导读:本文包含了反向杂交论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:乙型肝炎,病毒,杆菌,结核,分支,异烟肼,利福平。
反向杂交论文文献综述
赵芝梅,朱宇,吴燕,樊春笋,陈陶阳[1]（2014）在《反向杂交检测肝癌相关乙型肝炎病毒前C区突变方法的建立和应用》一文中研究指出背景与目的:日益增多的研究表明,乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)DNA前C区G1896A和G1899A突变是肝癌发生的危险因素。本研究旨在建立简单、快速、灵敏和准确的检测HBV前C区突变的反向杂交方法,并应用于检测江苏省启东地区HBV DNA前C区突变与肝癌发生的关系。方法:设计并合成HBV DNA前C区1896和1899位点的特异性探针,通过优化条件建立特异、敏感的杂交体系,并与直接测序检测结果进行比较。将该方法应用于检测启东100例肝癌和100例慢性HBV携带者(对照组),分析HBV DNA前C区突变与肝癌的关系。结果:反向杂交对血清样本的最低检测下限为HBV DNA 103 copy/mL,检测混合感染时比直接测序更占优势,混合株中10%以上的突变株均可被检测。启东地区HBV DNA前C区G1899A突变与肝癌高发具有相关性(P=0.000,OR=4.846,95%CI:2.240~10.485),而G1896A突变未见其相关性。结论:反向杂交检测HBV DNA前C区突变方便、快速、准确,可有效监控肝癌的发生,适合临床大规模推广应用。(本文来源于《中国癌症杂志》期刊2014年04期）
单雪峰,谢素兰,黄爱龙,胡源[2]（2014）在《应用肽核酸反向杂交技术检测HBV阿德福韦耐药突变株》一文中研究指出目的:建立一种肽核酸(peptide nucleic acid,PNA)反向杂交技术,用于检测乙肝病毒阿德福韦酯(adefovir dipivoxil,ADV)常见耐药突变位点。方法:利用反向杂交技术,设计出特异性的PNA探针,与PCR扩增后带有生物素标记的样本进行杂交;通过对探针浓度,杂交温度和时间等条件的优化建立起最佳反应条件。应用该技术检测了临床ADV治疗慢性乙肝患者的72例血清样本,与测序法比较了其检测的准确性。结果:(1)通过共价结合能够将PNA探针固定在尼龙膜上,特异性检测ADV常见耐药突变位点。(2)与直接测序法相比,PNA反向杂交技术检测准确性为97.88%。结论:通过优化杂交反应,建立起快速、灵敏的检测乙肝病毒ADV常见耐药突变位点的PNA反向杂交技术。(本文来源于《重庆医科大学学报》期刊2014年07期）
刘靖元,李仁龙,徐亚军[3]（2012）在《应用单链探针反向杂交试验检测结核分枝杆菌耐药性分析》一文中研究指出目的探讨单链探针反向杂交试验检测结核分枝杆菌耐药性,评价此方法在耐药性检测中的临床应用价值。方法采用聚合酶链反应-单链探针反向杂交试验技术,PCR扩增50株结核分枝杆菌rpoB、katG、rpsL、rrs、embB耐药基因,将标记生物素的基因扩增产物与固定在硝酸纤维膜上的核酸探针杂交,通过链亲和素碱性磷酸酶,BICP/NBT显色系统检测分析基因突变,同时与传统药物敏感实验比对分析。结果 PCR-LiPA方法分析50株结核分枝杆菌临床分离株,耐RFP菌株中检出4株,耐INH菌株中检出5株,耐SM菌株中检出7株,SM敏感株检出1株,50株rrs基因均未检测到相应位点的突变;耐EMB菌株1株、EMB敏感株1株检测到embB基因突变。结论应用PCR-LiPA可快速、简便地检出部分结核分枝杆菌耐药株,可作为临床辅助诊断手段。(本文来源于《中国医药科学》期刊2012年13期）
曲守方,黄杰,徐任,高尚先[4]（2010）在《反向杂交法检测HPV基因分型质控品》一文中研究指出目的:反向杂交法检测HPV基因分型质控品。方法:采用我室建立的HPV基因分型质控品,以单一型质粒DNA和混合质粒DNA为模板扩增,将扩增好的PCR产物进行导流杂交。结果:以单一型质粒DNA为模板扩增时,HPV基因分型结果正确的亚型有18种,该方法的试剂盒对HPV39,52,53亚型的质粒DNA有漏检。以相同百分比的混合质粒DNA为模板扩增时,试剂盒对HPV35,39,42,68亚型的质粒DNA有漏检;以不同百分比的混合质粒DNA为模板扩增时,试剂盒对混合质粒中百分比低(5%或者2%)的质粒DNA存在着漏检现象。结论:建立的HPV基因分型质控品能够对反向杂交法的试剂盒性能指标进行有效评价,能够满足国内诊断试剂质量监督管理的需要。(本文来源于《药物分析杂志》期刊2010年09期）
梁疆莉,林琳,刘渠,徐亚军,刘衡川[5]（2010）在《单链探针反向杂交试验快速检测结核分支杆菌5种耐药基因》一文中研究指出目的:建立可同时检测结核分支杆菌rpoB、katG、rpsL、rrs、embB基因突变的单链探针反向杂交试验技术(PCR-LiPA),评价该技术检测结核分支杆菌利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇耐药性的应用价值。方法:采集临床标本,按照实验规程培养、鉴定结核分支杆菌,并对分离到的结核分支杆菌进行药敏试验;PCR扩增结核分支杆菌rpoB、katG、rpsL、rrs、embB耐药基因,单链探针反向杂交试验技术检测耐药基因。将PCR-LiPA结果与DNA测序比较验证方法的准确性,将PCR-LiPA结果与药敏结果比较,了解结核分支杆菌耐药性表型与耐药基因突变的相关性。结果:50株结核分支杆菌传统药物敏感性试验结果显示,12株耐INH,7株耐RFP,15株耐SM,2株耐EMB。PCR-LiPA方法分析结果:耐RFP菌株中4株rpoB基因突变;耐INH菌株中5株KatG基因突变;耐SM菌株中7株、SM敏感株1株rpsl基因突变;耐EMB菌株1株、EMB敏感株1株embB基因突变。与DNA测序结果的符合率为100%。结论:用PCR-LiPA可简便、快速、灵敏、特异地检测出一部分结核分支杆菌耐药株的rpoB、katG、rpsL、rrs、embB基因突变,可用于临床结核分支杆菌耐药性的辅助诊断手段。(本文来源于《中国卫生检验杂志》期刊2010年06期）
张丽[6]（2010）在《Gap-LCR-ELISA法与PCR-反向杂交法对沙眼衣原体检测的对比研究》一文中研究指出目的比较质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附试验测定(Gap-LCR-ELISA)法及聚合酶链式反应(PCR)-反向杂交法对沙眼衣原体(CT)的检测效果。方法对我院眼科送检临床标本167份进行CT检测,其中采用Gap-LCR-ELISA法检测80份,采用PCR-反向杂交法检测87份。并对2种方法检出阳性率及其敏感度与特异度进行比较。结果Gap-LCR-ELISA法检出阳性率为26.2%,PCR-反向杂交法检出率为34.5%,差异无统计学意义(P>0.05);两法的敏感度和特异度均为100.0%和98.0%。结论Gap-LCR-ELISA法和PCR-反向杂交法均可作为CT的检测方法,值得临床推广应用。(本文来源于《临床合理用药杂志》期刊2010年07期）
刘彦辰[7]（2010）在《反向杂交检测HBV耐药突变方法的建立及评估》一文中研究指出乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)一直以来就威胁着全人类的健康,核苷(酸)类似物作为抗HBV感染的主要药物,在抑制病毒方面取得了不错的成果。但随着用药时间延长,HBV都会在不同程度上表现出耐药,严重制约后续药物的选择及其疗效,那么,早期监测耐药就显得至关重要。目前,多数HBV耐药突变检测技术限于实验研究,只有直接测序法,荧光定量PCR和线性探针分析法叁种检测技术用于临床耐药分析。相对其他两种技术而言,基于反向杂交原理的线性探针分析法简便,快速,可以实现多位点检测,具有广阔的应用前景。拉米夫定,阿德福韦和恩替卡韦是最早应用于临床乙型肝炎治疗的药物,本研究就是利用反向杂交原理,建立一种同时检测HBV对这叁种药物耐药的方法。为了优化反应条件,本研究还构建了HBV耐药标准株。随后,对已建立的反向杂交体系进行方法学评价和临床评估。目的:构建HBV耐药标准株,利用野生和耐药标准株建立一种特异、灵敏地检测HBV对叁种核苷(酸)类似物耐药的方法,并对确立的检测体系进行评估以便了解其可行性。方法:1.以扩增得到的267bp的突变片段(rt169T, rt173L, rt180M, rt181T, rt184G, rt202I, rt204V, rt215S, rt236T, rt250V)为诱变引物,HBV野生标准株为模板,PCR获得HBV全序列耐药标准株。2.利用HBV野生和耐药标准株对反向杂交体系进行一系列优化,并筛选叁种药物相关的十个耐药位点的理想探针(I169T, V173L/G, L180M, A181T/V, T184G, S202I/G, M204V/I,Q215S,N236T,M250V/I/L)。3.对建立的反向杂交体系进行方法学评价和临床评估。应用本方法分别检测HBV野生和耐药标准株,分析其检测特异性;将PCR产物以一定比例稀释,确定其对PCR产物量的检测下限;以一定比例混合野生和耐药标准株,分析本方法对野生或耐药突变的检测灵敏度。为进一步了解其临床可行性,应用本方法对10份未接受核苷(酸)类似物治疗和30曾接受核苷(酸)类似物治疗的乙型肝炎患者血清标本进行检测,其结果与直接测序法分析结果进行比较,分析其检测准确性以及对病毒载量的检测下限。结果:1.成功构建了HBV耐药标准株(rt169T, rt173L, rt180M, rt181T, rt184G, rt202I, rt204V, rt215S, rt236T, rt250V),经直接测序证实,其碱基序列与目的序列一致。2.初步确立反向杂交体系,并筛选到较为理想的检测探针。应用此方法可以区分单碱基差异,从而检出叁种药物十个位点相关的耐药突变。3.方法学评价和临床评估的实验结果证实本方法可以灵敏,特异地检出HBV耐药突变。当PCR产物的量达到10ng/μl时,本方法有效检测杂交信号;当HBV野生或耐药突变株占到病毒群体的5%时,可以被检测。临床标本的检测结果与直接测序法分析结果一致,且病毒载量在10~4拷贝/ml以上时,可以有效检测。结论:本研究通过诱变引物替换野生标准株上对应序列,快速,准确地构建HBV耐药标准株,这种方法为构建其他耐药突变体提供了新思路。在第二部分中,本研究利用野生和耐药标准株优化反应体系,并建立了一种同时检测HBV对叁种核苷类似物耐药的方法。为有效区分HBV野生和耐药株,放大两者之间的单碱基差异,本研究作了许多有益的尝试,其中,选用含有氯化四乙铵的杂交液,探针两端加同聚物修饰,引物标记叁个地高辛都取得了不错的效果。最后,通过方法学评价和临床可行性的分析,证明建立的检测体系是特异,灵敏的,可用于HBV耐药突变的检测。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2010-04-01）
赵丽[8]（2010）在《反向杂交快速检测HBV基因型方法的建立及临床应用》一文中研究指出乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染后的临床转归和对抗病毒治疗的应答,随感染基因型的不同存在明显差异。中国大陆地区主要以B型和C型为主,其中北方以C型多见,南方以B型多见。另外在我国一些地区还存在少量的基因型A和D。目前检测HBV基因型的方法较多,但大都耗时费力,价格昂贵。目的:建立一种简便快速准确检测HBV基因型的方法,利用该方法实现同时对HBV A~D 4种基因型的检测,探讨该方法用于临床检测HBV基因型的可行性。方法:1.针对A、B、C和D型设计扩增引物和型特异性探针。上游引物在5'端进行地高辛修饰,探针两端进行多聚物加尾。选择经测序确定为HBV B型、C型的各1例慢性乙型肝炎患者血清标本,提取病毒DNA,通过TA克隆获得B、C型的标准株质粒;根据NCBI收录的HBV A、D、E~H型序列,将其分型探针和引物区域由公司合成,克隆在pMD18-T质粒载体上,构建A、D、E~H型的标准质粒株。通过巢式PCR扩增获得用于杂交的目的片段。2.设计一系列优化实验,对探针载体、探针浓度及修饰、探针在载体上的固定、杂交条件、洗脱条件、抗体浓度以及显色方式进行优化,筛选出最佳反应条件,能特异灵敏的检测HBV基因型。3.利用构建好的A~H型质粒评价方法的特异性和灵敏性。将B、C型质粒PCR产物按不同比例混合后杂交,评价该方法检测混合感染的能力。用该方法检测70例临床样本的HBV基因型,同时对这批样本的PCR产物直接测序分型,比较两种方法的一致性。结果:1.成功构建了A~H 8种基因型的重组质粒株,选择序列保守区设计了扩增引物和针对A~D型的分型探针。2.优化后最佳工艺反应条件为:选择带正电荷尼龙膜为探针载体;探针进行多聚dC加尾、浓度稀释成10μmol/L,采用紫外交联和高温烘烤的方式对探针固定;地高辛抗体稀释倍数1:10000;38℃杂交1h并在38℃用0.5×SSC/0.1%SDS严格洗脱15min;采用碱性磷酸酶催化NBT/BCIP的方式显色。3.该方法特异性好,没有交叉反应。灵敏度可检测到拷贝数为103copy/ml或以上的样本,并可检测到含量为5%的混合型感染。对70例慢性乙型肝炎患者血清样品的HBV基因型检测,其中67例样本得以分型,另有3例样本因为PCR未能扩增出阳性条带,用本方法和测序法均未能对其进行分型。直接测序法与我们的方法检测结果基本一致,特异性达98.51%。重庆地区感染HBV主要以B型为主。结论:我们成功建立了一种快速简便检测HBV基因型的方法。操作简单,适合临床上大规模推广使用,根据需要可以继续设计其他型特异性探针,达到对8种基因型的检测,具有广泛的应用前景。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2010-04-01）
林琳,梁疆莉,刘渠,徐亚军,刘衡川[9]（2009）在《单链探针反向杂交试验技术检测结核分支杆菌链霉素耐药基因》一文中研究指出[目的]建立同时检测结核分支杆菌链霉素耐药基因突变的单链探针反向杂交试验技术(PCR-LiPA),同时从分子水平分析结核分支杆菌链霉素耐药性表型与耐药基因rpsL、rrs突变的相关性,评价单链探针反向杂交技术检测结核分支杆菌链霉素耐药性的应用价值。[方法]采集临床标本,按照实验规程培养、鉴定结核分支杆菌,并对分离到的结核分支杆菌进行药敏试验;PCR扩增结核分支杆菌rpsL、rrs耐药基因,单链探针反向杂交试验技术检测耐药基因。将PCR-LiPA方法结果与DNA测序比较验证方法的准确性,将PCR-LiPA方法结果与药敏结果比较。[结果]50株结核分支杆菌传统药物敏感性试验结果显示,15株耐SM。PCR-LiPA方法分析分析结果:耐SM菌株中7株rpsL基因突变、SM敏感株1株rpsl基因突变,rrs基因未发现突变;与DNA测序结果的符合率为100%。[结论]用PCR-LiPA可简便、快速、灵敏、特异地检测出一部分结核分支杆菌链霉素耐药株的rpsL、rrs基因突变,可作为临床结核分支杆菌链霉素耐药性的辅助诊断手段。(本文来源于《现代预防医学》期刊2009年18期）
张丹,代红莹,朱天金,张晓静[10]（2008）在《反向杂交检测23种人乳头瘤病毒型别在宫颈病变中的临床应用》一文中研究指出目的探讨反向杂交法(two-hybrid system techniques)检测23种人乳头状瘤病毒(HPV)的感染频率在快速诊断宫颈病变中的临床应用价值。方法将23种HPV型别特异性探针固定于尼龙膜条上,生物素标记的通用引物PCR(GP-PCR)扩增HPVDNA,扩增产物与膜条经反向杂交检测HPV型别,此方法用于门诊就诊的67例女性患者进行下生殖道HPV分型检测。结合24例宫颈病变病理诊断结果,对检测结果进行评价。结果67例门诊妇女中HPV阳性率为35.8%(24/67),在慢性宫颈炎症中HPV6的感染最高,占HPV感染阳性率的29.2%(7/24);在宫颈癌中HPV16感染率最高,占HPV感染阳性率的33.3%(8/24)。结论反向杂交能一次性检测23种HPV具体型别,敏感度高、特异性强、操作简便、结果易于判读,适于临床应用。(本文来源于《重庆医学》期刊2008年04期）
反向杂交论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:建立一种肽核酸(peptide nucleic acid,PNA)反向杂交技术,用于检测乙肝病毒阿德福韦酯(adefovir dipivoxil,ADV)常见耐药突变位点。方法:利用反向杂交技术,设计出特异性的PNA探针,与PCR扩增后带有生物素标记的样本进行杂交;通过对探针浓度,杂交温度和时间等条件的优化建立起最佳反应条件。应用该技术检测了临床ADV治疗慢性乙肝患者的72例血清样本,与测序法比较了其检测的准确性。结果:(1)通过共价结合能够将PNA探针固定在尼龙膜上,特异性检测ADV常见耐药突变位点。(2)与直接测序法相比,PNA反向杂交技术检测准确性为97.88%。结论:通过优化杂交反应,建立起快速、灵敏的检测乙肝病毒ADV常见耐药突变位点的PNA反向杂交技术。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
反向杂交论文参考文献
[1].赵芝梅,朱宇,吴燕,樊春笋,陈陶阳.反向杂交检测肝癌相关乙型肝炎病毒前C区突变方法的建立和应用[J].中国癌症杂志.2014
[2].单雪峰,谢素兰,黄爱龙,胡源.应用肽核酸反向杂交技术检测HBV阿德福韦耐药突变株[J].重庆医科大学学报.2014
[3].刘靖元,李仁龙,徐亚军.应用单链探针反向杂交试验检测结核分枝杆菌耐药性分析[J].中国医药科学.2012
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[10].张丹,代红莹,朱天金,张晓静.反向杂交检测23种人乳头瘤病毒型别在宫颈病变中的临床应用[J].重庆医学.2008
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