蓝圆鲹骨骼肌内源性脯氨酸内肽酶抑制剂的纯化及其抑制机理

论文摘要

对蓝圆鲹（Decapterus maruadsi）骨骼肌采用热处理、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose弱阴离子交换柱层析、Sephacryl S-200 HR凝胶过滤层析和HiTrap Q HP强阴离子交换柱层析相结合方法,分离、纯化出一种内源性脯氨酸内肽酶抑制剂（prolyl endopeptidase inhibitor,PEPI）。研究了PEPI对脯氨酸内肽酶（prolyl endopeptidase,PEP）活性的影响及抑制机理。Tricine-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳分析表明纯化的PEPI分子质量约为10 kDa,具有较强的热稳定性和酸碱耐受性,其为丝氨酸蛋白酶类PEP的专一性、可逆竞争型抑制剂,抑制常数Ki为0.34μmol/L。PEPI与PEP形成复合物后,α-螺旋、无规卷曲比例增加,β-折叠比例减少,PEP活性中心构象的改变是酶活力被抑制的主要原因。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与试剂
•   1.2 仪器与设备
•   1.3 方法
•     1.3.1 PEPI的分离纯化
•     1.3.2 PEPI抑制活性测定
•     1.3.3 蛋白质含量测定
•     1.3.4 PEPI的稳定性分析
•       1.3.4. 1 热稳定性分析
•       1.3.4. 2 pH值稳定性分析
•     1.3.5 PEPI抑制特异性分析
•     1.3.6 PEPI对PEP的作用类型分析
•     1.3.7 PEPI对PEP二级结构的影响
•     1.3.8 PEPI对PEP热变性的影响
•   1.4 数据统计分析
• 2 结果与分析
•   2.1 PEPI的分离纯化
•   2.2 温度和pH值对PEPI活力的影响
•   2.3 PEPI的抑制特异性
•   2.4 PEPI对PEP的抑制类型
•   2.5 PEPI对PEP二级结构的影响
•   2.6 PEPI对PEP热变性的影响
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 钟婵,谢雪琼,孙乐常,张凌晶,刘光明,曹敏杰

关键词: 蓝圆鲹,脯氨酸内肽酶,内源性抑制剂,抑制动力学,二级结构

来源: 食品科学 2019年24期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 集美大学食品与生物工程学院,水产品深加工技术国家地方联合工程研究中心

基金: 国家自然科学基金面上项目（31772049,31471640）,福建省科技计划项目（2017N5011）

分类号: TS254.1

页码: 15-20

总页数: 6

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