导读:本文包含了仿蜘蛛拖牵丝蛋白论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:蜘蛛拖牵丝蛋白,基因克隆,原核表达,转基因
仿蜘蛛拖牵丝蛋白论文文献综述
杜文华[1]（2012）在《棒络新妇蜘蛛拖牵丝蛋白基因编码序列的克隆及重组表达》一文中研究指出蜘蛛丝既质轻又坚韧,是一种集强固性与柔韧性于一体的综合性能优良的天然蛋白质纤维,作为高性能材料在工业、军事如降落伞绳索、轻质吸能的军事防护服、航天用复合材料等方面有重要的应用价值。同时蜘蛛丝具有良好的生物相容性和可降解性,在生物医学领域如手术缝合材料、人工肌腱、药物运转载体、组织支架等方面极具潜在开发价值。但是由于天然蜘蛛丝产量少而且无法对蜘蛛进行规模饲养,通过基因工程技术来大量获取蜘蛛丝是人们研究和解决纤维材料来源问题的一条途径。在基因工程中微生物表达系统有着生长快、产量高、周期短、培养条件简单、遗传背景清楚且开发有多种表达载体、菌株和纯化系统的优点,天然的或者人工合成的蜘蛛丝蛋白最初都在大肠杆菌、酵母等微生物表达系统中进行表达,现已开发出多种蜘蛛丝蛋白表达系统。由于对蜘蛛丝蛋白后期组装、纺丝机理等相关研究相对滞后,目前的研究还未能把获得的蜘蛛丝蛋白形成力学性能理想的丝纤维。家蚕是被人类驯化并得到充分利用的泌丝昆虫。家蚕丝腺具有强大的合成和分泌蛋白的能力,其分泌的蚕丝和蜘蛛丝一样富含甘氨酸和丙氨酸。利用家蚕丝腺高效的蛋白质表达系统表达蜘蛛丝蛋白,并通过其天然的纺丝系统将重组蛛丝蛋白分泌并纺丝,可以轻松解决其它表达系统存在的后期纺丝困难的问题,是外源表达蜘蛛丝蛋白获得高性能丝纤维材料最有希望的表达系统。本研究通过PCR方法从络新妇属棒络新妇蜘蛛(Nephila clavata)基因组DNA中克隆获得拖牵丝蛋白基因的部分序列,对该基因编码的蛋白质进行预测分析表明其氨基酸存在蜘蛛拖牵丝蛋白典型(A)n、(GGX)n模序,螺旋结构占优势,具有蜘蛛大壶状腺丝蛋白结构域。将克隆基因与载体pET-28a(+)连接构建原核表达载体pET28-NcMaSp,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中进行拖牵丝蛋白的表达,SDS-PAGE显示表达分子量与预期一致约为27kD,表达的蛋白具可溶性部分以包涵体形式存在。在此基础上通过原核表达载体自身携带的His标签,对表达的重组蜘蛛丝蛋白进行通过镍柱亲和层析进行纯化,为下一步的真核表达做好准备工作。选用家蚕丝腺表达系统进行蜘蛛拖牵丝蛋白基因的真核表达。从家蚕品种大造(P50)中克隆了serl基因启动子、serl基因3’端终止子,人工合成serl基因信号肽编码序列。serl基因启动子序列分析表明,家蚕serl基因启动子的TATA框保守序列为TATAAAA(-24--30),CAAT框位于-112-115处。对serl基因信号肽编码序列与拖牵丝蛋白编码序列形成的融合蛋白进行信号肽剪切位点预测,显示信号肽剪切位点位于20-21位氨基酸。在序列分析的基础上构建重组质粒pFFa[MCS-ser1-signal-NcMaSp1-ser3'],将该重组质粒的ser1-signa1-NcMaSp1-ser3'融合片段与携带报告基因的piggyBac[3xp3-DsRed]转座载体融合构建丝腺特异表达基因ser1启动子驱动的转基因表达载体piggyBac[ser1-signa1-NcMaSp1-ser3',3xp3-DsRed],并进行了转基因注射。为后续分析该转基因家蚕茧丝特性,定向改造转蜘蛛拖牵丝基因家蚕蚕丝的结构与性能,开发高性能丝纤维材料的研究奠定基础。(本文来源于《西南大学》期刊2012-05-10）
刘丹梅,王芬,李文利[2]（2011）在《蜘蛛拖牵丝蛋白基因的克隆与表达》一文中研究指出蜘蛛丝具有极高的强度和韧度,工业和医学应用价值很高,但由于蜘蛛的不可驯养性使其应用受到限制。因此,本文尝试利用基因工程的方法获得蛛丝蛋白的表达。我们利用巢式PCR技术从大腹圆蛛Araneus ventricosus基因组中克隆了长度为837bp的拖牵丝蛋白基因(ASP),并分别将其构建至原核表达载体pGEX-6p-1和真核表达载体pGFP-N2上,分别命名为pASG和pASN。pASG在大肠杆菌中16℃下24h诱导表达后,经蛋白质印迹证明成功地表达了GST-ASP融合蛋白;pASN转染昆虫sf9细胞48h后观察到了绿色荧光蛋白GFP的表达,表明ASP基因在大肠杆菌和真核细胞中分别得到了正确表达。本研究为利用基因工程的方法开发蛛丝蛋白的生产途径提供了有益的尝试。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2011年01期）
王昌河,蒋平,刘辉芬,吴灵芝,郭聪[3]（2006）在《转蜘蛛拖牵丝蛋白基因家蚕蚕丝氨基酸组成及其机械性能》一文中研究指出将以绿色荧光蛋白基因为报告基因、含有人工合成的1.6 kb的蜘蛛拖牵丝蛋白基因及转座子pig-gyBac的转基因载体成功导入减秋无滞育家蚕受精卵,得到转蜘蛛拖牵丝蛋白基因家蚕及绿色荧光茧。对转基因家蚕与对照家蚕丝素蛋白进行了氨基酸组成分析,结果表明转基因蚕茧丝素蛋白甘氨酸和丙氨酸的百分含量分别增加了1.65%和1.80%(平均值);对其生丝的机械性能进行了测试研究,结果表明转基因蚕茧生丝的伸长率降低,断裂强度和初始模量增加,且差异均显着,与理论预期结果吻合。结果表明转基因家蚕蚕丝的机械性能一定程度上得到了提高。(本文来源于《四川动物》期刊2006年03期）
刘辉芬,李维,王宇,蒋平,郭聪[4]（2006）在《蜘蛛拖牵丝蛋白基因转家蚕表达质粒的构建》一文中研究指出利用DNA重组技术对络新妇蛛(Nephila clavipes)拖牵丝蛋白基因MaSp1高度重复序列进行多次重组,人工构建成1.6 kb的蜘蛛拖牵丝蛋白人工基因Sil-E,DNA序列分析证明了人工基因序列的正确性.将家蚕L链基因启动子片段、L链cDNA、L链基因终止子融合在一起,构建成丝腺特异性表达单元.再与Sil-E融合构建成蜘蛛拖牵丝蛋白基因家蚕丝腺特异表达单元.将该表达单元克隆到转座子piggyBac的转基因载体中,获得了蜘蛛拖牵丝蛋白转基因表达载体.采用显微注射法将其与辅助质粒共导入到家蚕蚕卵中.筛选转基因阳性个体,经PCR和Southern杂交鉴定,结果表明目的基因整合到家蚕基因组中,为进一步研究家蚕作为生物反应器表达蜘蛛拖牵丝蛋白基因奠定了基础.(本文来源于《湖南大学学报(自然科学版)》期刊2006年05期）
王昌河[5]（2006）在《不同方法脱胶蚕丝及转蜘蛛拖牵丝蛋白基因家蚕蚕丝的力学性能研究》一文中研究指出用蒸馏水、硼酸．硼砂缓冲液、碳酸钠、尿素及丁二酸对家蚕茧丝进行了脱胶处理，并采用单纤强力仪对这五种脱胶蚕丝进行了力学行为的测试，获得了负载．位移曲线，结果表明不同脱胶方法对茧丝的力学行为造成了不同程度的影响，包括初始斜率和屈服点的降低，其中碳酸钠和尿素脱胶对其影响最大，这些结果说明脱胶至少削弱了一种非共价键，如氢键或范德华键，键的削弱加快了丝的断裂。 虽然丝胶对蚕丝的力学性能几乎没有贡献，但是它对蚕丝纤维横截面面积却有很大的贡献，不同脱胶方法的脱胶程度不同，因此用脱胶丝的横截面面积将负载-位移曲线转换成应力-应变曲线时，不能重现脱胶对两核心丝纤维分子结构的影响。有以下两个因素影响着脱胶蚕丝的力学性能：1)两核心丝纤维分子结构的改变，包括分子间的和／或分子内的结构改变；2)脱胶率。因此，对应力-应变曲线的解释需要考虑到脱胶率，即在相同脱胶率的情况下比较应力-应变曲线才有意义。本实验采用临近连续丝纤维法，相邻核心丝纤维的力学性能具有相似性，在脱胶率相似的情况下，用两核心丝纤维的横截面积把对应的负载-位移曲线转换成应力-应变曲线，则所得到的曲线形状不变。这样，不同脱胶方法对两核心丝纤维分子结构的影响就可以通过脱胶前后蚕丝的力学行为和力学性能的变化表现出来。 此外，还采用扫描电镜对各种脱胶蚕丝的表面进行了观察，扫描电镜图片表明不同方法脱胶茧丝具有不同的外貌形态。蒸馏水只产生了部分脱胶效果；尿素脱胶也不完全，且可见其腐蚀的凹痕和孔洞；碳酸钠脱胶效果较为(本文来源于《四川大学》期刊2006-05-01）
郭廷晴,赵昀,汪生鹏,董良,陆长德[6]（2003）在《兔抗仿蜘蛛牵丝蛋白抗体的制备及应用》一文中研究指出将仿蜘蛛牵丝基因s6 0 0克隆到GST融合蛋白表达质粒pGEX KG中 ,利用大肠杆菌表达系统表达并纯化了仿蜘蛛牵丝蛋白S6 0 0 ,以之作为抗原制备了兔抗血清。S6 0 0的氨基酸组分分析与理论值相吻合。蛋白质免疫印迹发现该抗血清能与天然蜘蛛丝反应 ,表明设计的仿蜘蛛丝与天然蜘蛛丝有相似的免疫原性。为了定量检测仿蜘蛛牵丝蛋白在转基因家蚕丝腺中 (或茧壳中 )的表达 ,建立了用ELISA方法定量检测茧壳中仿蜘蛛牵丝蛋白量的工作系统(本文来源于《生物化学与生物物理学报》期刊2003年08期）
仿蜘蛛拖牵丝蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
蜘蛛丝具有极高的强度和韧度,工业和医学应用价值很高,但由于蜘蛛的不可驯养性使其应用受到限制。因此,本文尝试利用基因工程的方法获得蛛丝蛋白的表达。我们利用巢式PCR技术从大腹圆蛛Araneus ventricosus基因组中克隆了长度为837bp的拖牵丝蛋白基因(ASP),并分别将其构建至原核表达载体pGEX-6p-1和真核表达载体pGFP-N2上,分别命名为pASG和pASN。pASG在大肠杆菌中16℃下24h诱导表达后,经蛋白质印迹证明成功地表达了GST-ASP融合蛋白;pASN转染昆虫sf9细胞48h后观察到了绿色荧光蛋白GFP的表达,表明ASP基因在大肠杆菌和真核细胞中分别得到了正确表达。本研究为利用基因工程的方法开发蛛丝蛋白的生产途径提供了有益的尝试。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
仿蜘蛛拖牵丝蛋白论文参考文献
[1].杜文华.棒络新妇蜘蛛拖牵丝蛋白基因编码序列的克隆及重组表达[D].西南大学.2012
[2].刘丹梅,王芬,李文利.蜘蛛拖牵丝蛋白基因的克隆与表达[J].基因组学与应用生物学.2011
[3].王昌河,蒋平,刘辉芬,吴灵芝,郭聪.转蜘蛛拖牵丝蛋白基因家蚕蚕丝氨基酸组成及其机械性能[J].四川动物.2006
[4].刘辉芬,李维,王宇,蒋平,郭聪.蜘蛛拖牵丝蛋白基因转家蚕表达质粒的构建[J].湖南大学学报(自然科学版).2006
[5].王昌河.不同方法脱胶蚕丝及转蜘蛛拖牵丝蛋白基因家蚕蚕丝的力学性能研究[D].四川大学.2006
[6].郭廷晴,赵昀,汪生鹏,董良,陆长德.兔抗仿蜘蛛牵丝蛋白抗体的制备及应用[J].生物化学与生物物理学报.2003