导读:本文包含了糖结合蛋白论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:蛋白,肝癌,唾液,芯片,糖肽,芽孢,树胶。
糖结合蛋白论文文献综述
张志伟[1]（2017）在《糖肽芯片检测糖结合蛋白方法的建立及应用》一文中研究指出细胞表面的糖链与蛋白质之间的相互作用参与了脊椎动物的胚胎发育,促进了细胞与细胞间的黏附,这些能够与糖链相互作用的蛋白质被称为糖结合蛋白。糖芯片技术是将糖链作为探针固定到载体上,用于检测糖结合蛋白的一类生物芯片技术。目前一张芯片上连接的糖的种类非常有限。因此,寻求更多获取糖链探针的来源以及有效固定探针的方法对糖芯片技术的发展有重要意义。本实验利用二硫苏糖醇和碘乙酰胺依次处理原样蛋白质后,用胰蛋白酶进行酶切。通过滤膜辅助法利用凝集素从上述酶切产物中提取含有特定糖链结构的糖肽。利用糖肽N-端的氨基与环氧基团的反应,将其共价固定到环氧化修饰的载玻片上,制备糖肽芯片。将Cy3标记的蛋白质样本与糖肽芯片进行孵育,扫描孵育后芯片上的荧光信号值,分析比较糖结合蛋白的变化。本实验最终确定制备糖肽芯片的最佳点样缓冲液是pH9.3的0.1M的Na2C03缓冲液;最佳芯片点制湿度是45%;最佳芯片烘干温度是37℃下烘干3h;最佳封闭缓冲液是含有1%BSA和0.05%Tween-20的磷酸盐缓冲液:最佳孵育缓冲液是含有1%BSA(v/v)、0.05%Tween-20和0.58%NaCl磷酸盐缓冲溶液。利用建立的糖肽芯片检测糖结合蛋白的方法,分别对健康志愿者、乙肝、肝硬化、肝癌患者唾液和血清进行了分析。发现在肝癌发展过程中,人唾液中有4种糖链结构识别的糖结合蛋白发生了变化:糖链结构Terminal in GalNAc and Gal和Galαl-3(Fucαl-2)Gal所识别的糖结合蛋白在乙肝、肝硬化、肝癌患者唾液中均较健康志愿者发生了显着上调;糖链结构Bisecting GlcNAc,biantennary complex-type N-glycan with outer Gal 所识别的糖结合蛋白在肝癌患者唾液中比健康志愿者发生了显着上调;糖链结构(GlcNAc)n,high mannose-type N-glycans在肝癌患者唾液中比肝硬化患者发生了显着下调。在人血清中有9种糖链结构识别的糖结合蛋白发生了变化:糖链结构Galβ-1,4GlcNAc(type Ⅱ),Gaiβ1-3GlcNAc(type Ⅰ)和 Bisecting GlcNAc,bi-antennary N-glycans,tri-and tetra-antennary complex-type N-glycan识别的糖结合蛋白在乙肝、肝硬化、肝癌患者血清中比健康志愿者均发生了显着上调。糖链结构High-Mannose,Manαl-3Man,Manα1-6Man,Man5-GlcNAc2-Asn 和 terminating in GalNAcα/β1-3/6Gal 识别的糖结合蛋白均在乙肝患者血清中比健康志愿者发生了显着下调。糖链结构GlcNAc and agalactosylated tri/tetra antennary glycans识别的糖结合蛋白在肝硬化、肝癌患者血清中比健康志愿者发生了显着上调,在肝硬化患者血清中比乙肝患者发生了显着上调,在肝癌患者血清中比肝硬化患者发生了显着上调。糖链结构Terminal in GalNAc and Gal和α-Gal,α-GalNAc,Galα-1,3Gal,Galα-1,6Glc识别的糖结合蛋白在乙肝、肝硬化、肝癌患者血清中比健康志愿者均发生了显着下调。糖链结构Galα1-3(Fucα1-2)Gal识别的糖结合蛋白在乙肝、肝硬化、肝癌患者血清中比健康志愿者发生了显着下调,在肝癌患者血清中比乙肝、肝硬化患者发生了显着上调。糖链结构Multivalent Sia and(GlcNAc)n识别的糖结合蛋白在肝硬化患者血清中比健康志愿者、乙肝患者发生了显着上调。利用含有糖链结构Galα1-3(Fucα1-2)Gal的糖肽制备糖肽-磁粒复合物分别从健康志愿者、肝癌患者唾液和血清中提取糖结合蛋白进行LC-MS/MS分析。在健康志愿者唾液中提取的39个糖结合蛋白有34个检测到GO条目;血清中提取的33个糖结合蛋白有31个检测到GO条目。肝癌患者唾液中提取的40个糖结合蛋白有35个检测到GO条目;血清中提取的67个糖结合蛋白有54个检测到GO条目。(本文来源于《西北大学》期刊2017-05-01）
钟耀刚[2]（2016）在《肝癌发生发展中糖蛋白糖链合成通路和糖结合蛋白表达定位的研究》一文中研究指出糖基化改变是癌细胞的普遍特征,肿瘤发生时,一方面蛋白质和脂分子糖基化的异常而导致糖蛋白和糖脂中的糖链发生了结构和数量的改变,另一方面和这些糖链相互作用的糖结合蛋白(Glycan-binding proteins, GBPs)的表达也发生变化。开展肿瘤糖蛋白糖链和GBPs的研究对于阐明肿瘤发生和发展的分子机制及其对于肿瘤的诊断和治疗都具有非常重要的意义。国际癌症研究机构的最新资料表明,肝癌是全球最常见的五种恶性肿瘤之一,位居恶性肿瘤死亡率的第二位。我国90%以上的肝癌为肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma, HCC),75%-80%的HCC发病与肝脏慢性病毒性感染有关,世界范围内80%-90%的HCC患者伴随有肝纤维化。虽然,目前研究表明：在肝病的炎症、纤维化、癌变的过程中均有糖蛋白糖链结构和功能的改变,但是糖蛋白糖链合成通路及与其相互作用的GBPs的表达是如何发生变化则了解不多。本论文首先运用凝集素芯片对肝癌发生发展中膜糖蛋白糖链谱进行研究,并用凝集素组化确定差异性表达的糖链在细胞中的分布、定位情况。在肝纤维化模型中,14种凝集素(如Jacalin、MAL-Ⅱ和AAL)和3种凝集素(SJA, EEL和ConA)识别的糖链结构分别在激活态LX-2细胞膜糖蛋白中表达上调和下调。在肝癌模型中,肝癌细胞系HepG2膜糖蛋白中12种凝集素(如Jacalin、MAL-Ⅱ、LTL和LEL)的表达信号增强,6种凝集素(如WFA、PTL-Ⅰ、WGA和UEA-I)表达信号降低；肝癌细胞系SMMC-7721膜糖蛋白中11种凝集素(如Jacalin、MAL-Ⅱ、SJA和LTL)表达信号增强,13种凝集素(如ECA、WFA、GSL-Ⅱ和PTL-I)表达信号降低,同时,10种凝集素(如ECA、GSL-Ⅱ、PTL-Ⅰ和LEL)在两种肝癌细胞系膜糖蛋白中差异表达,其中8种凝集素(如BCA、GSL-Ⅱ、PTL-Ⅰ和LEL)识别的糖链结构在HepG2膜糖蛋白中较SMMC-7721中显着性高表达,2种凝集素(Jacalin和VVA)识别的糖链结构在HepG2膜糖蛋白中较SMMC-7721中显着性低表达。凝集素组化结果显示差异性表达的糖链主要分布在细胞的细胞膜,核周胞质区(内质网和高尔基体)上,这些数据为寻找膜糖蛋白糖基化与肝纤维化发生的关联性及肝癌的早期诊断、抗肿瘤药物的研发提供有用信息。利用糖基因芯片对肝癌发生发展中细胞内糖相关基因转录水平进行研究,然后用实时荧光定量PCR和Western blot对差异性表达的糖相关基因和蛋白进行验证。在肝纤维化模型中,39种糖相关基因在激活态LX-2细胞中转录水平显着高表达,36种糖相关基因在激活态LX-2细胞中转录水平显着低表达。在肝纤维化发生过程中,共有75种探针对应的转录水平发生改变,约占总探针数的18.66%。在190种糖酶基因探针中,42种探针对应的转录水平发生改变,约占糖酶基因探针总数22.11%。在肝癌模型中,分别有29种和37种糖相关基因在肝癌细胞系HepG2中转录本的RNA水平上调和下调；分别有19种和14种糖相关基因在肝癌细胞系SMMC-7721中转录水平显着性高表达和低表达,有272+93种探针显示有效结合信号,约占探针67.66%,在190种糖酶基因探针种,有114+21种探针显示有效结合信号,约占糖酶基金探针的60.00%。通过比较发现,糖酶基因变化的比例较其他基因变化的比例要高,此结果说明,在肝癌发生发展中与糖链合成调控相关的基因在转录水平明显改变,说明蛋白糖基化的变化是肝癌发生发展中的一项重要的生理变化。肝癌发生发展中,糖相关基因主要参与了N-/O-糖链合成、硫酸角质素合成、硫酸软骨素合成、硫酸乙酰肝素合成及糖胺聚糖降解通路等,在上调的糖相关基因代谢通路中,以N-糖链合成通路为例加以说明基因的改变。在此通路中主要涉及ALG2、ALG8、ALG10、CST、MGAT3、 MGAT4及MGAT5等糖相关基因的改变,这些基因主要与N-糖链前体的合成有关,如ALG2与Dol-P-Glc糖链合成有关；MGAT3与P-Man糖链合成有关,其在通路中起正调节作用,而其他基因起辅助调控作用。下调基因参与的代谢通路,以糖胺聚糖降解通路为例,在此通路中,主要涉及HYAL、IDUA、NAGLU、GUSB等糖相关基因,这些基因主要与抑制糖链合成或与糖链的降解有关,起负调控作用。使用糖芯片对肝癌发生发展中差异性表达的GBPs进行研究。在肝纤维化模型中,12种糖探针(如Gal、GalNAc和Man-9Glycan)识别的GBPs在激活态LX-2细胞中表达水平显着增加,7种糖探针(如NeuAc、Lac和GlcNAc-O-Ser)识别的GBPs在激活态LX-2中表达水平显着降低。在肝癌模型中,8种糖探针(如SL、LNT和GalNAc)识别的GBPs在肝癌细胞系HepG2中显着性高表达；5种糖探针(如Man、 Man-9-Glycan和Xyl)识别的GBPs在肝癌细胞系HepG2中显着低表达。糖细胞化学结果显示,GBPs主要分布在细胞的细胞膜、中央胞质区及核周胞质区。通过对肝癌发生发展中GBPs的研究,希望能够准确了解肝癌发生发展中GBPs的变化,为揭示GBPs与肝癌发生发展的关系提供理论依据,并为寻找肝癌相关肿瘤潜在标志物的研究提供新思路。利用质谱技术对肝纤维化发生中差异性表达的GBPs进行质谱鉴定,半乳糖胺糖结合蛋白(GaINAc-binding proteins, GNBPs)鉴定结果如下：分别从激活态和静息态LX-2细胞中鉴定到264种和257种GNBPs,通过峰面积定量,分别有46种和40种GNBPs在激活态LX-2细胞中差异性高表达和低表达。木糖糖结合蛋白(Xy1-binding proteins, XBPs)鉴定结果如下：分别从激活态和静息态LX-2细胞中鉴定到70种和64种XBPs,通过峰面积定量对鉴定到的XBPs进行分析,有30种XBPs在激活态LX-2显着高表达,有14种XBPs在激活态LX-2中显着低表达。这些差异性表达的蛋白主要参与蛋白结合功能和催化功能等。通过Western blot和血清芯片对鉴定到的GBPs (如PDIA6和APOA1)进一步研究,结果显示PDIA6和APOA1的ROC曲线的线下面积(Area Under Curves, AUCs)均大于0.8,PDIA6的AUCs为0.8985(0.8132-0.9838,p<0.0001), APOA1的AUCs为0.8738(0.7830-0.9646,p<0.0001),说明PDIA6和APOA1作为肿瘤潜在标志物的诊断具有一定的准确性,亦有95%的几率将肝纤维化/肝硬化患者与健康人通过血清诊断的方式区分开来,说明GBPs可用作为肿瘤潜在标志物并用于后续研究。最后对罹患系列肝病(HBV引起的乙肝、肝硬化和肝癌)患者唾液中糖蛋白SAa2-3/6糖链结构与易感流感病毒关系进行研究,用8株禽流感病毒毒株(H5、H7和H9亚型)及H1N1灭活病毒疫苗(拟人流感病毒)与肝病患者及健康人唾液进行印记实验,结果发现,肝病患者唾液中糖蛋白SAα2-3糖链结构的丰度较同年龄同性别的健康人唾液中的显着降低,提示肝病患者易感染禽流感；而肝病患者唾液中糖蛋白SAa2-6糖链结构的丰度较同年龄同性别的健康人唾液中的略高或没有显着差别,提示肝病患者具有较强或正常的抵抗人流感病毒的能力。本研究又对其他慢性病(如二型糖尿病(T2DM)、胃癌)患者与易感流感病毒的关系进行研究,结果发现,T2DM患者属于流感病毒易感人群,而胃癌患者唾液中的SAa2-3和a2-6糖链结构丰度与同年龄同性别的健康人唾液中的差别不大,提示胃癌患者具有正常的禽流感病毒和人流感病毒的抵抗能力。本研究建立了一款用于筛查禽流感和人流感病毒易感人群的凝集素芯片,通过唾液快速简便检测筛查流感病毒易感人群,为防控禽流感及治疗提供了新方法。(本文来源于《西北大学》期刊2016-03-01）
张周刚,宋亚囝,姜凯,薛燕芬,马延和[3]（2015）在《嗜碱芽孢杆菌N16-5木寡糖结合蛋白XynE的功能表征》一文中研究指出嗜碱芽孢杆菌(Bacillus sp.)N16-5是本实验室从内蒙古乌都淖湖沉积物中分离的嗜碱菌,含有丰富的多糖水解酶,能够利用广泛的单糖和多糖。实验室前期转录组研究发现其基因组上存在一个21 kb大小的木聚糖利用相关基因簇,其中包括xyn EFG基因簇编码的ABC转运蛋白。【目的】生物信息学分析预测xyn E编码转运蛋白的底物结合蛋白,通过敲除xyn E基因研究它对菌株N16-5利用木聚糖的影响。【方法】利用温敏型载体p NNB194介导的同源交换重组的方法构建了xyn E基因敲除菌株N16-5(Δxyn E),并通过基因回补对敲除菌株表型进行验证。通过检测菌株在木聚糖培养基中的生长情况及培养基中还原糖含量的变化来分析xyn E基因对菌株利用木聚糖的影响;通过HPLC检测分析不同培养时间点木聚糖培养基的组分,结合缺失菌株和野生型菌株在以木糖为唯一碳源的培养基中的生长情况来分析Xyn E所属ABC转运蛋白的底物特异性。【结果】相比野生型菌株,缺失型菌株N16-5(Δxyn E)在木聚糖培养基的生长曲线对数期明显延迟,最大生物量略低,且培养过程中出现了明显的还原糖的累积与消耗过程;回补菌株恢复了野生型表型,且最大生物量比野生型略高。HPLC检测分析显示,相比野生型菌株,缺失菌株培养过程底物消耗速度较慢,且16 h后出现明显的木四糖、木叁糖和木二糖的累积,直至60 h后仍有较大量木二糖的存在;在木糖培养基中培养时,缺失型菌株和野生型菌株的生长趋势较一致。【结论】Xyn E蛋白特异性结合木寡糖,其所属ABC转运蛋白在嗜碱芽孢杆菌N16-5降解利用木聚糖过程中发挥着重要作用。(本文来源于《微生物学报》期刊2015年01期）
钟耀刚,秦鑫敏,杜昊骐,党刘毅,李铮[4]（2014）在《肝癌细胞系差异性表达的糖结合蛋白研究》一文中研究指出糖结合蛋白(glycan-binding protein,GBP)在细胞生命周期中扮演着重要角色,如细胞识别、运输、免疫、代谢、增殖分化及细胞间的相互作用等.目前,对GBP的改变对细胞生物过程产生影响的研究甚少.本研究用糖芯片技术对肝癌细胞系Hep G2和正常肝细胞系L02表达的GBP进行研究;糖细胞化学验证确定差异表达GBP在肝癌细胞系中的变化和分布.结果显示,8种糖探针(如SL、LNT和Gal NAc等)和5种糖探针(如Man、Man-9-Glycan,Xyl等)分别对应的GBP在Hep G2细胞中表达上调或下调.糖细胞化学结果显示:Gal NAc识别的GBPs主要表达在Hep G2的胞膜、中央胞质、核周胞质区域,而在L02的相同区域表达减弱;Neu Ac识别的GBPs主要表达在L02的胞膜区及核周胞质区,而在Hep G2细胞的相同区域表达减弱.这些数据为寻找新的肝癌发病机制和抗肿瘤策略提供了有用信息.(本文来源于《生物化学与生物物理进展》期刊2014年11期）
吴昊翔[5]（2014）在《肝癌发生发展过程中唾液糖结合蛋白表达变化的研究》一文中研究指出糖结合蛋白(glycan-binding proteins, GBPs)是一类能与生物体内糖类物质特异性结合的蛋白质,参与细胞识别、信号传递、以及细胞的生长、分化、迁移和凋亡等多种重要生物学过程,已被证实与多种癌症的发生、发展过程密切相关。目前研究表明：在乙型肝炎-肝硬化-肝癌发生过程中,患者血清和组织中均伴有糖结合蛋白的改变,而患者的唾液中是否存在类似的糖结合蛋白的变化尚不清楚。本课题利用糖芯片技术研究乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者相较于健康志愿者唾液中糖结合蛋白的表达变化,筛选识别乙肝、肝硬化和肝癌患者唾液中共有的和特有糖结合蛋白的糖探针,为肝癌的早期诊断提供实验依据,同时研究唾液中糖结合蛋白变化与肝癌发生发展的关联性。本研究主要内容：(1)利用本实验室制备的含41种糖探针的糖芯片,对乙肝、肝硬化和肝癌患者唾液中糖结合蛋白进行初步筛选,发现：在乙肝患者唾液中,有19种糖探针识别的GBPs发生了差异性表达,其中11种糖探针(6a-Mannobiose、3'-Sialyl-Lewis-a-tetrasaccharide. NA2F. LNDF Ⅰ、Lewis-Y tetrasacchande、LNDF II. Gal.4β-Gal. GalNAc和GlcNAc)识别的GBPs表达上调,8种糖探针(Man-3Glycan、6'-SL、iso-A-Pentasaccharide. LNT、3a,4p、3a-Galactotetraose、GlcNAc-O-Ser. Glu和NGA2Glycan)识别的GBPs表达下调；在肝硬化患者唾液中,有18种糖探针识别的GBPs发生了差异性表达,其中8种糖探针(Man、NeuAc. Fuc.3a-Fucosyl-N-acetylglucosamine. Gal. Lac、GlcNAc和Xyl)识别的GBPs表达上调,10种糖探针(3'-SLN、NA2F、LNDF Ⅰ、LNF-Ⅰ、 Lewis-Y tetrasaccharide. LNDF Ⅱ、 iso-B-Pentasaccharide.4β-Gal、GLNBP和Hyaluronic acid)识别的GBPs表达下调；在肝癌患者唾液中,有20种糖探针识别的GBPs发生了差异性表达,其中13种糖探针(6a-Mannobiose、3'-Sialyl-Lewis-a tetrasaccharide、NA2F、Fuc、LNDF I. Lewis-Y tetrasaccharide、LNDF Ⅱ Gal4β-Gal. GalNAc、Cellobiose. Hyaluronic acid和3a,4p,3a-Calactotetraose)识别的GBPs表达上调,7种糖探针(Man-3Glycan、NeuAc.3a-Fucosyl-N-acetylglucosamine. iso-A-Pentasaccharide. Glu、 NGA2Glycan和Xyl)识别的GBPs表达下调。综合比较分析叁组糖芯片筛选差异表达的GBPs结果,发现:NA2F、LNDFⅠ、Lewis-Y tetrasaccharide等6种糖探针识别的GBPs在乙肝、肝硬化和肝癌发展过程中均发生差异性表达；Man、Man-9Glycan和N-NeuAc等8种糖探针识别的GBPs在肝癌患者唾液中出现了与乙肝、肝硬化患者不同的表达；6a-Mannobiose、3'-Sialyl-Lewis-a tetrasaccharide、NA2F等9种糖探针识别的GBPs在乙肝患者唾液中高表达,而在肝硬化患者低表达或无差异性变化；3a-Fucosyl-N-acetylglucosamine、Xyl、Lac等6种探针识别的GBPs在肝硬化患者唾液中高表达,而在乙肝患者低表达或无差异性变化。(2)制备了一款唾液芯片用于验证乙肝、肝硬化和肝癌患者唾液中差异表达的GBPs根据糖芯片结果,选择了2种与乙肝、肝硬化和肝癌都相关的单糖Gal和Man用于唾液芯片的验证。验证结果显示Gal识别的GBPs在乙肝、肝硬化、肝癌患者唾液中均高于健康志愿者唾液,Man识别的GBPs在肝硬化唾液中高表达,而在乙肝、肝癌患者唾液中低表达或无差异性变化,与糖芯片结果一致。(本文来源于《西北大学》期刊2014-06-30）
冯献礼,李卓,赵熹,于辉,刘慧玲[6]（2014）在《分子动力学模拟研究点突变(Met108→Leu108)对树胶醛糖结合蛋白与配体作用的影响》一文中研究指出为了研究点突变(Met108→Leu108)对树胶醛糖结合蛋白(ABP)与配体结合能力的影响,对ABP、ABP结合树胶醛糖复合物及ABP结合半乳糖复合物以及它们各自的突变体分别进行60 ns的分子动力学模拟.模拟结果表明,108号残基突变前后,电子等排体的两个氨基酸残基,使蛋白与配体间的范德华相互作用发生明显变化,同时导致蛋白的内部运动也发生变化,进而影响蛋白与配体的相互作用.进一步分析表明,突变前后的蛋白构象变化都趋向于两个结构域张开,而与配体的结合可减缓张开程度.(本文来源于《高等学校化学学报》期刊2014年02期）
钟耀刚[7]（2013）在《TGF-β1诱导下人肝星状细胞（HSCs）糖结合蛋白的研究》一文中研究指出糖结合蛋白在细胞生命周期中扮演着重要的角色,参与多种细胞活动,如细胞间的粘附,细胞免疫,细胞生长,细胞识别与分化等等,在肝癌发生发展时,蛋白质和脂类分子上的糖基化都会发生异常变化最终导致糖链结构及数量的变化,此时与其相应的和这些糖链发生相互作用的糖结合蛋白也会发生变化,本实验研究分别从与糖链作用的糖结合蛋白和糖结合蛋白基因水平入手来研究LX-2细胞诱导前后糖结合蛋白及其基因水平的变化,对研究糖链与蛋白间的相互作用奠定基础。本课题中基于实验室早已建立的糖芯片技术,糖-磁粒复合物分离技术及糖结合蛋白基因芯片技术分别对LX-2细胞诱导前后糖结合蛋白及其基因进行研究,系统的研究了LX-2细胞诱导前后糖结合蛋白及其基因的变化,筛选出在肝癌发生时异常表的糖结合蛋白及其基因。实验分为两大部分：(1)首先利用糖芯片(含有41种糖链)对LX-2细胞诱导前后表达的糖结合蛋白进行初步筛选,根据芯片筛选结果,最终选择GalNAc糖链对其糖结合蛋白进行分离,并通过LC-MS/MS对LX-2细胞诱导前后异常表达的糖结合蛋白进行鉴定实验结果如下：GalNAc糖结合蛋白,在诱导前细胞蛋白中104种,诱导后蛋白中有119种,诱导前后共同鉴定79种,本实验中还对LX-2诱导前后的糖结合蛋白进行GO分析,主要从按生物学过程水平,分子功能水平,细胞组分水平叁个水平进行分析。进一步了解了糖结合蛋白在机体中的功能,以期发现新的肝癌诊断物。(2)通过糖结合蛋白基因芯片对LX-2细胞诱导前后差异表达的基因进行研究,其中筛选出差异性表达的基因有23个,18个基因在激活态的HSCs细胞中上调,5个基因在激活态的HSCs细胞中下调。后续实验中对其他肝癌细胞株糖结合蛋白基因的筛选,找肝癌发生时相关糖结合蛋白基因的关系,到时把筛选的差异基因进行荧光实时定量RCR验证,以求实验结果的准确性和可靠性,以便为肿瘤诊断标志的研究打好理论基础。(本文来源于《西北大学》期刊2013-06-30）
党刘毅[8]（2012）在《人糖结合蛋白的筛选、分离与鉴定》一文中研究指出糖链,作为重要的信息分子,介导着许多重要的生物学过程,包括细胞间识别、免疫反应、细胞粘附,细胞生长、细胞分化等等。与糖链的广泛功能密切相关的是同样多样化的与糖链相结合的蛋白,即糖结合蛋白。糖结合蛋白的研究对于真正地理解糖链-蛋白的相互作用至关重要。本课题利用实验室自主建立的糖芯片技术和糖-磁性微粒复合物分离技术对血清和唾液中的糖结合蛋白进行了研究,实验分为两部分：(1)利用糖芯片和糖-磁性微粒复合物分离技术对肝癌患者和健康志愿者血清中的糖结合蛋白进行筛选、分离与鉴定,并通过emPAI (?)(?)标记定量方法确定了样品中糖结合蛋白的表达水平情况,以期寻找可能的糖结合蛋白类的潜在肝癌生物标志物。首先,利用含有16种糖链的糖芯片对于血清样品中糖结合蛋白进行初步筛选;然后根据芯片结果,选择了叁种糖链(fucose、Neu5Ac(?)(?) lactose)对于相应的糖结合蛋白进行了分离；最后,利用LC-MS/MS对分离的糖结合蛋白进行鉴定,并通过emPAI非标记定量方法进行不同组样品间的定量比较。质谱鉴定蛋白结果：岩藻糖(fucose)结合蛋白,在肝癌患者血清中47种,健康志愿者血清中鉴定蛋白50种,两组血清中同时鉴定到27种,其中,共同鉴定的蛋白中9种在肝癌患者血清中表达降低,3种在肝癌患者血清中表达升高；N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)结合蛋白,在肝癌患者血清中45种,健康志愿者血清中鉴定蛋白78种,两组血清中同时鉴定到29种,其中,共同鉴定的蛋白中22种在肝癌患者血清中表达降低,2种在肝癌患者血清中表达升高；乳糖(lactose)结合蛋白,在肝癌患者血清中36种,健康志愿者血清中鉴定到30种,两组血清中同时鉴定到15种,其中,共同鉴定的蛋白中4种在肝癌患者血清中表达降低,3种在肝癌患者血清中表达升高。本实验对于肝癌患者和健康志愿者血清中的糖结合蛋白分布、含量和功能进行了分析,对于进一步理解糖结合蛋白在机体中的功能提供了重要信息,也为发现新的肝癌生物标志物提供了新的思路。(2)利用包含有40种糖链的糖芯片,对于儿童、成年和老年叁个年龄段的男性和女性的唾液分别进行了分析。通过对比不同组样品间的糖芯片结果,对不同年龄段男性和女性中的糖结合蛋白在分布特点进行初步研究。从芯片结果可以看出,唾液中含有复杂的蛋白质组分,在分析中糖链根据其末端结构的特点被分成了不同的类别,结果发现相同类别的糖链间其糖结合蛋白具有相似的分布特点,说明了末端糖链在糖链-蛋白识别过程中的重要作用。同时我们发现,相比性别,不同年龄段实验组的唾液中的糖结合蛋白的差异更为明显。本研究对唾液中的糖蛋白情况进行了总体的分析,揭示了不同性别和年龄人群唾液中的糖结合蛋白分布的总体趋势。但由于唾液组分的复杂性和糖芯片技术本身的局限,唾液中糖结合蛋白的具体信息如蛋白组分、功能等,还需要进一步研究。(本文来源于《西北大学》期刊2012-06-30）
刘丹[9]（2012）在《两种糖结合蛋白—志贺毒素B亚基和半乳凝素-3的胞内运输途径研究》一文中研究指出细胞的物质运输是细胞内的一个复杂而宏大的物流系统，其中一部分物质可以以膜泡的形式进出细胞，而受体介导的胞吞作用因其具有高效率、高选择性等特点，是膜泡运输中非常重要的方式之一。本论文中我们主要研究了两种糖结合蛋白——志贺毒素B亚基（STxB）和半乳凝素-3（galectin-3，Gal-3）的胞吞及分选运输。对他们的胞吞条件、运输途径、亚细胞定位等进行了研究，并通过分子克隆、原核表达的方法制备了一系列修饰蛋白，通过比较修饰后蛋白转运的差异进而确定影响其转运的一级结构的特征。志贺毒素（STx）做为细胞毒性因子，其膜上主要受体及转运途径已经被确认：STxB与膜上受体糖鞘脂Globoside3（Gb3）结合后沿早胞内体、高尔基体途径到达内质网，整个过程不经过晚胞内体途径。本论文研究发现，血清条件以及蛋白转运时自身的浓度均对这一途径的转运产生影响，但并不改变其转运的路径。与其他很多可以胞吞进入内质网的蛋白不同，目前未在STxB序列上发现任何引导其逆向运输进入内质网的信号，有观点认为可能是通过其受体所在质膜的回收到达内质网的，但我们通过比较STxB和两种C-端修饰蛋白SBQ和GBQ的运输，发现他们的转运存在差异，推测STxB的C-端可能在转运中发挥作用，因此，我们制备了一系列STxB的C-端修饰蛋白，通过比较STxB、STxB-Myc、STxB-Myc-SGR、STxB-SG-Myc-SGR的亚细胞定位，发现直接与STxB相连的Myc序列影响了STxB从高尔基到内质网的运输，使其更容易驻留在高尔基结构中，进一步比较不同性质氨基酸修饰的蛋白的转运，发现C-端谷氨酸（Glu，E）修饰可以引起蛋白在高尔基体的驻留，且随着-ES、-EES、-EEES、-EEEES中E数目的增加，其滞留效果增强，进一步研究证明酸性氨基酸Asp（D）也具有同样的作用，说明这一现象是由酸性氨基酸产生的而不是E特异性的。当酸性氨基酸不直接与STxB相连时，阻滞作用逐渐消失，如果突变掉末端氨基酸R再在其末尾修饰酸性氨基酸时，其阻滞作用最为明显，说明B亚基末端的碱性氨基酸R提供的微环境对其从高尔基体到内质网的运输是必要的。另外，发现这一现象在小牛血清培养的细胞中更为明显，Myc修饰的STxB在小牛血清培养条件下转运途径发生改变，可以转运进入到一个类似自噬泡的结构当中，而在胎牛血清培养条件下，加有Myc标签的蛋白则很容易发生降解，降解后的STxB按照原路径进行运输。Gal-3作为凝集素家族中研究最为广泛的成员之一，被证实在细胞粘附、细胞分化、血管生成等多项生命活动中发挥作用。但目前对于胞吞和运输的研究还较少，本论文中通过荧光定位的方法明确了Gal-3经由早胞内体/循环胞内体到达晚胞内体/溶酶体的运输途径，该途径可以被乳糖有效地抑制，说明这种胞吞是通过糖脂或糖蛋白受体介导的。通过western blot分析发现在转运的早期，有大量Gal-3快速循环到细胞外，根据循环的速度推测可能是由早胞内体/循环胞内体循环到细胞外。经多种细胞比较验证后发现，这种靶向晚胞内体/溶酶体和快速循环出细胞的途径共存的运输方式在HMEC、CHO、HeLa等细胞中普遍存在，只是在分选分配比例上略有不同，说明这一现象在细胞中具有普遍性。本文最后比较了STxB和Gal-3的胞内运输途径，发现两者运输的途径和速度并不一致，分析它们是通过两种不同的方式进行胞吞运输的，但在转运的早期，STxB的运输囊泡与Gal-3的运输囊泡可能发生部分汇合，在早胞内体和循环胞内体位置都存在不同程度的共定位，而当继续转运时，两种蛋白的运输囊泡分离，分别沿着不同的运输路径运输到不同的亚细胞结构中。(本文来源于《东北师范大学》期刊2012-05-01）
兀瑞[10]（2011）在《糖结合蛋白基因芯片的制备与应用》一文中研究指出研究背景：细胞表面糖链与蛋白质的相互作用促进了细胞与细胞间的粘附、参与了脊椎动物胚胎发育等。这种与糖链相互作用的蛋白被称为糖结合蛋白。糖结合蛋白通过与糖蛋白糖链或糖脂糖链的相互作用调控细胞识别、信号传递、细胞内吞以及细胞生长、分化和凋亡等生物学行为。肝癌具有不易早期发现、易转移、发展快、治疗难度大等特点。肝癌发生时,蛋白质和脂分子糖基化的异常导致糖链发生了结构和数量的改变,相应地和这些糖链相互作用的糖结合蛋白的表达也发生异常改变。从糖结合蛋白基因水平入手研究肝癌发生时细胞中糖结合蛋白基因表达水平的变化,有助于了解糖结合蛋白与糖链分子间相互作用的分子机制和寻找新的肝癌标志物,为肝癌的早期诊断和基因治疗奠定基础。方法：应用高通量的基因芯片技术作为检测手段,筛选肝癌中差异表达的糖结合蛋白基因。设计和制备糖结合蛋白基因芯片(包含135条糖结合蛋白基因和25个质控点)。以L02正常肝细胞系和HepG2、SMMC-7721两种肝癌细胞系及健康志愿者和肝癌患者血液作为研究对象,系统地研究肝癌样本与正常样本中糖结合蛋白基因发生的变化,筛选出肝癌样本中异常表达的糖结合蛋白基因,并用实时荧光定量PCR技术验证基因芯片的结果。结果：L02正常肝细胞系和HepG2肝癌细胞差异表达的糖结合蛋白基因24个,其中上调基因15个,下调基因9个。L02正常肝细胞系和SMMC-7721肝癌细胞系差异表达的糖结合蛋白基因15个,其中上调基因9个,下调基因6个。肝癌患者和健康志愿者血液样本中差异表达的糖结合蛋白基因17个,其中上调基因9个,下调基因8个。两组细胞样本和血液样本中共同的上调基因有7个,共同的下调基因有3个。从中挑选出四个表达差异较大的基因,上调基因叁个(ALPP, Galectin-1和MGL),下调基因为REG4,用实时荧光定量PCR技术验证四个基因的表达水平,结果与芯片结果一致。结论：将糖结合蛋白基因芯片与实时荧光定量PCR等技术运用于肝癌糖结合蛋白基因表达谱的研究,筛选出10个差异表达的糖结合蛋白基因。试验中设计及制备的糖结合蛋白基因芯片,也为其它疾病的研究建立了技术平台。(本文来源于《西北大学》期刊2011-06-30）
糖结合蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
糖基化改变是癌细胞的普遍特征,肿瘤发生时,一方面蛋白质和脂分子糖基化的异常而导致糖蛋白和糖脂中的糖链发生了结构和数量的改变,另一方面和这些糖链相互作用的糖结合蛋白(Glycan-binding proteins, GBPs)的表达也发生变化。开展肿瘤糖蛋白糖链和GBPs的研究对于阐明肿瘤发生和发展的分子机制及其对于肿瘤的诊断和治疗都具有非常重要的意义。国际癌症研究机构的最新资料表明,肝癌是全球最常见的五种恶性肿瘤之一,位居恶性肿瘤死亡率的第二位。我国90%以上的肝癌为肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma, HCC),75%-80%的HCC发病与肝脏慢性病毒性感染有关,世界范围内80%-90%的HCC患者伴随有肝纤维化。虽然,目前研究表明：在肝病的炎症、纤维化、癌变的过程中均有糖蛋白糖链结构和功能的改变,但是糖蛋白糖链合成通路及与其相互作用的GBPs的表达是如何发生变化则了解不多。本论文首先运用凝集素芯片对肝癌发生发展中膜糖蛋白糖链谱进行研究,并用凝集素组化确定差异性表达的糖链在细胞中的分布、定位情况。在肝纤维化模型中,14种凝集素(如Jacalin、MAL-Ⅱ和AAL)和3种凝集素(SJA, EEL和ConA)识别的糖链结构分别在激活态LX-2细胞膜糖蛋白中表达上调和下调。在肝癌模型中,肝癌细胞系HepG2膜糖蛋白中12种凝集素(如Jacalin、MAL-Ⅱ、LTL和LEL)的表达信号增强,6种凝集素(如WFA、PTL-Ⅰ、WGA和UEA-I)表达信号降低；肝癌细胞系SMMC-7721膜糖蛋白中11种凝集素(如Jacalin、MAL-Ⅱ、SJA和LTL)表达信号增强,13种凝集素(如ECA、WFA、GSL-Ⅱ和PTL-I)表达信号降低,同时,10种凝集素(如ECA、GSL-Ⅱ、PTL-Ⅰ和LEL)在两种肝癌细胞系膜糖蛋白中差异表达,其中8种凝集素(如BCA、GSL-Ⅱ、PTL-Ⅰ和LEL)识别的糖链结构在HepG2膜糖蛋白中较SMMC-7721中显着性高表达,2种凝集素(Jacalin和VVA)识别的糖链结构在HepG2膜糖蛋白中较SMMC-7721中显着性低表达。凝集素组化结果显示差异性表达的糖链主要分布在细胞的细胞膜,核周胞质区(内质网和高尔基体)上,这些数据为寻找膜糖蛋白糖基化与肝纤维化发生的关联性及肝癌的早期诊断、抗肿瘤药物的研发提供有用信息。利用糖基因芯片对肝癌发生发展中细胞内糖相关基因转录水平进行研究,然后用实时荧光定量PCR和Western blot对差异性表达的糖相关基因和蛋白进行验证。在肝纤维化模型中,39种糖相关基因在激活态LX-2细胞中转录水平显着高表达,36种糖相关基因在激活态LX-2细胞中转录水平显着低表达。在肝纤维化发生过程中,共有75种探针对应的转录水平发生改变,约占总探针数的18.66%。在190种糖酶基因探针中,42种探针对应的转录水平发生改变,约占糖酶基因探针总数22.11%。在肝癌模型中,分别有29种和37种糖相关基因在肝癌细胞系HepG2中转录本的RNA水平上调和下调；分别有19种和14种糖相关基因在肝癌细胞系SMMC-7721中转录水平显着性高表达和低表达,有272+93种探针显示有效结合信号,约占探针67.66%,在190种糖酶基因探针种,有114+21种探针显示有效结合信号,约占糖酶基金探针的60.00%。通过比较发现,糖酶基因变化的比例较其他基因变化的比例要高,此结果说明,在肝癌发生发展中与糖链合成调控相关的基因在转录水平明显改变,说明蛋白糖基化的变化是肝癌发生发展中的一项重要的生理变化。肝癌发生发展中,糖相关基因主要参与了N-/O-糖链合成、硫酸角质素合成、硫酸软骨素合成、硫酸乙酰肝素合成及糖胺聚糖降解通路等,在上调的糖相关基因代谢通路中,以N-糖链合成通路为例加以说明基因的改变。在此通路中主要涉及ALG2、ALG8、ALG10、CST、MGAT3、 MGAT4及MGAT5等糖相关基因的改变,这些基因主要与N-糖链前体的合成有关,如ALG2与Dol-P-Glc糖链合成有关；MGAT3与P-Man糖链合成有关,其在通路中起正调节作用,而其他基因起辅助调控作用。下调基因参与的代谢通路,以糖胺聚糖降解通路为例,在此通路中,主要涉及HYAL、IDUA、NAGLU、GUSB等糖相关基因,这些基因主要与抑制糖链合成或与糖链的降解有关,起负调控作用。使用糖芯片对肝癌发生发展中差异性表达的GBPs进行研究。在肝纤维化模型中,12种糖探针(如Gal、GalNAc和Man-9Glycan)识别的GBPs在激活态LX-2细胞中表达水平显着增加,7种糖探针(如NeuAc、Lac和GlcNAc-O-Ser)识别的GBPs在激活态LX-2中表达水平显着降低。在肝癌模型中,8种糖探针(如SL、LNT和GalNAc)识别的GBPs在肝癌细胞系HepG2中显着性高表达；5种糖探针(如Man、 Man-9-Glycan和Xyl)识别的GBPs在肝癌细胞系HepG2中显着低表达。糖细胞化学结果显示,GBPs主要分布在细胞的细胞膜、中央胞质区及核周胞质区。通过对肝癌发生发展中GBPs的研究,希望能够准确了解肝癌发生发展中GBPs的变化,为揭示GBPs与肝癌发生发展的关系提供理论依据,并为寻找肝癌相关肿瘤潜在标志物的研究提供新思路。利用质谱技术对肝纤维化发生中差异性表达的GBPs进行质谱鉴定,半乳糖胺糖结合蛋白(GaINAc-binding proteins, GNBPs)鉴定结果如下：分别从激活态和静息态LX-2细胞中鉴定到264种和257种GNBPs,通过峰面积定量,分别有46种和40种GNBPs在激活态LX-2细胞中差异性高表达和低表达。木糖糖结合蛋白(Xy1-binding proteins, XBPs)鉴定结果如下：分别从激活态和静息态LX-2细胞中鉴定到70种和64种XBPs,通过峰面积定量对鉴定到的XBPs进行分析,有30种XBPs在激活态LX-2显着高表达,有14种XBPs在激活态LX-2中显着低表达。这些差异性表达的蛋白主要参与蛋白结合功能和催化功能等。通过Western blot和血清芯片对鉴定到的GBPs (如PDIA6和APOA1)进一步研究,结果显示PDIA6和APOA1的ROC曲线的线下面积(Area Under Curves, AUCs)均大于0.8,PDIA6的AUCs为0.8985(0.8132-0.9838,p<0.0001), APOA1的AUCs为0.8738(0.7830-0.9646,p<0.0001),说明PDIA6和APOA1作为肿瘤潜在标志物的诊断具有一定的准确性,亦有95%的几率将肝纤维化/肝硬化患者与健康人通过血清诊断的方式区分开来,说明GBPs可用作为肿瘤潜在标志物并用于后续研究。最后对罹患系列肝病(HBV引起的乙肝、肝硬化和肝癌)患者唾液中糖蛋白SAa2-3/6糖链结构与易感流感病毒关系进行研究,用8株禽流感病毒毒株(H5、H7和H9亚型)及H1N1灭活病毒疫苗(拟人流感病毒)与肝病患者及健康人唾液进行印记实验,结果发现,肝病患者唾液中糖蛋白SAα2-3糖链结构的丰度较同年龄同性别的健康人唾液中的显着降低,提示肝病患者易感染禽流感；而肝病患者唾液中糖蛋白SAa2-6糖链结构的丰度较同年龄同性别的健康人唾液中的略高或没有显着差别,提示肝病患者具有较强或正常的抵抗人流感病毒的能力。本研究又对其他慢性病(如二型糖尿病(T2DM)、胃癌)患者与易感流感病毒的关系进行研究,结果发现,T2DM患者属于流感病毒易感人群,而胃癌患者唾液中的SAa2-3和a2-6糖链结构丰度与同年龄同性别的健康人唾液中的差别不大,提示胃癌患者具有正常的禽流感病毒和人流感病毒的抵抗能力。本研究建立了一款用于筛查禽流感和人流感病毒易感人群的凝集素芯片,通过唾液快速简便检测筛查流感病毒易感人群,为防控禽流感及治疗提供了新方法。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
糖结合蛋白论文参考文献
[1].张志伟.糖肽芯片检测糖结合蛋白方法的建立及应用[D].西北大学.2017
[2].钟耀刚.肝癌发生发展中糖蛋白糖链合成通路和糖结合蛋白表达定位的研究[D].西北大学.2016
[3].张周刚,宋亚囝,姜凯,薛燕芬,马延和.嗜碱芽孢杆菌N16-5木寡糖结合蛋白XynE的功能表征[J].微生物学报.2015
[4].钟耀刚,秦鑫敏,杜昊骐,党刘毅,李铮.肝癌细胞系差异性表达的糖结合蛋白研究[J].生物化学与生物物理进展.2014
[5].吴昊翔.肝癌发生发展过程中唾液糖结合蛋白表达变化的研究[D].西北大学.2014
[6].冯献礼,李卓,赵熹,于辉,刘慧玲.分子动力学模拟研究点突变(Met108→Leu108)对树胶醛糖结合蛋白与配体作用的影响[J].高等学校化学学报.2014
[7].钟耀刚.TGF-β1诱导下人肝星状细胞（HSCs）糖结合蛋白的研究[D].西北大学.2013
[8].党刘毅.人糖结合蛋白的筛选、分离与鉴定[D].西北大学.2012
[9].刘丹.两种糖结合蛋白—志贺毒素B亚基和半乳凝素-3的胞内运输途径研究[D].东北师范大学.2012
[10].兀瑞.糖结合蛋白基因芯片的制备与应用[D].西北大学.2011
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