酿酒酵母GPCR蛋白Ste2亚细胞定位信号探索

论文摘要

G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptor,GPCR）家族蛋白在细胞感受各种胞外信号过程中发挥重要作用。Ste2是酵母细胞中GPCR蛋白之一。大量文献报道了Ste2蛋白突变体对其功能和表达的影响,但关于Ste2亚细胞定位的研究相对较少。这项工作的目的在于确定Ste2亚细胞定位,探究Ste2不同跨膜域、胞内外环状结构域和N端、C端对其亚细胞定位的影响。构建了一系列结构域删除或替换突变体,通过荧光显微镜观察判断不同结构区域对Ste2亚细胞定位的影响,并通过与已知的细胞器标记蛋白共定位观察验证亚细胞定位判读结果。结果显示:野生型Ste2荧光信号出现在质膜和液泡内腔; C端缺失突变体荧光信号出现在质膜和内质网。在N端、C端、各环状结构域序列采用动物GPCR蛋白ORI7、OR17-40相应结构域替换的突变体中,C端替换导致液泡内腔信号消失,质膜信号强于野生型; N端和部分环状结构域替换不同程度减弱或消除了质膜定位,液泡腔内信号类似于野生型;部分突变体在胞内出现点状分布的荧光信号。由此推断:Ste2 N端,第一、第二胞外环状结构域和第三胞内环状结构域可能具有影响Ste2运输定位到质膜的功能;而C端则可能在Ste2离开细胞膜进入液泡的过程中发挥作用。初步确定了Ste2的不同结构区域对其定位的影响,为深入研究GPCR蛋白的亚细胞定位机制奠定基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株
•     1.1.2 培养基
•     1.1.3 主要试剂和仪器设备
•   1.2 方法
•     1.2.1 质粒的构建及转入酵母菌株
•     1.2.2 敲除菌株的构建
•     1.2.3 显微镜观察
• 2 结果与分析
•   2.1 野生型Ste2亚细胞定位
•   2.2 Ste2末端及跨膜域删除突变体的亚细胞定位
•   2.3 Ste2结构域替换突变体亚细胞定位
•   2.4 Ste2蛋白C端替换基础上替换其他结构域对定位的影响
•   2.5 细胞器共定位验证
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 金雪,宋敬臻,谢志平

关键词: 酵母,亚细胞定位,分选信号

来源: 中国生物工程杂志 2019年11期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室

基金: 上海市自然科学基金探索类项目(18ZR1420400),上海市教育委员会科研创新计划(2017-01-07-00-02-E00035)资助项目

分类号: Q25

DOI: 10.13523/j.cb.20191105

页码: 39-53

总页数: 15

文件大小: 5104K

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