多重荧光定量PCR测定登革热Ⅰ～Ⅳ型方法的建立与初步评价

论文摘要

目的探讨多重荧光定量PCR测定登革热Ⅰ～Ⅳ型方法的建立与初步评价。方法针对登革热Ⅰ～Ⅳ型使用自建的引物探针对反应条件及温度进行调整,且对阳性样本进行不同浓度的稀释,检测自建多重荧光定量PCR在登革热Ⅰ～Ⅳ型测定中的重复性、灵敏性及特异性。结果 6份登革热阳性样本通过自建的检测方法来进行检测,全部能够显示明显的S曲线扩增,且与原有确证方法相比,不同型别的结果一致。其他10份病毒阳性样本及阴性样本全部没有显示扩增曲线,提示自建的检测方法特异性良好。分别检测登革热Ⅰ～Ⅳ型,变异系数(CV%)值水平范围:0.51～5.51,提示重复性较好。使用自建的多重荧光定量PCR对登革热不同型别进行检测的平均用时与ELISA法相比无显著差异(t=1.561,P>0.05)。通过自建的多重荧光定量PCR测定通过仪器来完成核酸的自动提取,在仪器当中加样、上机之后不需要另外的操作,充分降低了发生污染的风险。结论本次研究设计建立的登革热Ⅰ～Ⅳ型多重荧光定量PCR检测方法,在重复性、灵敏性及特异性方面均较为理想;且相比ELISA法在加样后无需另外手动操作,更加简易方便。

论文目录

• 1 资料与方法
•   1.1 仪器与试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 标准品的制备
•     1.2.2 核酸PCR扩增
•     1.2.3 登革混合感染Ⅰ型病毒及Ⅱ型病毒的样本制备和检测
•   1.3 观察指标
•     1.3.1 观察评估多重荧光定量PCR测定的特异性
•     1.3.2 观察评估多重荧光定量PCR测定的灵敏性
•     1.3.3 观察评估多重荧光定量PCR测定的重复性
•     1.3.4 与ELISA方法相比，观察评估多重荧光定量PCR测定的使用性能
•     1.3.5 病毒复制动态
•   1.4 统计学方法
• 2 结果
•   2.1 特异性
•   2.2 灵敏性
•   2.3 重复性
•   2.4 与ELISA方法相比，多重荧光定量PCR测定的使用性能
•   2.5 C6/36混合感染登革Ⅰ型病毒及登革Ⅱ型病毒之后的病毒复制动态检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 费云霞,张祥波,何韬,张雨婷,高依丹,高岭,王洁,陈公英

关键词: 登革热,荧光定量,血清型,病毒载量

来源: 中国现代医生 2019年34期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 感染性疾病及传染病

单位: 浙江中医药大学,杭州师范大学,杭州师范大学附属医院感染肝病科

基金: 浙江省基础公益研究计划项目（LGC19H200001）

分类号: R512.8

页码: 8-13

总页数: 6

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