导读:本文包含了平滑肌张力论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:平滑肌,细胞,通道,动脉,子宫,气道,氯喹。
平滑肌张力论文文献综述
张爽,王齐桓,秦力猛,滕可导,马云飞[1]（2016）在《益母散对孕鼠子宫平滑肌张力及Cx43表达的影响》一文中研究指出随着养殖业规模化集约化发展,动物生产己成为当今畜牧业的核心环节,然而猪场普遍存在母猪分娩无力、产程过长的问题,给畜牧业带来巨大的经济损失。新药益母散,是以益母草为君药制备的中药散剂,其主要活性成分益母草碱具有广泛的药理作用,如对子宫的影响以及心肌保护、抗氧化、神经保护的作用,该药主治分娩无力,症见宫缩无力,产程过长。子宫收缩强度受多种因素影响,主要包括血清激素水平和子宫平滑肌张力及缝隙连接蛋白Cx43表达。本研究采用离体平滑肌张力试验测定子宫平滑肌张力,用ELISA方法检测血清中催产素(OT)和前列腺素E2(PGE2)含量,用免疫组织化学及Western Blot方法检测子宫平滑肌中Cx43的表达,旨在评价益母散增进宫缩的能力,探讨其作用机制,为益母散的临床应用提供理论和实验依据。将妊娠小鼠随机分为对照组和益母散组,产前3天持续灌胃,待动物分娩后采血和取材。结果显示:与对照组相比,益母散组的子宫平滑肌收缩幅度显着提高26.06%(P<0.05),平均收缩张力提高21.13%(P<0.05);血清中OT、PGE2水平分别提高28.97%和16.74%(P<0.05);子宫平滑肌Cx43免疫反应阳性产物为棕黄色,主要分布在平滑肌细胞核周围的细胞质和细胞膜,与对照组相比,益母散组Cx43免疫反应阳性表达明显增强;Western Blot结果显示,益母散组子宫平滑肌的Cx43含量极显着提高26.77%(P<0.01)。本研究提示益母散可能通过提高血清OT、PGE2水平和子宫平滑肌中Cx43的表达,来促进小鼠分娩。(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物解剖及组织胚胎学分会第十九次学术研讨会论文集》期刊2016-08-20）
周静,董有静,丁旭东,赵广翊[2]（2016）在《地氟烷对卵白蛋白致敏豚鼠气道平滑肌张力的影响》一文中研究指出目的观察地氟烷对卵白蛋白致敏的豚鼠高反应气道平滑肌张力的影响。方法 56只雄性豚鼠随机分为7组:正常组(N)、致敏组(S)、致敏对照组(SC)和致敏地氟烷组[致敏0.5 MAC(最低肺泡有效浓度)地氟烷组(SD 0.5)、致敏1.0 MAC地氟烷组(SD 1.0)、致敏1.5 MAC地氟烷组(SD 1.5)和致敏2.0 MAC地氟烷组(SD 2.0)],每组8只。N组与S组用于气道模型评价;SC组、SD 0.5、SD 1.0、SD 1.5及SD 2.0组用于气道平滑肌测定。通过应用卵白蛋白制备致敏豚鼠模型。测量肺阻力,根据肺阻力对不同剂量乙酰胆碱的峰反应值,得到肺阻力剂量反应曲线,评价致敏气道模型。记录离体致敏豚鼠气道平滑肌对10~(-8)mol/L、10~(-7)mol/L、10~(-6)mol/L、10~(-5)mol/L的卡巴胆碱刺激的峰反应值,评价地氟烷对高反应致敏气道的作用。结果与N组相比,S组能显着升高豚鼠的肺阻力变化曲线;S组的肺阻力峰反应值比N组高40%(当乙酰胆碱剂量为6μg/kg时),P<0.05。与SC组相比,SD 0.5、SD 1.0、SD 1.5、SD 2.0组气道平滑肌张力峰值明显下降;卡巴胆碱剂量为10-5mol/L时,SD 1.5和SD 2.0组峰值分别比SC组降低了12.1%和14.0%,比SD 0.5组降低了8.9%和11.0%,P均<0.05。结论地氟烷能够降低卵白蛋白致敏的豚鼠的离体气道平滑肌张力。(本文来源于《大连医科大学学报》期刊2016年03期）
夏莉,叶思琪,Annie,Christel,Bell,高凌峰,陈志斌[3]（2016）在《国产张力传感器记录平滑肌等长张力曲线的应用研究》一文中研究指出长度-张力曲线是反映血管平滑肌生物力学特点的重要指标。张力传感器是记录平滑肌标本生物力学特性的必备工具,但能否准确记录标本自主收缩细微变化尚无明确方法学报道。本实验尝试采用限位装置调整标本长度准确记录被动舒张时的自主收缩状态。结果显示张力传感器可记录到细微初长度改变时标本的自主收缩,可反映不同前负荷的自主最大收缩/时间变化率峰值的出现时间。还可清晰记录标本环境离子浓度改变时的特征收缩曲线。实验证明国产张力传感器在记录平滑肌标本等长被动张力曲线中具有十分灵敏的效果,具有广泛应用于血管生理学及药理学的实验研究的可能。(本文来源于《现代测量与实验室管理》期刊2016年03期）
刘欣欣[4]（2016）在《周期性牵张力对血管平滑肌细胞增殖、迁移及胶原代谢的影响及其机制研究》一文中研究指出1.研究背景研究报道,心血管疾病已经严重危害人类健康,并且威胁人类的生命。高血压是心血管疾病主要危险因素之一。目前,我国高血压患者已突破3.3亿。由高血压造成的血管结构和功能异常是心血管疾病的主要病理学基础。高血压发生的同时往往伴有血管壁机械牵张力的增加。平滑肌细胞作为机械牵张力的靶细胞,其形态和功能随着机械牵张力的升高而发生改变,从而引起血管形态和功能的异常。研究认为,机械牵张力刺激血管平滑肌细胞时,机械刺激信号可通过平滑肌细胞表面的各种离子通道、受体分子等转化为细胞内的生物学信号,进一步影响平滑肌细胞的生物学功能。通常,我们将生理状态下血管壁受到的牵张力(9%-12%elongation)称之为生理性牵张力,可抑制平滑肌细胞的增殖、迁移,维持其收缩表型,维持血管正常的结构和功能；而在高血压、动脉粥样硬化等病理情况下,血管壁受到的牵张力升高(>15% elongation),我们称之为病理性牵张力,可促进平滑肌细胞的增殖、迁移,促进血管重构的发生。肾素-血管紧张素系统(Renin-angiotensin system, RAS)与心血管疾病关系密切。血管紧张素转化酶(Angiotensin converting enzyme, ACE)可催化血管紧张素Ⅰ(Angiotensin Ⅰ, Ang Ⅰ)产生血管紧张素Ⅱ (Angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)。Ang Ⅱ是RAS系统的重要效应分子,与其受体AT1R及AT2R结合发挥生物学效应。近年来,随着RAS系统新成员-血管紧张素转化酶2(ACE2)的发现,为深入研究RAS系统与心血管疾病的关系提供了新思路。ACE2是ACE的同系化合物,其结构与ACE相似,是一种锌离子依赖的金属蛋白酶。到目前为止,ACE2主要有两大生理功能：(1)催化血管紧张素Ⅱ转化为血管紧张素1-7；(2)催化血管紧张素Ⅰ转化为血管紧张素1-9,血管紧张素1-9可进一步被ACE降解为血管紧张素1-7。研究表明,血管紧张素1-7是一种与血管紧张素Ⅱ有相反作用的血管紧张素家族的终末活性产物。因而,ACE2被认为是RAS系统的负性调节因子。研究证明,力学刺激信号可以调节ACE2的表达,同时ACE2在心血管重构中有保护作用。那么,ACE2在机械牵张力调节血管平滑肌细胞功能中是否发挥作用,将是我们重点讨论的问题。机械牵张力在调节血管平滑肌细胞功能中发挥重要作用,同时ACE2亦参与对平滑肌细胞功能的调节,因而我们提出以下科学假说：(1)周期性牵张力调节人主动脉平滑肌细胞ACE2的表达；(2)周期性牵张力影响包括ACE2在内的RAS系统各主要成分的表达,ACE2-Ang-(1-7)轴与ACE-Ang Ⅱ轴相互制约、相互影响,共同参与病理性牵张力(18% elongation, 1Hz)对人主动脉平滑肌细胞生物学作用的影响。2.研究目的：(1)探讨周期性牵张力对血管平滑肌细胞ACE2表达的影响；(2)明确ACE2在病理性牵张力(18% elongation, 1Hz)调节人主动脉平滑肌细胞生物学功能中的作用；(3)明确病理性牵张力(18% elongation, 1Hz)调节血管平滑肌细胞ACE2表达的分子机制。3.研究方法3.1.人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)培养与处理3.1.1.平滑肌细胞培养人主动脉平滑肌细胞株购自美国菌种保藏中心ATCC (American Type CellCollection),待平滑肌细胞生长至完全融合后,用吸管吸掉旧培养基,PBS冲洗细胞两遍,在细胞培养瓶中加入适量事先预热的0.25%胰蛋白酶,显微镜下观察,至平滑肌细胞变圆后,轻轻拍打至细胞脱落,加入适量完全培养基中和胰酶,吹打细胞,使平滑肌细胞全部掉落,离心5min (1000r/min)。离心结束,用吸管吸掉上清,加入新的完全培养基,转入新的细胞培养瓶中,将培养瓶放入含5%C02的37℃细胞培养箱中继续培养。待平滑肌细胞贴壁完全后,显微镜下观察细胞形态及密度。3.1.2.平滑肌细胞干预体外培养的4-7代HASMCs用于实验。将平滑肌细胞种至铺有Ⅰ型胶原的Flexcell六孔板中。待平滑肌细胞在六孔板中的密度达到80%-90%时,更换无血清SMCM继续培养24小时。牵张力刺激平滑肌细胞前再次更换新的完全培养基。在37。C,5% C02条件下,使用Flexcell 5000-Tension系统刺激平滑肌细胞。不同牵张力描述如下：(1)生理性牵张力:10% elongation,频率为1Hz；(2)病理性牵张力：18% elongation,频率为1Hz。3.2.动物模型的建立我们应用大鼠腹主动脉缩窄模拟血管压力负荷升高,20只雄性Wistar大鼠(200-250g)随机分为两组：腹主动脉缩窄组(n=10)和对照组(n=10),分别于术后3、5及7天后取材。3.3.实时荧光定量PCR分析刺激结束后利用Trizol法提取平滑肌细胞中的总RNA,并测定RNA浓度。根据试剂盒说明,使用TaKaRa公司的cDNA合成试剂盒进行逆转录反应,再使用TaKaRa公司的实时定量PCR试剂盒进行PCR反应。反应结束后得到Ct值,用相对定量的方法计算2-△△Ct,并分析数据。以测定平滑肌细胞内ACE2及ACE的mRNA表达情况。3.4.蛋白质印迹法(Western Blot)提取不同刺激后的平滑肌细胞及大鼠组织蛋白,4摄氏度离心10分钟,99摄氏度晃动加热10分钟,SDS-PAGE电泳,转膜,5%脱脂奶粉封闭,4摄氏度一抗孵育过夜,室温下二抗孵育2小时,ECL化学发光,利用Photoshop分析对应蛋白条带的灰度值。3.5.ACE2活性测定刺激结束后,提取平滑肌细胞蛋白,以7-Mca-YVADAPK(Dnp)作为反应底物测定不同刺激条件下ACE2的活性变化情况。3.6.酶联免疫吸附测定(ELISA)收集不同刺激条件下平滑肌细胞上清液,ELISA法检测上清中血管紧张素1-7及血管紧张素Ⅱ的含量。3.7.构建含目的基因的病毒载体由上海吉凯基因化学技术有限公司构建过表达ACE2基因腺病毒载体(Ad-ACE2),以携带绿色荧光蛋白的腺病毒空载体(Ad-GFP)为对照组。3.8.5-澳脱氧尿嘧啶核苷法(BrdU)用Brdu法检测ACE2在病理性牵张力(18% elongation,1Hz)调节HASMCs增殖中的作用。将HASMCs种在Flexcell六孔板中,进行不同刺激。刺激结束后,吸掉旧SMCM,加入适量配制好的BrdU labeling medium作用6小时。将平滑肌细胞用95%7,醇在-20摄氏度固定30分钟,经anti-Brdu working solution4摄氏度孵育过夜、anti-mouse-Ig-fluorescein标记的二抗37摄氏度避光孵育30分钟,4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-Diaxnidino-2-Phenylindole, DAPI)染核后封片,光学显微镜下观察、拍照。3.9.细胞划痕实验用细胞划痕实验检测ACE2在病理性牵张力(18% elongation, 1Hz)调节HASMCs迁移中的作用。3.10.细胞转染利用Invitrogen公司的Lipofectamine2000分别转染不同浓度的Dicer siRNA、 ATF3 siRNA、Negtive control siRNA及miR-421 inhibitor和mimics,观察ACE2mRNA及蛋白的表达变化,验证ATF3及miR-421是否参与ACE2表达调节。DicersiRNA、ATF3 siRNA、Negtive control siRNA及miR-421 inhibitor和miR-421 mimics均由上海吉玛公司合成。3.11.构建含有ACE2-3'-UTR的荧光素酶报告基因质粒分别构建含有野生型ACE2基因的3'端非编码区序列(3'-UTR)和突变型ACE2基因的3'端非编码区序列(3'-UTR)的荧光素酶报告基因质粒(pGL3)：ACE2-3'-UTR-WT和ACE2-3'-UTR-MUT。通过Lipofectamine 2000,将miR-421mimics和ACE2-3'-UTR-WT或ACE2-3'-UTR-MUT共转染人胚肾细胞(Human Embryonic Kidney 293 cells, HEK293),检测荧光表达强度。明确miR-421与ACE2基因的3端非编码区的结合。3.12.组织学染色收集各组大鼠腹主动脉,制备石蜡切片。应用免疫组织化学染色,观察血管组织内ACE2及ACE的分布及表达情况。3.13.统计学分析实验所得数据均以均数±标准差表示,采用SPSS软件进行统计分析。两组之间的统计分析采用非配对t检验,多组之间的统计分析采用单因素方差分析,P<0.05代表统计学有显着性差异。4.结果4.1.周期性牵张力对平滑肌细胞内ACE2、ACE、Ang(1-7)、Ang Ⅱ表达的影响在时间-效应实验中,18%机械牵张力能够抑制ACE2的表达,在12小时时间点达到最大抑制效应(p<0.01),同时ACE2的活性下降(p<0.05)；而18%机械牵张力促进ACE的表达(p<0.05),其mRNA于刺激后12小时达到峰值(p<0.01)；18%机械牵张力作用3、6小时后,Ang Ⅱ、Ang (1-7)水平比0小时对照组无明显变化,18%牵张力作用12h后,Ang Ⅱ水平显着增加(P<0.01),而Ang(1-7)水平显着降低(P<0.01),且这一趋势持续至机械牵张力刺激24小时。在张力-效应实验中,与静止对照组相比,18%机械牵张力刺激12小时后,ACE2表达下降(p<0.05)、活性降低(p<0.05)；与生理牵张力刺激组相比,18%牵张力刺激12小时后,ACE2表达下降(p<0.05)、活性降低(p<0.01)。而18%牵张力作用12小时后,其ACE表达比静止对照组显着增加(p<0.01),比生理牵张力刺激组亦显着增加(p<0.01)。与静止对照组相比,18%牵张力干预平滑肌细胞12小时后,Ang Ⅱ水平升高明显(P<0.01),而Ang(1-7)水平降低明显(P<0.01)；与生理牵张力刺激组相比,Ang Ⅱ水平亦升高明显(P<0.01),Ang(1-7)水平亦降低明显(P<0.01)。4.2.体内试验验证压力负荷对血管平滑肌细胞ACE2及ACE表达的影响免疫组化结果显示：与假手术组相比,大鼠腹主动脉缩窄5及7天后,ACE2表达下降(P<0.01)；而大鼠腹主动脉缩窄7天后,ACE表达升高(P<0.01)。WesternBlot结果显示：与假手术组相比,大鼠腹主动脉缩窄5及7天后,ACE2表达下降(P<0.01)；而ACE表达升高(P<0.01)。4.3.ACE2对病理性牵张力调节平滑肌细胞增殖、迁移及胶原代谢的影响Brdu掺入法结果提示：与Ad-GFP组相比,Ad-GFP+stretch组促进平滑肌细胞的增殖(P<0.01)；与Ad-GFP+stretch组相比,Ad-ACE2+stretch组抑制平滑肌细胞增殖(P<0.05)。细胞划痕试验表明：与Ad-GFP组相比,Ad-GFP+stretch组促进平滑肌细胞的迁移(P<0.01)；与Ad-GFP+stretch组相比,Ad-ACE2+stretch组抑制平滑肌细胞迁移(P<0.05)。Westerb Blot结果提示：与Ad-GFP组相比,Ad-GFP+stretch组胶原表达升高(P<0.05)；与Ad-GFP+stretch组相比,Ad-ACE2+stretch组胶原表达没有明显变化(P>0.05)。以上结果表明, ACE2参与病理性牵张力(18% elongation,1Hz)对平滑肌细胞增殖、迁移的调节,但是不参与对胶原代谢的调节。4.4.p38参与病理性牵张力对ACE2的调节作用病理性牵张力(18% elongation,1Hz)使得磷酸化p38及磷酸化JNK水平升高(p<0.05),而对磷酸化ERK的表达没有影响(P>0.05)。我们应用ERK1/2抑制剂(PD98059)、JNK抑制剂(SP600125)和p38抑制剂(SB203580)干预病理性牵张力(18% elongation,1Hz)刺激。检测发现SB203580能够阻断病理性牵张力对ACE2的下调作用(P<0.05)。表明p38参与病理性牵张力对ACE2表达的调节。4.5.ATF3参与病理性牵张力对ACE2的调节作用将ATF3的siRNA转染入HASMCs中将其沉默,Western Blot结果显示：与阴性对照组相比,ATF3的干扰可阻断病理性牵张力对ACE2的下调(P<0.01),表明ATF3参与病理性牵张力(18% elongation,1Hz)对ACE2的下调作用。4.6.miR-421参与病理性牵张力对ACE2的调节作用将Dicer siRNA转染入HASMCs中沉默Dicer酶后,ACE2表达升高,表明microRNA参与对ACE2表达的调节。应用TargetScan, microCosm等着名的MicroRNA分析预测软件,确定ACE2是miR-421的潜在靶基因。转染miR-421mimics或miR-421 inhibitor后,平滑肌细胞内ACE2的表达水平显着降低或升高。将miR-421 mimics与ACE2-3'-UTR-WT共转染HEK293细胞后,荧光强度显着降低。给予18%牵张力刺激,发现miR-421水平升高。将平滑肌细胞转染miR-421mimics后,再给予18%牵张力刺激,发现ACE2表达水平显着降低。表明miR-421参与病理性牵张力对ACE2的调节作用。5.结论(1)病理性牵张力抑制ACE2及Ang(1-7)的表达,促进ACE及Ang Ⅱ的表达；(2)ACE2参与病理性牵张力对平滑肌细胞增殖、迁移的调节,不参与对胶原代谢的调节；(3) p38、ATF3及miR-421参与病理性牵张力对ACE2的调节作用。1.研究背景血管一直暴露于血流动力学的作用下,异常的血流动力学,例如血压增高状态下,容易引起血管重构。血管重构主要表现为血管功能、血管管腔面积及形态、血管壁细胞和细胞外基质的重构。胶原作为细胞外基质的主要成分,其合成和降解过程与血管重构密切相关。4-羟基-脯氨酸羟化酶(Prolyl 4-Hydroxylase,P4H)是胶原合成过程中的关键酶,能够催化位于X-脯氨酸-甘氨酸(X-Pro-Gly)中的脯氨酸变为羟脯氨酸,该反应在胶原形成稳定叁螺旋结构的过程中发挥重要作用。而P4H由2个α亚基和2个p亚基组成,α亚基是胶原合成过程中的重要限速酶,可决定酶的活性。过表达P4H则导致胶原的合成增多,而抑制P4H的表达会导致胶原的降解和不稳定。基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases, MMPs)可降解多种细胞外基质成份,其在病理及生理的细胞外基质重塑中起到重要作用。MMPs的活性受到多方面的调节：转录水平调节、分泌酶原的活化及基质金属蛋白酶组织抑制剂(Tissue inhibitor of metalloproteases, TIMPs)的抑制。我们的前期研究发现病理性牵张力(18% elongation,1HZ)促进人主动脉平滑肌细胞(Human Aortic Smooth Muscle Cells, HASMCs)胶原蛋白的表达,而ACE2 (Angiotensin converting enzyme 2, ACE2)并不参与其中,那么病理性牵张力是否通过P4H和MMPs影响胶原蛋白的代谢?ACE2是否可以影响平滑肌细胞内P4H和MMPs的表达?有待于我们进一步的研究。细胞膜表面的酪氨酸激酶受体(Receptor tyrosine kinase, RTKs)、整合素(Integrin)、离子通道等结构均可以将胞外力学刺激转化为胞内生化信号,激活PI3K/Akt、MAPKs、PKC等多种信号分子,活化多种转录因子,通过改变细胞增殖、调亡、表型转化、细胞外基质代谢等有关基因的表达而影响细胞功能。前期研究发现,PI3K/Akt通路参与血管平滑肌细胞MMP-2的表达。机械牵张力通过MAPKs信号通路调节血管平滑肌细胞的不同功能。我们实验室发现,ox-LDL通过p38和ERK 1/2抑制P4Hα1的表达,ASK1-JNK通路参与肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor, TNF)对P4Hα1的抑制作用。那么病理性牵张力是否通过PI3K/Akt和MAPKs信号通路调节HASMCs MMPs及P4H的表达,尚需要进一步的明确。为了观察高血压状态下血管壁胶原的重构过程,我们研究了病理性牵张力(18%elongation,1HZ)引起MMPs和P4H的变化及相关机制,探讨了病理性牵张力对胶原代谢的影响。2.研究目的：(1)探讨周期性牵张力对血管平滑肌细胞P4Hα1、MMPs、TMP-1、TIMP-2及胶原表达的影响；(2)明确病理性牵张力(18% elongation,1 HZ)调节血管平滑肌细胞P4Hα1及MMP-2表达的分子机制；(3)研究ACE2对血管平滑肌细胞P4Hα1、MMP-2表达的影响。3.研究方法：3.1.人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)培养人主动脉平滑肌细胞株购自美国菌种保藏中心(ATCC),待平滑肌细胞生长至完全融合后,用吸管吸掉旧SMCM,PBS冲洗细胞两遍后,在细胞培养瓶中加入事先预热的0.25%胰蛋白酶,拧紧瓶盖,显微镜下观察,待平滑肌细胞变圆后,轻轻震荡至细胞脱落,加入适量培养基中和胰酶,吹打细胞,使平滑肌细胞掉落,移至离心管中,离心5min (1000r/min)。离心结束,弃掉上清,加入新的完全培养基,转入新的培养瓶放入含5% C02的37℃细胞培养箱中继续培养。第4-7代HASMCs用于实验。3.2.平滑肌细胞处理体外培养的4-7代HASMCs用于实验。将平滑肌细胞种至铺有Ⅰ型胶原的Flexcell六孔板中。待平滑肌细胞在六孔板中的密度达到800%-90%时,更换无血清SMCM继续培养24小时。牵张力刺激平滑肌细胞前再次更换新的完全培养基。在37。C,5%C02条件下,使用Flexcell 5000-Tension系统刺激平滑肌细胞。不同牵张力描述如下：(1)生理性牵张力：10% elongation,频率为1Hz；(2)病理性牵张力：18% elongation,频率为1Hz。3.3.动物模型的建立20只雄性Wistar大鼠(200-250g)随机分为两组：腹主动脉缩窄组(n=10)和对照组(n=10)。分别于术后3、5、7天取材。3.4.实时荧光定量PCR分析刺激结束后利用Trizol法提取细胞中的总RNA,用紫外分光光度仪测定RNA浓度。根据TaKaRa公司的试剂盒操作说明,使用cDNA合成试剂盒进行逆转录反应,再使用TaKaRa公司的实时定量PCR试剂盒进行PCR反应。反应结束得到Ct值,用相对定量的方法计算2-△△Ct,并分析数据。以测定P4Hα1、MMP-2、 TIMP-1及TIMP-2的mRNA表达情况。3.5.蛋白质印迹法(Western Blot)提取不同刺激后的细胞或组织蛋白,4℃离心10分钟,99℃晃动加热10分钟,SDS-PAGE电泳,转膜,5%脱脂奶粉封闭,4℃一抗孵育过夜,室温下二抗孵育2小时,化学发光,分析对应的蛋白条带的灰度值。3.6.酶联免疫吸附测定(ELISA)刺激结束后,收集平滑肌细胞上清,ELISA检测其中Ⅰ型和Ⅲ型胶原含量。3.7.明胶酶谱采用明胶酶谱法检测HASMCs及大鼠血管平滑肌细胞中MMP-2和MMP-9的活性。3.8.组织学染色收集各组大鼠腹主动脉,制备石蜡切片,进行Masson染色,显示血管壁胶原的含量。应用免疫组织化学染色,观察血管组织内P4Hα1、MMPs、TIMP-1及TIMP-2的分布及表达情况。3.9.统计学分析实验所得数据均以均数±标准差表示,采用SPSS软件进行统计分析。两组之间的统计分析采用非配对t检验,多组之间的统计分析采用单因素方差分析,P<0.05代表统计学有显着性差异。4.研究结果4.1.病理性牵张力对人主动脉平滑肌细胞内P4Hα1、MMPs及TIMPs表达的影响在时间-效应实验中,病理性牵张力(18% elongation,1HZ)能够促进P4Hα1的表达,在12小时时间点达峰(p<0.05)。明胶酶谱法检测MMPs的活性,发现18%牵张力刺激可以增加HASMCs中MMP-2的活性(p<0.05),但在该实验中未能检测出MMP-9的活性。RT-PCR及Western blot检测发现,病理性牵张力能够促进MMP-2的表达(p<0.05)。而病理性牵张力刺激对TIMP-1及TIMP-2的表达没有明显影响(p>0.05)。在张力-效应实验中,与静止对照组及生理牵张力刺激组相比,病理性牵张力刺激12小时后,P4Hα1显着升高(p<0.01)。应用明胶酶谱法检测,10%及18%牵张力均能升高平滑肌细胞内MMP-2的活性(p<0.01),而与10%牵张力组相比,18%牵张力升高MMP-2活性的程度更为明显(p<0.01)。RT-PCR及Westernblot结果提示,与静止对照组及生理牵张力刺激组相比,18%机械牵张力能够促进MMP-2的表达(p<0.05)。同样,10%及18%牵张力刺激平滑肌细胞12小时后,平滑肌细胞内TIMP-1及TIMP-2的表达没有明显影响(p>0.05)。4.2.病理性牵张力对人主动脉平滑肌细胞内胶原表达的影响应用ELISA及Western blot检测平滑肌细胞内胶原蛋白的表达水平。结果提示,病理性牵张力(18% elongation,1Hz)刺激平滑肌细胞12小时后,胶原Ⅰ及胶原Ⅲ的表达水平显着升高(p<0.05)。4.3.MMP-2及P4Ha1参与病理性牵张力对胶原代谢的影响我们应用siRNA干扰MMP-2及P4Ha1的表达,发现MMP-2 siRNA及P4Hα1siRNA能升高或降低病理性牵张力(18% elongation,1Hz)引起的胶原蛋白的表达,证明在病理性牵张力作用下,MMP-2及P4Hα1参与对胶原的调节。4.4.体内试验验证压力负荷对血管平滑肌细胞P4Hα1、MMPs、TIMPs及胶原表达的影响应用明胶酶谱法检测发现,大鼠腹主动脉缩窄7天后MMP-2的活性显着增加(p<0.05),但未能检测出MMP-9的活性。免疫组化及Western blot结果显示：与假手术组相比,大鼠腹主动脉缩窄后,P4Ha1及MMP-2表达升高(p<0.05),而TIMP-1及TIMP-2的表达没有明显变化(p>0.05)。应用Mssson染色及Western blot检测压力负荷增加对胶原蛋白的影响,结果提示大鼠腹主动脉缩窄后血管内胶原含量增加(p<0.05)。4.5.Akt在病理性牵张力调节平滑肌细胞MMP-2及P4Ha1表达中的作用病理性牵张力(18% elongation,1Hz)使得磷酸化Akt水平升高(p<0.05)。给予平滑肌细胞Akt抑制剂LY294002预处理1小时,然后给予18%牵张力刺激12小时,发现LY294002预处理可降低病理性牵张力诱导的MMP-2表达上调及活性升高(P<0.05),却并不降低牵张力诱导的P4Hα1表达上调(P>0.05)。表明Akt参与病理性牵张力对MMP-2表达的调节,不参与对病理性牵张力对P4Hα1表达的调节。4.6. MAPKs在病理性牵张力调节平滑肌细胞MMP-2及P4Ha1表达中的作用病理性牵张力(18% elongation,1Hz)使得磷酸化p38及磷酸化JNK水平升高(p<0.05),而对磷酸化ERK的表达没有影响(P>0.05)。我们应用MAPKs的抑制剂SB203580、SP600125和PD98059干预病理性牵张力(18% elongation,1Hz)刺激。检测发现SB203580、SP600125和PD98059对病理性牵张力促进MMP-2表达的作用没有明显影响(P>0.05),对升高MMP-2活性的作用亦没有明显影响(P>0.05)。然而,SB203580和SP600125能够阻断病理性牵张力对P4Hα1的上调作用(P<0.01)。表明MAPKs不参与病理性牵张力对MMP-2表达的调节,p38和JNK参与病理性牵张力对P4Hα1表达的调节。4.7ACE2对MMP-2及P4Ha1表达的影响我们前期研究发现,ACE2不参与病理性牵张力(18% elongation,1Hz)对胶原代谢的调节。而MMP-2和P4Hα1参与病理性牵张力对胶原代谢的影响。本研究探讨了ACE2对MMP-2及P4Hα1表达的影响。应用siRNA干扰ACE2的表达,发现ACE2 siRNA对平滑肌细胞内MMP-2和P4Hαl的表达没有明显影响(P>0.05),进一步表明了ACE2不参与病理性牵张力对胶原代谢调节的作用。5.结论(1)病理性牵张力(18% elongation,1Hz)上调P4Hα1、MMP-2及胶原的表达,对TMP-1和TIMP-2的表达没有影响；(2)18%牵张力通过激活Akt和p38 MAPK-JNK信号通路促进MMP-2、 P4Hα1的表达。(3)MMP-2及P4Hα1参与病理性牵张力对胶原代谢的影响,ACE2不参与病理性牵张力对胶原代谢的影响,且ACE2对不影响平滑肌细胞内MMP-2和P4Hal的表达。(本文来源于《山东大学》期刊2016-05-10）
黄庆芳,陈艳芬,杨全,杨超燕,唐春萍[5]（2016）在《4种温里药对兔回肠平滑肌张力及Ca~(2+)-ATP酶的影响》一文中研究指出目的探讨高良姜、肉桂、吴茱萸、干姜4种温里药对家兔体外回肠平滑肌张力及细胞膜上Ca~(2+)-ATPase活性的影响。方法利用BL-420E+生物信号采集处理系统,记录高良姜、肉桂、吴茱萸、干姜水煎液对正常肠肌和氯化乙酰胆碱(ACh)、氯化钡(BaCl_2)、磷酸组胺(His)所致体外肠肌收缩及对ACh诱导兔回肠平滑肌内钙释放和外钙收缩的影响,测量给药前1 min内和给药后3 min内的平均张力,并根据平均张力值计算抑制率。用定磷法测定高良姜、肉桂、吴茱萸、干姜含药血清对肠平滑肌细胞膜上Ca~(2+)-ATPase活性的影响。结果高良姜、肉桂、吴茱萸、干姜高浓度组均能显着抑制正常情况下体外肠收缩(P<0.05或P<0.01);各味药低、中、高浓度组对ACh、His及BaCl_2所引起的体外肠收缩均有显着抑制作用(均P<0.01),抑制率与药物终浓度呈一定量效关系;对ACh诱导的依内钙性收缩和依外钙性收缩均有显着抑制作用(P<0.05或P<0.01);正常对照组和高良姜、肉桂、吴茱萸、干姜高浓度组肠平滑肌Ca2+-ATPase活性分别为(0.384±0.070),(0.302±0.016),(0.307±0.016),(0.296±0.016),(0.313±0.003)U·mg-1(均P<0.01)。结论温里药可能通过减少细胞内钙释放,减少细胞外钙经由受体操纵性钙通道内流,同时抑制平滑肌Ca2+-ATPase活性,从而降低细胞内[Ca2+],舒张肠平滑肌。(本文来源于《医药导报》期刊2016年05期）
毛敬,韩志敏,周木兰,董玲玲[6]（2016）在《持续性牵张力在高糖状态下对子宫平滑肌细胞收缩蛋白表达的影响》一文中研究指出目的:探讨持续性牵张力在高糖环境下对大鼠子宫平滑肌细胞催产素受体和前列腺素受体表达的影响。方法:体外培养大鼠子宫平滑肌细胞,高糖作用不同时间后,观察高糖状态下大鼠子宫平滑肌细胞催产素受体和前列腺素受体表达变化情况。对高糖状态下的肌细胞施加持续性牵张力,明确牵张力对肌细胞催产素受体和前列腺素受体表达的影响以及高糖和牵张力之间的协同作用,同时采用晚期糖基化终末产物(AGEs)抑制剂(sRAGE)拮抗高糖作用作为对照,比较加入抑制剂后,催产素受体和前列腺素受体表达变化情况。结果:单独高糖培养或单独持续性牵张力都可导致大鼠子宫平滑肌细胞裂解液中催产素受体和前列腺素受体表达量上升,二者同时施加,可使催产素受体和前列腺素受体表达进一步上升,并有一定的协同效应。加入sRAGE后均可使催产素受体和前列腺素受体表达部分下降,但仍高于生理糖浓度组。结论:高糖状态及牵张力均可促进肌细胞催产素受体和前列腺素受体表达增加,并有一定协同作用,AGEs参与了这一过程,但并不是唯一途径。(本文来源于《国际妇产科学杂志》期刊2016年02期）
陈梅华[7]（2016）在《Orail-BK_(Ca)信号复合物调节血管平滑肌细胞收缩和血管张力的作用及其机制》一文中研究指出目的大电导钙激活钾通道(large-conductance calcium-activated K+ channels, BKca)是电压门控的钾离子通道超家族成员,广泛分布于血管平滑肌细胞中,在调节血管舒缩活动中起重要作用。细胞膜的去极化以及细胞内钙离子的增多引发BKCa通道开放,BKCa通道开放使得细胞膜超极化从而抑制电压依赖型钙通道(voltage-dependent calcium channel, VDCC)的开放,调节平滑肌的收缩。钙离子作为细胞信息传递的胞内第二信使,是引起平滑肌收缩的关键因子,而钙库操纵的钙内流(store-operated Ca2+ entry, SOCE)是调节钙离子内流进入细胞最普遍的一种途径,由钙库操纵的钙内流通道(store-operated Ca2+ channel, SOCC)介导,其主要组成成分Orai1是位于细胞膜上的四次跨膜蛋白,钙库耗竭后STIM1聚集使Orail通道开放,介导外钙内流。因此我们猜想Orai1与BKca可能存在功能上相互关系,当SOCC通道开放引起的细胞内局部Ca2+浓度升高可激活邻近BKCa通道,以防止收缩性激动剂引起肠系膜动脉平滑肌过度收缩。本文旨在探究肠系膜动脉平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell, VSMCs)中Orai1和BKCa是否存在功能上的内在联系,阐明Orai1-BKCa功能复合物在调节VSMCs收缩过程中的作用及在高血压引起的血管病变中的改变。方法1.原代培养VSMCs选用雄性SD大鼠,体重在250 g左右,SPF级。经C02窒息法处死后,在无菌条件下取出肠系膜动脉主干,用棉签擦去内皮,剩下的平滑肌层剪碎用0.2%的IA型胶原酶和0.9%木瓜蛋白酶消化1 h,消化下来的VSMCs用含有10%的胎牛血清和1%双抗的DMEM培养5到7天,用于后续实验。2.钙成像原代培养的VSMCs用Orail siRNA或者Scrambled siRNA孵育24 h,之后用10μmol/L的Fluo-8/AM(含0.02%pluronic F-127)在黑暗的环境下,37℃孵育40 min,然后用4μmol/L的TG在无钙缓冲液(0Ca2+-PSS)中处理10 min,胞内的钙库被耗竭之后,用1 mmol/L的外Ca2+补充,整个实验过程中钙离子荧光信号记录过程由尼康倒置显微镜完成。同时,胞内Ca2+浓度的变化按荧光相对强度之比计算F1/F0)。3.膜电位原代培养的VSMCs用Orail siRNA.Scrambled siRNA孵育24 h,之后用100nmol/L DiBAC4(3)在黑暗环境下,37℃孵育10 min,然后用4 μmol/L的TG在0Ca2+-PSS中处理10-20 min,胞内的钙库被耗竭之后,在细胞外液中加入1 mmol/LCa2+,整个实验过程中荧光信号记录由尼康倒置显微镜完成。同时,胞内荧光浓度的变化按荧光相对强度之比计算。4.等长张力实验取肠系膜二级分支,约2 mm置于含新鲜Krebs液的培养皿里,期间通入95%O2和5%CO2的混合氧,用DMT 620M血管张力测定系统记录经阻断剂IbTX和Orail siRNA预处理后,不同浓度Phe和ET1引起的量效关系。5.免疫共沉淀免疫共沉淀检测在大鼠肠系膜动脉主干平滑肌中Orail和BKca蛋白是否存在相互作用。6.邻位连接技术(PLA)利用PLA试剂盒再次检测Orail和BKca蛋白之间的相互作用。原代培养的VSMCs种于玻片上,之后按PLA试剂盒的要求进行一系列的操作,只有当Orail和BKCa蛋白之间的距离小于40 nm才可以检测到二者之间存在相互作用,PLA信号由Leica TCS SP5共聚焦显微镜记录。7.统计学处理所有实验数据均以平均值士标准误(means±SEM)表示并运用Sigma Plot 12.5软件进行非配对t检验(Student's unpaired t test)对数据进行统计分析,P<0.05时认为两组之间的差异具有统计学意义。结果1.在原代培养的血管平滑肌细胞中SOCE由Orai1介导,Ca2+通过Orai1通道流入胞内,并且引起VSMCs超极化。2. Orai1介导的SOCE,Ca2+内流引起VSMCs超极化,这一效应可以被BKc。的阻断剂显着抑制。3. Orai1 siRNA和BKca阻断剂IbTX孵育后的肠系膜动脉激动剂引起其收缩显着增强。4.免疫共沉淀显示Orai1和BKca:蛋白可以相互共沉淀,二者之间存在相互作用。5.PLA结果显示,加有Orai1和BKca两种蛋白抗体的出现阳性荧光信号,但只加Orai1一抗的阴性对照没有出现荧光信号。结论Orai1介导SOCE,Ca2+通过SOCE途径由Orai1通道流入胞内,激活BKca引起VSMCs的超极化,而且Orai1-BKCa形成的信号复合物可以抑制激动剂引起的去极化,防止激动剂引起的血管平滑肌过度收缩。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2016-03-01）
陈瑾[8]（2016）在《川芎嗪对子痫前期胎盘小动脉血管张力的影响：血管平滑肌BK_(Ca)通道的作用机制》一文中研究指出目的:研究子痫前期胎盘小动脉舒缩功能的变化及川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对其血管张力的影响,探讨血管平滑肌BK_(Ca)通道在其中可能存在的作用机制,为川芎嗪在治疗子痫前期的临床应用提供实验依据。方法:利用离体血管环张力实验记录KCl(80mmol/L)、血栓素A2类似物U46619(10~(-10)~10~(-7)mol/L)、TMP(10~(-6)~10~(-2) mol/L)以及BK_(Ca)通道特异性阻断剂IbTX(100~200nmol/L)对去内皮人胎盘小动脉的血管舒缩作用,使用DMT和PowerLab系统记录血管环张力变化。比较正常妊娠组(normal pregnancy group,NP组)、子痫前期组(preeclampsia group,PE组)和经过IbTX预处理的NP组、PE组的血管张力变化。结果:(1)KCl(80mmol/L)及U46619(10~(-7)mol/L)对PE组血管环的收缩反应明显强于NP组(p<0.01);(2)KCl(80mmol/L)诱发血管环张力达到坪值后再恢复到基础张力的舒张时间,PE组明显长于NP组(p<0.01);(3)不同浓度U46619(10~(-10)~10~(-7)mol/L)对PE组和NP组血管环均有浓度依赖性的收缩作用,PE组明显强于NP组(p<0.05);(4)Ib TX(100nmol/L)对胎盘小动脉的基础张力无影响(p>0.05);(5)经过IbTX(100nmol/L)预处理后,U46619对PE组和NP组收缩作用均增强,且PE组的增强程度较NP组的更大(p<0.05),而PE组和经过IbTX预处理的np组对各浓度u46619的收缩能力接近,两组最大收缩率emax和对u46619的敏感性pd2值均无统计学差异(p>0.05);(6)不同浓度tmp(10~(-2)~10~(-6)mol/l)对u46619(10~(-7)mol/l)预收缩的血管环均有浓度依赖性的舒张作用,pe组明显弱于np组(p<0.05);(7)ibtx(100nmol/l)明显抑制tmp对np组的舒张能力(p<0.05),而不能抑制tmp对pe组的舒张能力(p>0.05),pe组与经过ibtx预处理的np和pe两组对各浓度tmp的舒张能力接近,叁组的最大舒张率emax无统计学差异(p>0.05);(8)ibtx(200nmol/l)对tmp正在显着舒张的血管环有轻微的收缩作用,但ibtx(200nmol/l)对pe组和np组的收缩百分比无统计学差异(p>0.05);(9)tmp对pe组(n=10,n=6)和np组(n=12,n=7)中一部分血管环的基础张力无影响(p>0.05),而pe组(n=10,n=4)和np组(n=12,n=5)中也有一部分血管环在tmp10~(-3)mol/l时出现反常的可逆性的缩血管作用,两组的最大收缩率无统计学差异(p>0.05),pe组收缩时间短于np组(p<0.05)。结论:(1)子痫前期胎盘小动脉的收缩反应增强而舒张能力下降,可能与血管平滑肌细胞bkca活性下降有关;(2)ibtx(100nmol/l)不影响胎盘小动脉基础张力;(3)川芎嗪(10~(-6)~10~(-2)mol/l)对u46619(10~(-7)mol/l)预收缩的胎盘小动脉有显着的浓度依赖性舒张作用,可能与川芎嗪直接激活血管平滑肌上bkca通道有关;(4)川芎嗪(10~(-6)~10~(-2)mol/l)对u46619(10~(-7)mol/l)预收缩的子痫前期胎盘小动脉的舒张作用明显减弱,可能与血管平滑肌细胞bkca活性下降有关;(5)ibtx(100nmol/l)明显抑制川芎嗪对正常妊娠的胎盘小动脉的舒张能力,而对子痫前期组的川芎嗪舒血管功能的抑制作用不强;(6)人胎盘小动脉的基础张力可能不受川芎嗪影响,也可能在川芎嗪10~(-3)mol/L或某个浓度范围内发生反常的可逆性的缩血管现象。(本文来源于《西南医科大学》期刊2016-03-01）
韦命余[9]（2015）在《大电导钙激活钾通道在氯喹调节气管平滑肌张力中的作用》一文中研究指出大电导钙依赖的钾通道(BK通道)是否参与氯喹舒张预收缩气管平滑肌的过程尚不清楚。在本研究中我们发现,iberiotoxin(IbTx,BK通道特异性阻断剂)和氯喹都能阻断小鼠气管平滑肌细胞中的自发性瞬时外向电流(Spontaneous transient outward currents,STOCs),这意味着氯喹可以阻断BK通道。我们又进一步发现了氯喹能阻断钙火花(Ca2+sparks)和咖啡因引起的细胞内钙升高,表明氯喹能阻断兰尼碱受体(Ryanodine receptors,RyRs)。此外,还发现了氯喹可以从气管平滑肌细胞内膜完全阻断BK通道的单通道电流,从细胞外膜也能部分阻断该电流。这些结果表明,氯喹通过阻断兰尼碱受体和BK通道抑制了自发性瞬时外向电流。另外,我们还发现乙酰胆碱(ACH)预刺激情况下低浓度氯喹(3.16μM,31.6μM)能引起气管环微小的收缩,增加氯喹浓度(100μM,316μM,1 mM)则能引起预收缩的气管环完全舒张。当在使用ACH刺激前加入BK通道特异性阻断剂Paxilline(Pax)或IbTx后,低浓度氯喹引起的小收缩消失,高浓度氯喹引起的舒张不受任何影响。我们的实验结果表明氯喹阻断BK通道和兰尼碱受体,使自发性瞬时外向电流受抑制,引起细胞收缩,而这一收缩可以被高浓度氯喹引起的舒张抵消,最终氯喹使预收缩的气管环舒张。(本文来源于《中南民族大学》期刊2015-05-22）
孟祥敏[10]（2015）在《硫化氢对小鼠胃底平滑肌张力的调控作用及其机制》一文中研究指出硫化氢(H2S)是一种无色、易燃的酸性气体,具有明显的毒性。多年来的认识主要局限于其毒性作用。但是近年来的研究发现,硫化氢在哺乳动物体内广泛存在,而且具有重要的细胞保护作用。其主要的合成酶,胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS)和胱硫醚-γ-裂解酶(cysta-thionine-γ-lyase,CSE)在哺乳动物的不同组织内广泛表达,但是有分布的差异。比如,神经细胞以CBS为主要分布,而心血管系统则主要以CSE为主要分布,在消化道内,结肠、肝脏主要以CSE为要分布。近年来的研究认为,内源性的H2S是继一氧化氮(NO)和一氧化碳(CO)之后的第叁种气体信号分子,广泛参与了机体的多种生理与病理过程。例如,H2S调节线粒体内ATP的生成;此外,H2S通过激活ATP敏感的钾通道调节胰岛素分泌,参与糖尿病的发生发展过程;H2S还可以通过影响ATP敏感的钾通道在心血管系统以及呼吸系统发挥作用,尤其H2S在对抗缺氧缺血引起的心肌损伤中的作用日益受到重视。一方面,H2S激活蛋白激酶C及肌膜ATP敏感钾通道,保护大鼠心脏对缺血-再灌注引起的损伤;另一方面,H2S能促进大鼠心肌细胞增殖、血管的平滑肌细胞的增殖迁移。在消化道,食物的机械性消化依赖于消化道的运动,包括蠕动、分节运动等运动形式,而消化道运动的主体是消化道平滑肌,本身的张力是消化道运动的基础。消化道平滑肌除了受外来神经、肠神经和体液因素调节之外,也可以通过自身调节机制保持其紧张度。例如,细胞内的各种生物活性分子,如h2s、no等可能是自身调节机制的重要的活性分子。已有研究证实,胃肠道的黏膜、肠神经和平滑肌组织均有cbs和cse分布,可以产生内源性的h2s;此外,结肠内的细菌分解消化产物的过程中会产生h2s。因此,阐明h2s调控胃肠道运动及其机制具有重要的生理学以及潜在的临床意义。本文主要通过电生理学以及分子生物学的方法,研究h2s在小鼠胃底平滑肌运动调控中的作用及其机制。首先,我们研究了h2s对平滑肌经典钙依赖性收缩途径——兴奋收缩耦联的影响:利用免疫组织化学的方法检测了h2s合成酶在小鼠胃平滑肌细胞上的表达情况;采用离体肌条实验检测h2s对离体肌条张力的影响;采用细胞内记录的方法检测h2s对平滑肌细胞膜电位的影响;采用全细胞膜片钳的方法检测h2s对单个平滑肌细胞电压依赖性钾通道以及l-型钙通道电流的影响;采用钙荧光成像技术检测h2s对细胞内钙离子浓度的影响。其次,探讨了h2s对no生成的影响及其作用机制:利用免疫组织化学的方法检测h2s合成酶和no合成酶在小鼠胃平滑肌细胞上的表达情况;采用电化学的方法直接检测组织内h2s和no的生成情况;采用离体肌条实验检测h2s和no对离体肌条张力的影响;采用蛋白免疫印迹方法检测h2s对no合成酶活性的调节,同时利用sirna干扰细胞内h2s生成,检测其对no合成酶活性的调节及其调节机制。研究结果如下:一、h2s对小鼠胃底平滑肌运动的调控及其离子机制1.蛋白免疫印迹结果显示,在培养的小鼠胃底平滑肌细胞均有表达h2s合成酶cbs和cse蛋白。2.离体肌条收缩实验结果显示,nahs(h2s供体)可以剂量依赖地增加胃底平滑肌张力;当给予cbs阻断剂aoaa时,其张力降低,而nahs可以逆转aoaa的降低张力的作用;snp(no供体)降低平滑肌张力,而nos阻断剂l-name,则其张力升高。然而,cse阻断剂pag,则几乎不影响其张力的变化。选用电压依赖性钾通道特异性阻断剂4-ap和l-型钙通道的阻断剂尼卡地平预处理,均可以阻断nahs对平滑肌的兴奋性作用。3.细胞内记录结果显示,nahs可以使胃底平滑肌细胞膜电位发生去极化。4.全细胞膜片钳实验结果显示,nahs可以降低电压依赖性钾通道的电流,增加l-型钙通道的电流。5.钙荧光成像实验结果显示,nahs可以增加细胞内游离钙浓度,而这种增加作用可被l-型钙通道的阻断剂尼卡地平阻断。以上结果提示:(1)内源性的h2s可以增加胃底平滑肌细胞的张力;(2)h2s降低了电压依赖性钾通道电流使细胞膜去极化,进而激活了l-型钙通道,使钙离子内流增加,最终使得平滑肌张力增加。1.蛋白免疫印迹的结果显示,在培养的小鼠胃底平滑肌细胞均有表达h2s合成酶cbs和cse蛋白以及no合成酶enos和nnos蛋白。2.离体肌条收缩实验结果显示,nahs可以增加胃底平滑肌张力,snp可以降低胃底平滑肌的张力,而nahs可以部分逆转snp诱导的平滑肌张力降低作用;hno可以显着降低胃底肌条的张力,而作为阴性对照的koh对张力并没有显着性的变化;no合酶阻断剂l-name可以削弱nahs诱导的平滑肌张力增加效果。3.电化学结果显示,在胃底平滑肌组织中可以实时检测到h2s和no的生成;当no生成量稳定后,给予cbs合成酶抑制剂aoaa,可以显着增加no的生成效率。4.免疫蛋白印迹实验结果显示,nahs可以降低enos合酶的丝氨酸1177位点的磷酸化水平,降低akt酶丝氨酸308位点、苏氨酸473位点的磷酸化水平;pi3k阻断剂ly294002可以阻断nahs降低enos合酶的丝氨酸1177位点的磷酸化水平的作用;cbs阻断剂aoaa可以增加enos合酶的丝氨酸1177位点的磷酸化水平,增加akt酶丝氨酸308位点、苏氨酸473位点的磷酸化水平;给予cbssirna干扰48小时之后,enos合酶的丝氨酸1177位点的磷酸化水平增加,akt酶丝氨酸308位点、苏氨酸473位点的磷酸化水平增加;enos蛋白的表达总量有增加,但akt激酶的总量未有显着性变化。二、h2s对小鼠胃底平滑肌no合成的作用及其机制以上结果提示:(1)在胃底平滑肌,H2S和NO的合酶均有表达,并且可以稳定地生成H2S和NO;(2)H2S可以增加胃底的张力,NO降低胃底的张力,H2S通过PI3K/Akt途径使eNOS酶活性降低,进而增加平滑肌张力。叁、结论以上两部分的实验可以归纳为以下几点:1.在小鼠胃底,平滑肌组织可以利用CBS和CSE合酶产生H2S,也可以利用eNOS和nNOS产生NO,两种气体信号分子对胃底平滑肌张力起相反的作用;2.H2S对平滑肌的兴奋作用通过影响经典的钙依赖途径即兴奋收缩耦联来实现;3.H2S也可通过PI3K/Akt途径使e NOS酶活性降低减少NO的合成来增加胃底平滑肌张力。(本文来源于《上海交通大学》期刊2015-04-01）
平滑肌张力论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的观察地氟烷对卵白蛋白致敏的豚鼠高反应气道平滑肌张力的影响。方法 56只雄性豚鼠随机分为7组:正常组(N)、致敏组(S)、致敏对照组(SC)和致敏地氟烷组[致敏0.5 MAC(最低肺泡有效浓度)地氟烷组(SD 0.5)、致敏1.0 MAC地氟烷组(SD 1.0)、致敏1.5 MAC地氟烷组(SD 1.5)和致敏2.0 MAC地氟烷组(SD 2.0)],每组8只。N组与S组用于气道模型评价;SC组、SD 0.5、SD 1.0、SD 1.5及SD 2.0组用于气道平滑肌测定。通过应用卵白蛋白制备致敏豚鼠模型。测量肺阻力,根据肺阻力对不同剂量乙酰胆碱的峰反应值,得到肺阻力剂量反应曲线,评价致敏气道模型。记录离体致敏豚鼠气道平滑肌对10~(-8)mol/L、10~(-7)mol/L、10~(-6)mol/L、10~(-5)mol/L的卡巴胆碱刺激的峰反应值,评价地氟烷对高反应致敏气道的作用。结果与N组相比,S组能显着升高豚鼠的肺阻力变化曲线;S组的肺阻力峰反应值比N组高40%(当乙酰胆碱剂量为6μg/kg时),P<0.05。与SC组相比,SD 0.5、SD 1.0、SD 1.5、SD 2.0组气道平滑肌张力峰值明显下降;卡巴胆碱剂量为10-5mol/L时,SD 1.5和SD 2.0组峰值分别比SC组降低了12.1%和14.0%,比SD 0.5组降低了8.9%和11.0%,P均<0.05。结论地氟烷能够降低卵白蛋白致敏的豚鼠的离体气道平滑肌张力。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
平滑肌张力论文参考文献
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