高亲和力转运蛋白论文_侯剀,白雪源,陈香美,冯哲,傅博

导读:本文包含了高亲和力转运蛋白论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译,主要关键词:蛋白,羧酸,亲和力,细胞,肾小管,水稻,衰老。

高亲和力转运蛋白论文文献综述

侯剀,白雪源,陈香美,冯哲,傅博[1](2008)在《大鼠高亲和力二羧酸转运蛋白的克隆表达及细胞内定位》一文中研究指出目的:克隆大鼠高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白(SDCT2)的全长cDNA,并明确其在肾小管上皮细胞内的定位表达情况。方法:从大鼠肾组织中提取总RNA,用带有8肽FLAG标签的PCR引物通过RT-PCR技术扩增出SDCT2全长基因并测序,将其插入真核表达载体中构建SDCT2真核表达载体,然后将它们转染到肾小管上皮细胞LLC-PK1中表达,并用激光共聚焦显微镜观察该蛋白的亚细胞定位情况。结果:扩增出2kb的SDCT2全长基因,Westernblot表明SDCT2基因在LLC-PK1细胞中得到了正确的表达;共聚焦显微镜分析显示正常SDCT2蛋白主要定位于细胞膜上,与生物信息学的预测结果一致;为了比较不同连接温度对重组DNA连接效率的影响,观察了3种连接温度下的转化效率,结果显示温度循环法的连接效率明显比其他2种常规连接温度要高。结论:高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白全长基因被成功克隆,其主要表达于肾小管上皮细胞膜上。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2008年03期)

白雪源,陈香美,傅博,汪扬,冯哲[2](2007)在《高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白基因诱导人二倍体细胞衰老的分子机制研究》一文中研究指出钠离子依赖性二羧酸转运蛋白(sDCT,NaDC)是一类负责叁羧酸循环中间产物跨细胞膜转运和重吸收的有机阴离子转运蛋白家族。根据对底物亲和力的不同,可将其分为低亲和力转运蛋白(NaDC1,SDCT1)和高亲和力转运蛋白 (NaDC3,SDCT2)。前者主要表达于小肠和肾小管,负责从食物和原尿中重吸收叁羧酸循环中间产物;后者主要在肾小管表达,但在肝、脑、胎盘等能量代谢非常活跃的重要器官也有表达.目前对于 NaDC3的功能并不很清楚.本研究试图探讨 NaDC3对细胞 ROS 产生及衰老的影响及其机制.首先将 NaDC3全长 cDNA 插入逆转录病毒质粒 pLNCX2中(本文来源于《遗传学进步与人口健康高峰论坛论文集》期刊2007-11-01)

刘维萍[3](2007)在《高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白(NaDC3)促进肾脏衰老的机制研究》一文中研究指出目的:肾脏功能随年龄增长逐渐下降,老年人终末期肾脏疾病(endstage renal disease,ESRD)的发生率高,且治疗有效率低,死亡率高。因此研究肾脏衰老的机制和延缓肾脏衰老的策略有重要意义。肾脏衰老的病理学特征是肾小球硬化、肾小管萎缩、肾间质纤维化和动脉内膜纤维性增厚,其中肾间质-小管的损伤对肾功能的影响更为重要。肾小管的重要功能之一就是主动吸收有用物质或分泌有害物质,而这些过程均需要消耗能量。近年来的研究表明能量代谢与衰老关系密切,而且限制热量摄入可延长很多物种的寿命,并可延缓衰老相关疾病的发生。与其他器官一样,肾小管的主要能量来源也依赖于叁羧酸循环。有趣的是肾小管上皮细胞基底膜侧存在一种高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白(NaDC3),其主要功能是将叁羧酸循环的中间产物二羧酸与叁羧酸从组织或血液中转运至肾小管上皮细胞内,为其提供能量合成的底物。我们实验室前期研究发现NaDC3在人和大鼠肾脏的表达随着衰老逐渐增加,在肾脏衰老中起重要作用。过表达NaDC3基因,可使人二倍体成纤维细胞(WI38细胞)提前出现衰老表型。但是NaDC3促进衰老的具体机制尚不清楚,我们推测与能量代谢有关。目前越来越多的证据表明限制能量摄入延缓衰老、延长寿命与Sir2有关。Sir2是叁羧酸循环中的辅酶尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)依赖的组蛋白去乙酰化酶,它通过NAD把代谢与寿命联系在一起,最近研究发现SIRT1(Sir2在哺乳动物中最近的同系物)对肾脏有保护作用。那么NaDC3是否通过调控叁羧酸循环中间产物而影响NAD的水平,进而影响SIRT1的表达和/或功能而促进衰老呢?为此本研究以能量代谢为切入点,首先观察SIRT1在不同月龄大鼠肾脏的表达情况及其与NaDC3表达的相关性;进一步研究了在人肾小管上皮细胞(HKC)和WI38细胞中NaDC3对NAD~+/NADH比值的影响及其与SIRT1表达和功能的关系,并且观察了NaDC3对SIRT1表达影响与WI38细胞衰老表型的关系。方法:取1日龄、3月龄、12月龄和24月龄大鼠的肾脏组织,观察NaDC3和SIRT1的表达及SIRT1的活性变化,并分离培养各时间点大鼠肾小管上皮细胞,用免疫荧光法检测SIRT1的定位和表达变化。应用逆转录病毒介导的基因转移技术,将NaDC3基因分别转移至HKC和WI38细胞内,检测不同水平的NaDC3对SIRT1表达和活性的影响。在WI38细胞转染正义NaDC3后,检测衰老的相关指标,包括用β-半乳糖苷酶活性(SA-β-gal)染色方法检测了衰老相关SA-β-gal染色阳性率,用MTT法检测了细胞增殖能力,用流式细胞仪检测了细胞周期的变化,并计数了细胞分裂的代数等。在转染正义NaDC3的同时,给与SIRT1的激动剂白黎卢醇或限食大鼠血清,观察对上述衰老相关指标的影响,以证实NaDC3是否通过SIRT1影响了衰老的进程。同时检测了NaDC3对WI38细胞NAD~+/NADH比值的影响,并给与NAD刺激转染了正义NaDC3的WI38细胞,使NAD~+/NADH比值升高,观察衰老相关的指标变化,以证实NaDC3通过降低NAD~+/NADH比值,抑制SIRT1,继而加速衰老。结果:随大鼠月龄增长,NaDC3在肾脏的表达水平逐渐增高,而SIRT1的表达和活性均逐渐下降。SIRT1在肾小管上皮细胞核内表达,荧光强度随大鼠增龄逐渐减弱。HKC和WI38细胞转染正义NaDC3后明显抑制了SIRT1的蛋白表达和去乙酰化酶活性;HKC转染反义NaDC3后SIRT1的蛋白表达和去乙酰化酶活性有所升高。在WI38细胞转染正义NaDC3后,加速了细胞衰老,表现为细胞增殖能力下降,SA-β-gal染色阳性率明显增高,细胞分裂代数减少,停滞在G1的细胞数量增多;给与SIRT1的激动剂白黎卢醇或限食大鼠血清,则能抑制细胞出现以上衰老相关的表型。转染正义NaDC3的WI38细胞NAD~+/NADH比值降低,给与NAD刺激,提高NAD~+/NADH的比值后,细胞衰老相关的表型部分得到抑制。结论:在大鼠肾脏中,SIRT1的表达和活性随着增龄而下降,在肾脏衰老中起重要作用。NaDC3可通过增强能量代谢而抑制NAD~+依赖的SIRT1的蛋白表达和酶活性而促进肾脏衰老。(本文来源于《中国人民解放军军医进修学院》期刊2007-06-06)

路群,明凤,娄玉霞,张珊珊,周根余[4](2005)在《水稻高亲和力磷酸盐转运蛋白基因的克隆、表达及检测》一文中研究指出以水稻(粳稻)cDNA为模板,设计一对特异性引物,获得编码水稻高亲和力磷酸盐转运蛋白基因的全序列,ORF区编码含535个氨基酸的蛋白,具有磷酸盐转运蛋白保守的蛋白激酶C作用位点、N端糖基化位点与酪蛋白激酶Ⅱ作用位点.Southernblot分析显示此基因在水稻基因组中具有多个拷贝,与水稻基因组序列分析结果一致.Westernblot预测目的基因表达的蛋白大小约为57.7ku.该基因的真核表达研究正在进行中.(本文来源于《复旦学报(自然科学版)》期刊2005年04期)

白雪源,陈香美,侯剀,冯哲,傅博[5](2004)在《高亲和力钠离子依赖二羧酸转运蛋白基因的克隆、表达及亚细胞定位研究》一文中研究指出为了研究高亲和力钠离子依赖二羧酸转运蛋白(high affinity sodium-dependent dicarboxylate trans-porter,SDCT2,NaDC3)的功能,从小鼠肾组织中克隆出了其cDNA基因,并对其结构特征、基因表达谱及细胞内定位情况进行了分析。结果显示NaDC3蛋白由600个氨基酸组成,同源性分析表明其氨基酸序列与大鼠及人NaDC3分别有97%和87%相同。二级结构分析显示,该蛋白有13个跨膜α-螺旋区。Northern杂交显示该基因可在肾、肝、脑、胎盘等多种组织中表达。激光共聚焦显微镜观察显示该蛋白定位于肾小管上皮细胞膜上。(本文来源于《科学技术与工程》期刊2004年11期)

袁莉,陈香美,崔世维,傅博,李志辉[6](2004)在《人高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白3对人成纤维细胞衰老进程的影响》一文中研究指出目的 探讨人高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白 3(hNaDC3)在人胚肺二倍体成纤维细胞 (WI 38)衰老中的作用。 方法 通过构建逆转录病毒载体 ,使用含有hNaDC3基因的逆转录病毒液将hNaDC3基因导入WI 38中 ,并获得表达 ,观察其对WI 38细胞衰老的影响。 结果 与对照细胞相比 ,hNaDC3基因导入后 ,WI 38细胞传代数减少 10~ 13代 ,生长速率降低 4 0 % ,细胞周期阻滞于G1期 ,细胞形态呈衰老细胞样变化 ,衰老相关 β 半乳糖苷酶 (SA β gal)染色阳性率上升 ,线粒体膜电位下降。 结论 hNaDC3可能促进人W 1 38衰老。(本文来源于《中华老年医学杂志》期刊2004年10期)

明凤,路群,戴薇,沈大棱[7](2004)在《水稻高亲和力磷酸盐转运蛋白功能的初步研究》一文中研究指出以所分离到的目的片段为基础 ,采用 3′RACE技术获得编码水稻磷酸盐转运蛋白基因的全序列 ,ORF区为含5 35氨基酸的基因 ,具有保守的酪蛋白激酶Ⅱ、N糖基化与蛋白激酶C作用位点的序列。通过对此蛋白编码基因功能的初步研究 ,认为此基因具有增加植物在缺磷胁迫下根系吸磷的能力 ,转基因的愈伤组织在低磷处理下具有相对于对照愈伤组织较高的吸磷速率。经对愈伤组织的PCR与PCRSouthern杂交分析 ,吸磷速率高的愈伤组织为遗传转化的阳性植株。(本文来源于《中国水稻科学》期刊2004年03期)

侯剀,白雪源,陈香美,冯哲,傅博[8](2004)在《高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白基因的克隆表达及亚细胞定位信号分析》一文中研究指出目的钠离子依赖性二羧酸转运蛋白(sodium dependentdicarboxylate transporter,SDCT)是一类负责叁羧酸循环中间产物跨膜转运的蛋白家族,包括低亲和力(SDCT1)和高亲和力转运蛋白(SDCT2)两类,分别负责从食物、原尿及血液中吸收叁羧酸循环中间产物。为了深入研究SDCT2蛋白的生理功能及其与疾病的关系,我们从小鼠肾组织中克隆出了SDCT2蛋白的全长基因并对其表达谱和亚细胞定位信号进行了分析。方法首先根据GenBank中的小鼠SDCT2基因序(本文来源于《“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编》期刊2004-06-30)

白雪源,陈香美,邱强[9](2002)在《人肾高亲和力钠离子依赖性二羧酸转运蛋白基因的克隆和生物信息学分析》一文中研究指出为探讨人高亲和力钠离子依赖性二羧酸转运蛋白 (humanhigh affinitysodium dependentdicar boxylatetransporter,hSDCT2orhNaDC3 )基因在人体内的生理功能及其与疾病的关系 ,借助生物信息学成功地从人肾中克隆了hSDCT2基因 (GenBank接收号 :AY0 72 810 ) .首先将大鼠SDCT2cDNA与人EST数据库进行同源性比较 ,获得具有高度同源性EST片段并用DNAstar软件将它们拼接成EST重迭群 .在重迭群上设计PCR引物从人肾总RNA中用RT PCR扩增出hSDCT2基因并测序 ,然后用软件对其结构特性、组织分布及基因定位进行分析 .序列测定结果显示 ,hSDCT2开放阅读框为180 9bp ,共编码 6 0 2个氨基酸 .蛋白同源性分析表明 ,其氨基酸序列与大鼠及小鼠SDCT2分别有85 %和 87%相同 .二级结构分析显示 ,该蛋白有 12个跨膜螺旋区 .Northern分析显示 ,该基因可在肾、肝、脑、胎盘等多种组织中表达 ,并定位于 2 0号染色体的q12~q13 1(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2002年04期)

张天宇[10](2002)在《1.决定烟叶钾含量的生理因素探讨 2.表达小麦硝酸盐高亲和力转运蛋白基因(TaNRT2;1)片段的质粒载体的构建》一文中研究指出烟农习惯烟草打顶,因为可以大大增加烟草的产量。而打顶却降低了烟叶的钾含量,从而品质下降。为了探明打顶烟叶中钾含量降低的分子生理学原因,寻找提高烤烟品质的种植措施,由云南农科院士肥所出资,我们进行了如下实验:通过用不同钾水平的培养液培养烟草,并分别进行打顶、留顶及打顶加激素处理,测定了各处理不同部位烟草叶片及根部钾含量,激素含量,ATP酶活性,并研究了根部ATP-binding Transporter转录水平表达的差异。主要结论有:1.培养液的钾浓度明显影响烟草植株各部分的钾含量。2.烟草地上部分的需钾量在调节其根部对钾的吸收上起主导作用。3.烟草顶端激素对烟草各部分的钾含量和分布有明显的作用,该作用与ATP酶活性密切相关。4.培养液的钾浓度及顶端激素对根中ATP-binding Transporter转录水平表达均有明显影响。5.打顶加生长素和细胞分裂素的处理可显着提高烟草各层次叶片的钾含量,这很可能成为生产实践上提高烟叶品质的方法。(本文来源于《首都师范大学》期刊2002-06-01)

高亲和力转运蛋白论文开题报告

(1)论文研究背景及目的

此处内容要求:

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例:

钠离子依赖性二羧酸转运蛋白(sDCT,NaDC)是一类负责叁羧酸循环中间产物跨细胞膜转运和重吸收的有机阴离子转运蛋白家族。根据对底物亲和力的不同,可将其分为低亲和力转运蛋白(NaDC1,SDCT1)和高亲和力转运蛋白 (NaDC3,SDCT2)。前者主要表达于小肠和肾小管,负责从食物和原尿中重吸收叁羧酸循环中间产物;后者主要在肾小管表达,但在肝、脑、胎盘等能量代谢非常活跃的重要器官也有表达.目前对于 NaDC3的功能并不很清楚.本研究试图探讨 NaDC3对细胞 ROS 产生及衰老的影响及其机制.首先将 NaDC3全长 cDNA 插入逆转录病毒质粒 pLNCX2中

(2)本文研究方法

调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

高亲和力转运蛋白论文参考文献

[1].侯剀,白雪源,陈香美,冯哲,傅博.大鼠高亲和力二羧酸转运蛋白的克隆表达及细胞内定位[J].生物技术通讯.2008

[2].白雪源,陈香美,傅博,汪扬,冯哲.高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白基因诱导人二倍体细胞衰老的分子机制研究[C].遗传学进步与人口健康高峰论坛论文集.2007

[3].刘维萍.高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白(NaDC3)促进肾脏衰老的机制研究[D].中国人民解放军军医进修学院.2007

[4].路群,明凤,娄玉霞,张珊珊,周根余.水稻高亲和力磷酸盐转运蛋白基因的克隆、表达及检测[J].复旦学报(自然科学版).2005

[5].白雪源,陈香美,侯剀,冯哲,傅博.高亲和力钠离子依赖二羧酸转运蛋白基因的克隆、表达及亚细胞定位研究[J].科学技术与工程.2004

[6].袁莉,陈香美,崔世维,傅博,李志辉.人高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白3对人成纤维细胞衰老进程的影响[J].中华老年医学杂志.2004

[7].明凤,路群,戴薇,沈大棱.水稻高亲和力磷酸盐转运蛋白功能的初步研究[J].中国水稻科学.2004

[8].侯剀,白雪源,陈香美,冯哲,傅博.高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白基因的克隆表达及亚细胞定位信号分析[C].“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编.2004

[9].白雪源,陈香美,邱强.人肾高亲和力钠离子依赖性二羧酸转运蛋白基因的克隆和生物信息学分析[J].中国生物化学与分子生物学报.2002

[10].张天宇.1.决定烟叶钾含量的生理因素探讨2.表达小麦硝酸盐高亲和力转运蛋白基因(TaNRT2;1)片段的质粒载体的构建[D].首都师范大学.2002

论文知识图

衣藻硝酸盐转运系统模式图(引自Galv...家族蛋白结构[120]跨细胞质膜与液泡膜的磷酸盐转运蛋白(R...磷有效性对根和地上部分干重的影响法测定脑组织中高亲和力谷氨...

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