塞内卡病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

论文摘要

为建立塞内卡病毒（SVA）荧光定量RT-PCR （FQ-PCR）检测方法,本研究根据GenBank中SVA 3D基因保守区域序列设计了一对特异性引物和一条特异性探针,以SVA cDNA为模板,经优化反应条件,建立了SVA FQ-PCR检测方法,并对其进行了特异性、敏感性、重复性试验;利用所建立的方法对28份临床疑似SVA感染样品进行了检测,并与本实验室建立的SVA RT-PCR方法检测结果及测序结果比较分析。结果显示,该方法仅对SVA出现阳性扩增信号,对BHK-21正常细胞对照和口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、猪伪狂犬病毒等5种病原均未出现扩增,特异性较强;该方法最低检测限为10.4拷贝/μL质粒标准品,比常规RT-PCR敏感性高10倍,敏感性较高;该方法批内及批间变异系数均小于4%,重复性好。利用该方法对28份疑似SVA感染样品检测显示,检出9份阳性样品,与测序结果一致,而常规RT-PCR仅检出6份阳性样品,其敏感性高于常规RT-PCR方法,两种方法的符合率为89.3%。本研究为SVA的早期检测提供了特异、敏感、快速的方法。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 病毒基因和样品
•   1.2 主要实验材料
•   1.3 重组质粒标准品的制备
•   1.4 引物和探针的设计及合成
•   1.5 反应条件优化及标准曲线的建立
•   1.6 特异性试验
•   1.7 敏感性试验
•   1.8 重复性试验
•   1.9 临床样品检测
• 2 结果
•   2.1 重组质粒标准品的制备
•   2.2 反应体系与反应条件的优化结果
•   2.3 标准曲线的建立
•   2.4 特异性试验
•   2.5 敏感性试验
•   2.6 重复性试验
•   2.7 临床样品检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王淑娟,王东方,赵月龙,谢彩华,赵雪丽,马震原,王华俊,杨朋霞,闫若潜

关键词: 塞内卡病毒,荧光定量,建立,应用

来源: 中国预防兽医学报 2019年05期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 河南省动物疫病预防控制中心,河南科技大学动物科技学院,河南农业大学牧医工程学院

基金: 河南省科技创新人才计划项目“猪重要疫病快速检测集成技术研究”(174200510003)

分类号: S852.65

页码: 479-483

总页数: 5

文件大小: 518K

下载量: 123