导读:本文包含了肿瘤特异性启动子论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:肝癌,基因,肿瘤,基因治疗,特异性,端粒,子区。
肿瘤特异性启动子论文文献综述
孙君[1]（2019）在《肿瘤特异性启动子PEG3驱动报告基因FTH1在干细胞瘤变时表达及MR成像》一文中研究指出背景与目的干细胞移植在中枢神经系统及心血管系统等多系统疾病治疗的研究领域中取得了显着地进展,但干细胞与肿瘤细胞关系密切,都具有自我更新和多向分化能力,不仅有相似的代谢活性,而且有很多相同的沉默基因。近年来关于干细胞成瘤的报道使干细胞移植安全性被质疑,而且移植部位常发生在脊髓、脑、眼等较敏感的部位,即使形成很小的肿瘤都会导致严重的功能障碍,移植后干细胞的示踪可尽早检测到肿瘤的发生。在干细胞活体影像学示踪领域,主要利用光学、核医学以及磁共振成像(MRI),其中,MRI因具有叁维多序列成像且高分辨率无辐射等优点而最具潜力。MRI示踪干细胞常用方法包括直接和间接两种方法,直接示踪法应用磁性纳米微粒先标记干细胞并利用MRI对磁标记细胞进行检测,但是由于细胞的分裂及再摄取等问题限制其对干细胞的长期纵向示踪;间接示踪法常采用MRI报告基因标记干细胞,并利用其在细胞内的持续表达来示踪干细胞,有效克服了直接示踪法不能对细胞进行长期示踪的缺陷。虽然MRI报告基因成像可实现对干细胞移植后的长期纵向示踪,但无法区分早期瘤变细胞和瘤变前的干细胞。解决这一问题的关键在于找到一种在干细胞瘤变前后差异化表达的基因,该基因在瘤变细胞内高表达,而在干细胞及其正常分化的组织细胞不表达或低表达,利用该基因的启动子驱动报告基因在瘤变细胞内特异性表达,理论上可以实现报告基因成像对干细胞瘤变的早期检出。PEG3(progression elevated gene-3)是一种来源于啮齿动物的肿瘤特异性基因,在肿瘤细胞中,PEG3启动子活性受到PEA3、AP-1两种转录因子的调节而高表达。该基因在人癌细胞系同样高表达,而在正常组织细胞极少表达;目前PEG3启动子已被用于肿瘤的靶向治疗和肿瘤的发生机制等研究领域。有关利用PEG3启动子驱动报告基因对干细胞瘤变进行活体成像的研究尚未见文献报道。本实验将肿瘤特异性启动子PEG3与MRI报告基因FTH1相结合,构建PEG3-FTH1-LV慢病毒载体,将PEG3-FTH1系统转入大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)内,并诱导MSCs瘤变,在诱导前后观察FTH1基因表达、聚铁效应以及MRI信号改变,探究利用PEG3启动子驱动MRI报告基因FTH1在干细胞瘤变时特异性表达及聚铁,并被MRI检测的可行性。方法1 PEG3-FTH1-LV慢病毒载体的构建及病毒包装PEG3启动子、FTH1基因(委托汉恒生物有限公司合成)与载体p HBLV-CMV-MCS-3flag-EF1-ZSgreen-puro通过酶切、扩增、连接得到pHBLV-PEG3-FTH1-3flag-EF1-ZSgreen-puro,测序鉴定构建成功后与质粒(p SPAX2、p MD2G)同时感染293T细胞,收集病毒液离心得到病毒并标记为PEG3-FTH1-LV。同时构建CMV-FTH1-LV作为阳性对照,并将未感染病毒的MSCs细胞作为阴性对照。2慢病毒感染MSCs并诱导瘤变待MSCs细胞融合度达30%-40%,分别添加含PEG3-FTH1-LV、C MV-FTH1-LV病毒培养基,感染48h后荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,嘌呤霉素筛选构建稳定表达株MSCs-PEG3-FTH1、MSCs-CM V-FTH1。将MSCs、MSCs-PEG3-FTH1、MSCs-CMV-FTH1分别与大鼠胶质瘤细胞C6间接共培养2周诱导其瘤变为TMSCs、TMSCs-PEG3-FTH1、TMSCs-CMV-FTH1。3诱导前后细胞的鉴定观察共培养前后细胞形态,细胞流式检测共培养前后细胞表面抗体CD29、CD34、CD45、CD90表达情况,结晶紫染色检测诱导前后细胞迁移能力,CCK-8检测诱导前后细胞增殖速度,裸鼠皮下成瘤实验验证细胞瘤变。4诱导前后细胞FTH1表达及聚铁Western blots检测诱导前后细胞FTH1表达,诱导前后细胞分别经FAC培养基作用72h后,3.0T MRI观察细胞T2WI信号,普鲁士蓝染色、细胞透射电镜观察细胞诱导前后FTH1基因表达所引起的聚铁效应。5诱导后细胞移植物聚铁效应检测选取4-6W、20g左右健康雄性裸鼠,将诱导后细胞种植于裸鼠颈背部皮下,每天500mmol/L FAC溶液喂养,于细胞种植后第1d、3d、7d、14d、21d、28d、35d行3.0T MR观察移植物T2WI信号;细胞移植后形成的移植物取出后行普鲁士蓝染色及透射电镜观察肿块内铁颗粒情况,行苏木素-尹红染色观察其病理结构。结果1 PEG3-FTH1-LV慢病毒载体的鉴定及病毒包装经DNA测序、PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳等技术测定已成功构建PEG3-FTH1-LV慢病毒载体,病毒滴度为1×108TU/ml。2稳定株的建立慢病毒感染细胞48h后绿色荧光明显表达,嘌呤霉素筛选7天再半量筛选3天后成功构建MSCs-PEG3-FTH1、MSCs-CMV-FTH1稳定株。3诱导前后细胞的鉴定显微镜下观察到MSCs细胞排列整齐,呈鱼群样生长,TMSCs细胞较MSCs细胞变小,核浆比变大,并排列紊乱;经CCK-8检测显示TMSCs细胞较MSCs细胞增殖速度加快;结晶紫染色结果显示TMSs细胞较MSCs细胞迁移能力增强;流式细胞检测结果分析得到TMSCs细胞较MSCs细胞CD34、CD45表达增加,CD90表达减少;裸鼠皮下成瘤实验显示TMSCs细胞裸鼠皮下成瘤阳性,而MSCs不形成肿瘤。4诱导前后细胞FTH1表达及聚铁效应Western blots结果显示MSCs、MSCs-PEG3-FTH1、TMSCs细胞不表达或少量表达FTH1蛋白,而MSCs-CMV-FTH1、TMSCs-PEG3-FTH1、TMSCs-CMV-FTH1细胞均大量表达FTH1蛋白,MRI显示T MSCs-PEG3-FTH1细胞T2WI信号较MSCs-PEG3-FTH1细胞明显降低。普鲁士蓝染色和细胞透射电镜观察到MSCs-CMV-FTH1、TMSCsPEG3-FTH1、TMSCs-CMV-FTH1细胞内存在铁颗粒,而在MSCs、M SCs-PEG3-FTH1、TMSCs细胞内无明显铁颗粒。5诱导后细胞移植物体内聚铁效应MRI显示TMSCs-PEG3-FTH1细胞移植物信号与TMSCs-CMV-FT H1细胞移植物信号相似且均较TMSCs细胞移植物信号降低,普鲁士蓝染色和细胞透射电镜均观察到TMSCs-PEG3-FTH1与TMSCs-CMVFTH1细胞移植物内有明显的铁颗粒而TMSCs细胞移植物内铁颗粒不明显。结论本实验成功构建PEG3启动子控制FTH1基因表达的慢病毒载体并感染MSCs细胞,证实了PEG3启动子可驱动报告基因FTH1在干细胞瘤变时特异性表达并能被MRI检测。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2019-05-01）
王飞,王春喜,刘亚平,蓝文贤,曹春阳[2]（2018）在《以肿瘤因子ret启动子区G4-DNA为靶标的特异性结合的小分子药物筛选》一文中研究指出原癌基因ret编码酪氨酸激酶受体,在乳腺癌等多种肿瘤中非正常高表达。其启动子区含叁个GC富集区,形成G-四联体(G4-DNA)结构,影响ret基因转录与表达。以ret启动子区的G4-DNA为靶点筛选小分子化合物配体,降低ret基因的表达,能克服传统酪氨酸激酶抑制剂药物的脱靶问题,为RET过表达类肿瘤提供候选药物分子。2011年本课题组通过核磁共(本文来源于《2018第二十届全国波谱学学术年会会议论文摘要集》期刊2018-10-12）
王春喜,王飞,刘亚平,蓝文贤,曹春阳[3]（2017）在《以肿瘤因子RET启动子区G4-DNA为靶标的特异性结合的小分子药物筛选》一文中研究指出原癌基因RET编码酪氨酸激酶受体,在乳腺癌等多种肿瘤中非正常高表达。其启动子区含叁个GC富集区,形成G-四联体(G4-DNA)结构,影响RET基因转录与表达。不同于其他平行折迭G4-DNA构象,RET G4-DNA结构特殊,含两个全反式构象和一个全顺式构象的G-四集体。我们以RET G4-DNA为靶标,利用分子模拟筛选小分子化合物库,得到87个可能结合的小分子。核磁氢谱分析验证了其中一个小分子能特异性的结合RET G4-DNA,而不与已知的c-myc,c-kit启动子区和端粒G4-DNA结合。同时CD结果显示小分子的结合不改变RETG4-DNA的结构。核磁波谱解析了小分子与RET G4-DNA复合物的叁维结构,小分子通过自身的苯环与和G4集体共平面。细胞毒性实验显示小分子能引起细胞的死亡(IC50,10uM for MCF-7;5uM for T47D)。乳腺癌细胞MCF-7和T47D经小分子处理24小时后,细胞周期阻滞在G2/M期。同时在24小时后,小分子降低了RET mRNA在细胞中的表达量,验证了小分子结合RET启动子的G4-DNA调节mR NA的表达。我们的研究发现了一个能在体内和体外特异性结合RET启动子区G4-DNA的小分子化合物,影响癌细胞的增殖和周期,为乳腺癌的靶向治疗提供潜在的药物化合物。(本文来源于《第十届全国化学生物学学术会议报告摘要集》期刊2017-09-23）
陈瑞[4]（2015）在《SUPT5H,人结肠癌细胞中一个新的肿瘤特异性端粒酶逆转录酶启动子结合蛋白》一文中研究指出人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase, hTERT)是端粒酶的核心催化亚单位,在端粒酶活性发挥中起关键作用。正常体细胞中检测不到端粒酶活性或其活性很低,而在生殖细胞和胚胎干细胞中端粒酶活性常呈增高。至少80%的人类肿瘤可以观察到由端粒酶调控异常导致的酶活性异常增高。hTERT表达升高被认为是细胞永生化和肿瘤发生、进展的标志性指标。肿瘤细胞能够特异性地利用多种转录因子与hTERT启动子的结合促进hTERT基因在肿瘤细胞中的高表达。研究表明,端粒酶在结肠癌演变中具有重要的作用。因此,发现并鉴定结肠癌细胞中能够特异性地与hTERT启动子结合的调控蛋白,研究其功能,对于了解结肠癌发生、发展机制具有重要意义。目的在人结肠癌细胞中我们发现了一个新的肿瘤特异性hTERT启动子结合蛋白SUPT5H,通过相关实验研究该蛋白的功能并阐明其与结肠癌发生和发展的可能机制。方法以人结肠癌细胞株为模板,运用链霉亲和素-琼脂糖珠垂钓法及染色质免疫共沉淀垂钓、鉴定和验证SUPT5H为新的hTERT启动子结合蛋白；应用免疫印迹技术检测人正常结肠上皮细胞株和结肠癌细胞株核中SUPT5H蛋白的表达；利用RT-qPCR和免疫组化技术检测人结直肠癌组织和正常结直肠组织中SUPT5HmRNA和蛋白的表达；应用hTERT启动子报告基因研究SUPT5H蛋白对hTERT启动子活性的影响；应用基因转导和shRNA干扰技术特异性地抑制结肠癌细胞株SUPT5H蛋白的表达,研究SUPT5H蛋白对结肠癌细胞增殖、衰老和凋亡等生物学功能的影响。结果与人正常结肠上皮细胞株细胞核内SUPT5H蛋白表达水平相比较,结肠癌细胞株核内该蛋白呈现明显的高表达。人结直肠癌组织中,观察到SUPT5H在mRNA和蛋白水平显着的高表达。SUPT5H蛋白表达水平与结直肠癌远处转移正相关。利用SUPT5H基因特异性短发夹RNA抑制内源性SUPT5H的表达能够减弱hTERT启动子驱动的绿色荧光蛋白的表达,但对CMV启动子驱动的绿色荧光蛋白的表达未显现出减弱的作用。干扰SUPT5H的表达不仅能够有效地抑制结肠癌细胞端粒酶的活性、细胞的生长和迁移,还能促进细胞衰老。结论SUPT5H是人结肠癌细胞中一个新的肿瘤特异性端粒酶逆转录酶启动子结合蛋白。SUPT5H过表达激活了hTERT基因的转录。在人结直肠癌组织中,观察到SUPT5H显着的高表达。抑制结肠癌细胞SUPT5H的表达,展现出一定的抗肿瘤作用。SUPT5H可能作为结直肠癌一个新的肿瘤标志物和／或治疗靶点。(本文来源于《浙江大学》期刊2015-05-01）
薛金锋,薛志刚,陈毅瑶,李卓,尹彪[5]（2015）在《增强型肿瘤特异性启动子介导CDTK治疗肝癌的体内外研究》一文中研究指出目的:探讨运用增强子上调肿瘤特异性启动子h TERT转录活性后,调控自杀融合基因CDTK对人肝癌细胞系Bel-7402的体内外杀伤作用。方法:将CMV增强子、h TERT启动子及CDTK自杀融合基因克隆入核糖体基因区打靶载体p Hrn,构建p Hr-Ce Tp CDTK-GFP治疗载体并转染Bel-7402细胞,经RT-PCR、HPLC、MTT检测CDTK基因的表达和对肝癌细胞的体外杀伤效果。再将Bel-7402细胞接种到裸鼠皮下致瘤,以肿瘤杀伤载体p Hr-Ce Tp CDTK-GFP进行瘤内转染并检测其抑瘤效果,此外将转染后的细胞接种致瘤,检测其成瘤时间及肿瘤生长曲线等,从两方面检测其体内杀伤效果。结果:成功构建了肿瘤特异性治疗载体,体外转染肝癌细胞后,经RTPCR、HPLC证明CDTK基因能在肝癌中表达,且治疗载体在体外对肝癌细胞有明显毒性。动物实验结果发现裸鼠致瘤后治疗组血清中5-Fu浓度为7.694μg/ml,治疗组肿瘤体积与对照组相比减小6.5倍。而细胞转染治疗载体后致瘤,治疗组成瘤时间比对照组晚8天,且治疗组裸鼠的平均生存期较对照组延长16天。结论:p Hr-Ce Tp CDTK-GFP载体能在体内外高效靶向杀伤肝癌细胞,为肝癌基因治疗提供了一种新的途径。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2015年06期）
李芳,邹冬玲,曹姝,李少林[6]（2013）在《肿瘤特异性启动子Survivin调控shRNA腺病毒的构建及对HepG-2细胞中CD133基因表达的抑制》一文中研究指出目的:构建肿瘤特异性启动子Survivin驱动的小发夹RNA(shRNA),通过下调HepG-2肝癌细胞中CD133的表达,探讨其对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:①构建pEntr-Surp-shRNA真核表达载体,转染HepG-2肝癌细胞,Hela细胞,293T细胞。②设计shRNA干扰片段,筛选干扰最佳干扰效率的CD133干扰片段,重组载体pAd.Surp-shRNA972,pAd.SurpshRNA2377,pAd.Surp-shRNA485并筛选出稳定表达shRNA的转染克隆。③Ad.Surp-shRNA972,Ad.Surp-shRNA2377,Ad.SurpshRNA485腺病毒分别转染HepG-2肝癌细胞株,建立Ad.Surp-shRNA972,Ad.Surp-shRNA2377,Ad.Surp-shRNA485实验组,未转染腺病毒组为空白组。感染肝癌细胞株,应用RT-PCR和Western blot检测CD133 mRNA和蛋白的表达,MTT法和Transwell法检测细胞体外增殖和侵袭能力。结果:①成功构建了Survivin启动子调控的shRNA真核表达载体pEntr-Surp-shRNA,在293T细胞株无荧光,而在Hela、HepG-2细胞株中荧光表达明显,证实Survivin具有肿瘤特异性。②成功包装Ad.SurpshRNA972,Ad.Surp-shRNA2377,Ad.Surp-shRNA485腺病毒。③RT-PCR和Western blot检别显示Ad.Surp-shRNA972、Ad.SurpshRNA2377,有封闭CD133 mRNA和蛋白表达的效果;计算实验组与空白组相比mRNA抑制率分别为(63.44±0.02)%、(56.98±0.03)%;Ad.Surp-shRNA972、Ad.Surp-shRNA2377、Ad.Surp-shRNA485组蛋白抑制率分别为(55.43±0.40)%、(48.65±0.20)%、(34.67±0.40)%;实验组细胞的增殖和侵袭能力也受到明显抑制,Ad.Surp-shRNA972组生长抑制率为(72.88±0.74)%,Ad.Surp-shRNA2377组生长抑制率为(59.90±0.87)%,Ad.Surp-shRNA485组生长抑制率为(30.18±0.95)%。结论:肿瘤特异性启动子Survivin调控腺病毒介导的shRNA能显着下调CD133基因的表达,抑制肝癌细胞株HepG-2的增值和减弱其侵袭力。(本文来源于《重庆医科大学学报》期刊2013年12期）
卿菁,赵素萍,蒋卫红,章华[7]（2013）在《BARF1基因的启动子活性及其在鼻咽癌细胞中肿瘤特异性分析研究》一文中研究指出目的探讨BARF1基因的启动子活性及其在鼻咽癌细胞中是否具有肿瘤相对特异性。方法结合启动子预测软件结果(TRANSFAC和MATINSPECTOR)及引物设计软件(Primer premier 5.0),设计BARF1基因的启动子序列,验证其启动子活性,并比较该启动子在NP69细胞和CNE-2细胞中的的启动子活性的差异,验证其肿瘤相对特异性。结果测序和酶切结果证明所设计的BARF1基因的启动子的序列完全正确,其在CNE-2细胞中具有启动子活性,而在NP69细胞中不具备启动子活性,且该启动子在CNE-2细胞中的启动子活性远高于NP69细胞,差异有统计学意义(<0.05)。结论本研究设计的BARF1基因的启动子具有启动子活性,且该启动子具有肿瘤相对特异性。(本文来源于《现代实用医学》期刊2013年05期）
李芳[8]（2013）在《肿瘤特异性启动子survivin调控shRNA腺病毒载体的构建及对HepG-2细胞中CD133基因表达的抑制作用》一文中研究指出目的；肿瘤特异性启动子Survivin调控shRNA真核表达载体腺病毒的构建以及对HepG-2细胞中CD133基因表达的抑制作用。方法；1、pEntry-SUR-GFP-shRNA真核表达载体的构建；参考试剂盒说明书提取HepG-2细胞基因组DNA。根据GenBank(-222to+39, GeneBank Accession NumberAY795969)提供的survivin启动子基因序列及pEntry载体上的酶切位点设sall和NdeⅠ酶切位点(上下游引物序列)5-GTCGACGTCAAAAGGCCATAGCGGCCGC-3,下游引物序列5-GGAATTCCATATGGAATTCC-3扩增片段为270BP将survivin启动子克隆到pEntry-EF1-GFP-shRNA上,以替换EF1启动子,构建pEntry-Surp-GFP-shRNA真核表达载体。2、pEntry-Surp-GFP-shRNA转染Hela.HepG-2293T细胞株；RT-PCR检测GFP证实GFP的表达由survivin驱动,反应引物上序列为5-ATGGTGAGCAAGGGCGAGGA-3,下游引物序列为5-TTCAGGGTCAGCTTGCCGTAGGTG-3,长度200bp,通过转染细胞的荧光强弱,证实survivin在HepG-2。Hela细胞株中有荧光,而293T细胞株中没有荧光,且HepG-2细胞株表达高于Hela细胞,说明survivin基因具有肿瘤特异性。3、shRNA CD133的设计,合成以及Ad.surp-GFP-shRNA的构建和包装：根据GenBank中CD133的核苷酸序列,参考Ambion公司设计shRNA的设原则,(1)设计3条干扰序GCTCAGAACTTCATCACAAAC2377),AAGCCAGAAACTGTAATCT TAG(485), ATGAGATTAAGTCCATGGCAAC(972),(2)通过Blast检索确定叁个干扰片段与人类的其他基因不同源；shRNA的合成；将叁个干扰片段切成六个小的片段,送华大基因公司合成12条Oligo片段。紫外线分光光度计在260nm波长下定量,(3)切除pEntry-Surp-GFP-shRNA中的shRNA;连接目的基因；通过T4连接酶的作用,将合成好的shRNA927, shRNA485, shRNA2377分别连接到pEntry-Surp-GFP载体上。将构建好的pEntry-Surp-GFP-shRNA通过gateway试剂盒重组腺病毒质粒Ad.Surp-GFP-shRNA,产物转化TOP10感受态细菌,卡那霉素,LB平板,每个板挑选叁个阳性克隆摇菌过夜培养。提取质粒,Pac I酶切鉴定重组pAd-Surp-shRNA构建成功,提取质粒测量质粒浓度为A260/A280=1.8032; A260/A280=1.8230;A260/A280=1.7104如图1.1所示,送公司测序,结果正确。Pac Ⅰ酶切后鉴定,重组子酶切显示两条切割带分子量大小与酶切大小符合。通过gateway重组阳性的pAd.surp-GFP-shRNA972, pAd.surp-GFP-shRNA485, pAd.surp-GFP-shRNA2377质粒在293A细胞中包装Ad.Surp-GFP-shRNA, Ad.surp-GFP-shRNA转染到293A细胞,8d收集细胞,离心,2ml灭菌磷酸盐缓冲液(PBS)重悬,反复冻融,离心收集上清液,此为低滴度的病毒原液Ad.Surp-shRNA,取50%病毒原液反复感染293A,13000rpm离心收集上清,通过流式计算可得到高滴度腺病毒通过公式计算为7.01×10^10TU/ml。4、含Survivin启动子重组的shRNA CD133基因重组的腺病毒对肝癌细胞株HepG-2体外作用的实验研究；含Survivin启动子的条件复制腺病毒Ad.surp-GFP-shRNA972,2377,485转染肝癌细胞株HepG-2感染293T细胞作为对比,应用RT-PCR和Western blot检测CD133mRNA和蛋白的表达；MTT法和Transwell法检测细胞体外增殖和侵袭能力,结果显示,腺病毒972,2377,485能成功封闭CD133蛋白水平的表达；972,2377组能成功敲低CD133mRNA的表达；MTT, Transwell检测证实,实验组细胞生长抑制和侵袭力都低于空白组,计算实验组与空白组相比mRNA抑制率分别为(63.44±0.02)%,(56.98±0.03)%；972组,2377组,485组蛋白抑制率分别为(55.43±0.4)%,(48.65±0.2)%,(34.67±0.4)%；实验组细胞的增殖和侵袭能力也受到显着抑制；972组抑制率为(72.88±0.74)%,2377组抑制率为(59.9±0.87)%,485组抑制率为(30.18±0.95)%。结论：肿瘤特异性启动子survivin调控腺病毒介导的shRNA能显着下调CD133基因的表达,抑制肝癌细胞株HepG-2的增值和减弱其侵袭力CD133的抑制有降低肝癌细胞癌性的作用。结果：肿瘤特异性启动子Survivin调控腺病毒介导的shRNA能显着下调CD133基因的表达,抑制肝癌细胞株HepG-2的增值和减弱其侵袭力。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2013-05-01）
侯睿,金鑫,李和[9]（2013）在《人端粒酶反转录酶启动子调控的肿瘤特异性载体的构建及表达》一文中研究指出目的构建由人端粒酶反转录酶(hTERT)启动子调控的具有肿瘤细胞特异性表达能力的绿色荧光蛋白质粒。方法利用PCR技术克隆hTERT基因启动子,利用分子生物学方法以该启动子替换pEGFP-C3质粒的CMV启动子,构建重组质粒(hTERTp-EGFP)。用脂质体转染法将hTERTp-EGFP质粒分别转染至肿瘤细胞和正常细胞,观察此两种细胞内绿色荧光蛋白的表达差异。结果成功构建重组质粒hTERTp-EGFP,转染结果显示该质粒在肿瘤细胞中表达,而在正常细胞中无明显表达。结论重组质粒hTERTp-EGFP具有肿瘤特异性表达能力。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2013年02期）
孙昊,韩少山,周振宇,宋涛,刘青光[10]（2012）在《肿瘤特异性Survivin启动子驱动的FAK shRNA真核表达载体的构建》一文中研究指出目的构建肿瘤特异性Survivin启动子驱动的FAK shRNA真核表达载体。方法 PCR扩增Survivin启动子,构建重组载体pGEMT/pSurv并酶切、测序鉴定。体外化学合成编码FAK shRNA寡核苷酸链并退火互补成双链,构建真核表达载体pGenesil-FAK shRNA并酶切、测序鉴定。用Survivin启动子替换pGenesil-FAK shRNA中的U6启动子,重组为Survivin启动子驱动的FAK shRNA真核表达载体pGenesil-pSurv-FAK shRNA。将pGenesil-pSurv-FAK shRNA转染至肝癌细胞系HepG2,观察转染效率。48h后应用RT-PCR法检测转染重组质粒后HepG2细胞中FAK mRNA的表达变化。结果成功构建了肿瘤特异性Survivin启动子驱动的真核表达载体pGenesil-pSur-FAKshRNA,转染至肝癌细胞HepG2后可明显下调HepG2细胞中FAK mRNA表达水平。结论以Survivin启动子驱动的FAK shRNA真核表达载体能够有效下调肝癌细胞FAK的表达,为进一步以靶向干扰FAK表达为主要手段的肝癌联合治疗提供实验依据。(本文来源于《西安交通大学学报(医学版)》期刊2012年05期）
肿瘤特异性启动子论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
原癌基因ret编码酪氨酸激酶受体,在乳腺癌等多种肿瘤中非正常高表达。其启动子区含叁个GC富集区,形成G-四联体(G4-DNA)结构,影响ret基因转录与表达。以ret启动子区的G4-DNA为靶点筛选小分子化合物配体,降低ret基因的表达,能克服传统酪氨酸激酶抑制剂药物的脱靶问题,为RET过表达类肿瘤提供候选药物分子。2011年本课题组通过核磁共
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
肿瘤特异性启动子论文参考文献
[1].孙君.肿瘤特异性启动子PEG3驱动报告基因FTH1在干细胞瘤变时表达及MR成像[D].重庆医科大学.2019
[2].王飞,王春喜,刘亚平,蓝文贤,曹春阳.以肿瘤因子ret启动子区G4-DNA为靶标的特异性结合的小分子药物筛选[C].2018第二十届全国波谱学学术年会会议论文摘要集.2018
[3].王春喜,王飞,刘亚平,蓝文贤,曹春阳.以肿瘤因子RET启动子区G4-DNA为靶标的特异性结合的小分子药物筛选[C].第十届全国化学生物学学术会议报告摘要集.2017
[4].陈瑞.SUPT5H,人结肠癌细胞中一个新的肿瘤特异性端粒酶逆转录酶启动子结合蛋白[D].浙江大学.2015
[5].薛金锋,薛志刚,陈毅瑶,李卓,尹彪.增强型肿瘤特异性启动子介导CDTK治疗肝癌的体内外研究[J].中国生物工程杂志.2015
[6].李芳,邹冬玲,曹姝,李少林.肿瘤特异性启动子Survivin调控shRNA腺病毒的构建及对HepG-2细胞中CD133基因表达的抑制[J].重庆医科大学学报.2013
[7].卿菁,赵素萍,蒋卫红,章华.BARF1基因的启动子活性及其在鼻咽癌细胞中肿瘤特异性分析研究[J].现代实用医学.2013
[8].李芳.肿瘤特异性启动子survivin调控shRNA腺病毒载体的构建及对HepG-2细胞中CD133基因表达的抑制作用[D].重庆医科大学.2013
[9].侯睿,金鑫,李和.人端粒酶反转录酶启动子调控的肿瘤特异性载体的构建及表达[J].基础医学与临床.2013
[10].孙昊,韩少山,周振宇,宋涛,刘青光.肿瘤特异性Survivin启动子驱动的FAKshRNA真核表达载体的构建[J].西安交通大学学报(医学版).2012
论文知识图
