首建鼠（F0代）的基因移码突变结果
•   3 基因敲除杂合子F1代的获得
•   4 讨论
• 第4章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 张腾

导师: 倪和民,卢静

关键词: 致死基因,二细胞期,嵌合体

来源: 北京农学院

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 北京农学院

分类号: Q78

总页数: 35

文件大小: 2398K

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