导读:本文包含了胸膜肺炎放线杆菌毒素论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:猪传染性胸膜肺炎放线杆菌,ApxI,ApxⅡ,ApxⅢ
胸膜肺炎放线杆菌毒素论文文献综述
万玉萌,安家慧,纪玉洁,郑瑞程,李玉峰[1]（2019）在《胸膜肺炎放线杆菌3种Apx毒素及外膜蛋白Omp2的原核表达及免疫反应性鉴定》一文中研究指出猪传染性胸膜肺炎是猪群一种常见的细菌性疾病,给养猪业造成了巨大的经济损失。为了对胸膜肺炎放线杆菌的感染情况进行监测,本研究设计了针对该菌毒素ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ和外膜蛋白Omp2的全基因PCR扩增引物,以实验室保存的血清2型和5型菌株基因组DNA作为模板成功扩增出特异性基因片段,分别将目的片段克隆入原核表达载体成功构建重组表达质粒pColdI-omp2、pColdI-ApxⅡ、pET-32am-ApxⅠ、pCold-ProS2-ApxⅢ。将重组质粒转化Rosetta感受态细胞,通过IPTG诱导表达,应用His单克隆抗体和临床阳性猪血清对表达的重组蛋白上清进行Western blot分析,结果表明表达蛋白的分子量大小与预期相符,通过诱导条件的优化可以稳定表达可溶性蛋白,可溶性蛋白能与His单克隆抗体和临床阳性猪血清发生特异性反应,证明重组蛋白具有良好的免疫反应性。该试验为后期建立胸膜肺炎放线杆菌抗体的ELISA检测方法奠定基础。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2019年05期）
赵席功[2]（2018）在《猪胸膜肺炎放线杆菌Ⅱ型毒素—抗毒素系统的鉴定与功能研究》一文中研究指出胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)是一种能够引起临床上以急性出血和坏死性、慢性纤维素性胸膜肺炎为主要特征的高度接触传染性疾病猪传染性胸膜肺炎(Porcine Contagious Pleuropneumoniae,PCP)的病原菌,一旦发病,将给国内外养猪业带来很大的经济损失。毒素-抗毒素(Toxin-antitoxin,TA)系统是一种在细菌和古生菌中广泛分布的小型基因组件。大多TA模型在许多细菌中已经被研究,并被证实在细菌生理机能和毒力方面起着重要作用。然而,在放线菌属中还没有被研究。因此,本研究主要研究猪胸膜肺炎放线杆菌中TA系统的分布存在情况,深化我们对APP生物学特性的认识;对APP中TA系统进行预测鉴定并对鉴定为TA系统的作进一步功能研究,希望可以筛选出与毒力相关的TA系统,为临床上弱毒疫苗及药物靶标的研究提供参考。主要研究内容如下:1、APP中Ⅱ型TA系统的鉴定在APP中,通过Ⅱ型TA系统预测软件RASTA-Bacteria和TADB2.0预测胸膜肺炎放线杆菌JL03菌株中TA系统,并选择两软件预测相同的7对作进一步的研究。通过RT-PCR实验验证TA基因共转录;超表达毒素使细菌生长受到抑制,但这种抑制可被其同源抗毒素中和;pull-down实验表明毒素与其同源抗毒素在体内发生相互作用;启动子活性实验表明抗毒素能够促进或者抑制自动调节TA操纵子的转录活性;此外,APJL_0660/0659 TA系统在被检测的部分APP血清型中存在,而其它3对TA系统在所检血清型中都存在。最终,我们在APP中确定了4对TA系统,为进一步的功能研究奠定基础。2、APP中4对TA系统的功能研究首先,通过自杀性质粒pEMOC2构建重组质粒pEΔTA,将测序正确的pEΔTA转化到β2155感受态中,将pEΔTA/β2155与亲本菌株APP5进行结合转移,挑出单交换菌株,进一步通过单交换传代挑取到基因缺失株ΔTA。其次,通过E.coli-APP穿梭质粒pJFF224-XN构建重组质粒pJFTA,将重组质粒电转化到ΔTA感受态中,挑菌鉴定氯霉素抗性菌株即可得到互补菌株CΔTA。最后,研究缺失株及互补菌株的生长特性、遗传稳定性和对小鼠的毒力。结果显示:CΔTA3和ΔTA3生长特性与APP5略有差异,而其它3对TA系统生长特性与亲本菌没有明显差异;4对TA系统对APP5的毒力没有影响。(本文来源于《华中农业大学》期刊2018-06-01）
张小勇[3]（2016）在《胸膜肺炎放线杆菌外毒素ApxⅣA的翻译后修饰及其生物学活性研究》一文中研究指出由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae, APP)感染所引起的猪传染性胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumonia, PCP)是一种高度接触性的呼吸道传染病。该病可造成猪的大量死亡,给全球养猪业带来了严重的经济损失。Apx外毒素是APP最重要的致病因子,APP能产生四种外毒素：ApxⅠ, ApxⅡ、ApxⅢ和ApxⅣ。其中前叁种毒素的活性依赖于由apxIC、apxIIC和apxIIIC编码的脂肪酸酰基化相关蛋白,而ApxⅣ的活性及活化机制缺乏研究,其上游基因orfl编码的蛋白可能参与ApxⅣ的活化。本研究选取ApxⅣ的结构蛋白ApxⅣA为研究对象,对其翻译后修饰的生物学活性进行了研究,取得了如下结果：1.ApxⅣA的表达纯化：通过同源重组法构建原核表达重组质粒pET-apxⅣA、pET-orfl-apxⅣA、pET-apxIC-apxⅣA和pET-apxIIC-apxⅣA,并分别对不同翻译后修饰条件下的重组蛋白ApxⅣA、ORF1-ApxⅣA、ApxIC-ApxⅣA和ApxIIC-ApxⅣA进行表达纯化。2. ApxⅣA溶血活性的鉴定：本试验分别采用绵羊红细胞和猪红细胞对ApxⅣA的溶血活性和协同溶血效应(CAMP)进行了研究,结果表明,ApxⅣA、ApxIC-ApxⅣA和ApxIIC-ApxⅣA都没有溶血活性,仅ORF1-ApxⅣA表现出协同溶血效应和较弱的溶血活性,且对猪红细胞的溶血活性略强于对绵羊红细胞的溶血活性。说明,在与ORF1共表达时,ApxⅣA才表现出溶血活性。3. ApxⅣA对SJPL细胞活性的影响：用重组蛋白ApxⅣA、ApxⅣA、 ORF1-ApxⅣA、ApxIC-ApxⅣA和ApxIIC-ApxⅣA分别处理SJPL细胞,结果表明,ORF1-ApxⅣA能显着降低SJPL细胞的活性,这一作用随ORF1-ApxⅣA浓度的降低而减弱；且ORF1-ApxⅣA对SJPL细胞的生长有抑制作用,并能使SJPL细胞发生皱缩和裂解。说明,在与ORF1共表达时,ApxⅣA对SJPL细胞的生长、形态及活性产生影响。4. ApxⅣA对SJPL细胞凋亡的影响：用ORF1-ApxⅣA处理SJPL细胞,对SJPL细胞进行FITC、PI双荧光染色,并通过流式细胞仪检测凋亡情况。结果表明,ORF1-ApxⅣA不能诱导SJPL细胞发生凋亡。(本文来源于《华中农业大学》期刊2016-06-01）
季洪伟[4]（2014）在《猪传染性胸膜肺炎放线杆菌LAMP检测方法的建立及Apx Ⅳ毒素部分功能研究》一文中研究指出猪传染性胸膜肺炎(Porcine Contagious Pleuropneumonia, PCP)是由猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae, APP)引起的并导致猪出现以胸膜炎及肺炎为特征的一种急性或慢性传染病。近年来,本病在世界各工业化养猪国家中广泛流行,给各国养猪业带来极大的损失,现被列为全球公认的危害养猪业的五大传染病之一。对于本病的预防多采用菌体灭活苗来进行,但由于APP血清型众多,且各血清型间的交叉保护力有限,加之灭活苗缺少APP在生长过程中分泌的毒素,而这些毒素已经被证明了APP重要的保护性抗原及灭活过程中抗原成分存在或多或少破坏及丢失的情况,灭活苗在预防本病的效果上并不十分突出。所以,对于本病新型疫苗的研究已经成包括国外在内的很多研究人员的关注,已经成为猪传染病领域的一个热点。本研究分成两个部分,具体如下：第一部分,为克服现有检测APP技术中所存在的操作复杂、设备昂贵、耗时长等问题,本研究通过DNAstar等软件对血清1-12型的APP的dsbe-like基因进行序列比对,找出其中同源性较高的序列,利用在线引物设计软件设计了4条LAMP引物,并对LAMP方法的各种反应条件进行优化,确定了25μ1的反应体系。在特异性检验中,利用LAMP方法对猪身上常见的几种病进行检测,结果表明,只有用APP核酸作为模板时才可出现阳性反应,说明本LAMP方法具有较好的特异性；在灵敏性检验中,通过对APP核酸进行梯度稀释,发现本LAMP方法的最低检测极限为5个拷贝／反应,是已报道的PCR方法的20倍。最后,分别利用细菌分离、PCR及本LAMP方法对外表健康猪肺脏与疑似感染APP猪肺脏进行检测以探索本LAMP方法在检测临床样品中的表现,结果显示,在外表健康猪组中细菌分离、PCR方法、LAMP方法的检出率分别为0%、2%、4%,而疑似感染组中叁种方法的阳性率分别为6.98%、58.14%、69.77%,且LAMP与细菌分离、PCR方法的阳性符合率为100%,说明本LAMP方法更加适合于APP的临床检测。综上,加之,本LAMP反应反拥有的成本低廉、不需要专业的操作技能等诸多优点,能较好地满足目前对猪传染性胸膜放线杆菌现场检测的迫切需要,对防止我国猪接触传染性胸膜肺炎病的发生和控制该病的流行应该有重要意义。第二部分,通过分析比对APP 5型的Apx IV基因序列,利用DNAstar等软件分析Apx Ⅳ基因中的可能存在抗体表位区并设计一对引物扩增出Apx Ⅳ基因序列中463-1261这一片段,并将其连接至pMD18-T质粒成功构建克隆载体,再通过酶切将目的片段连接至pET21a(+)成功构建表达载体并转化表达菌BL 21,通过各位表达条件的优化,成功表达了目的蛋白,经过经过破碎菌体及SDS-PAGE检测,蛋白以包涵体的形式表达。将重组表达的蛋白进行纯化、复性步骤后,经Western-blot抗原性分析表明所得到的重组蛋白纯度较高且具有良好的反应原性。再通过盐析的方法提取了APP5型的Apx Ⅰ、Apx Ⅱ两种溶血外毒素。最后,将灭活的含有不同剂量的重组表达Apx Ⅳ与灭活的Apx Ⅰ、Apx Ⅱ灭活菌使用白油为佐剂分别制备疫苗,采取背部多点注射的方式免疫小鼠,再以我国常见的血清5型的强毒株以10倍于LD50的剂量进行攻毒,结果显示,各组疫苗中随着重组Apx Ⅳ含量的增加,其免疫保护率也随之升高,表明本研究所重组的Apx Ⅳ能提供给免疫小鼠对相同血清型细菌攻毒一定的免疫保护作用。综上所述,重组的Apx Ⅳ作为额外成分添加后可增强亚单位疫苗的免疫保护力,但是,至于是如何提高灭活苗免疫保护效果的,其机理还有待进一步研究。(本文来源于《四川农业大学》期刊2014-06-01）
周家强,张洋溢,曹叁杰,黄小波,文心田[5]（2013）在《猪传染性胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ毒素的纯化及免疫原性研究》一文中研究指出本研究将本室构建的原核表达载体pET-ApxⅡ在大肠杆菌BL21中进行原核表达。表达产物以包涵体的形式存在,包涵体进过洗涤后通过亲和层析进行纯化,然后纯化后的蛋白进行Western-bloting检测分析。将100只小鼠随机分为5组,血清1型全菌灭活苗组,血清7型全菌灭活苗组,ApxⅡA蛋白免疫组,血清7型灭活苗+ApxⅡA蛋白免疫组以及PBS对照组。每次免疫后一周,利用毒素Ⅱ建立的ELISA进行抗体的检测,第叁次免疫后一周,用浓度分别为1.0×106CUF/ml和1.5×106CUF/ml的1型和7型菌株进行攻毒。结果显示:单独ApxⅡA蛋白免疫的小鼠对血清1型攻击的保护率为60%,对血清7型的保护率为50%,对同种血清型和异种血清型都有一定的免疫保护力;而血清7型灭活苗+ApxⅡA蛋白免疫组的保护率分别为70%和90%,表明ApxⅡA蛋白在一定程度内能够增强灭活苗的免疫效果。本研究为猪传染性胸膜肺炎高效疫苗的研究奠定了基础。(本文来源于《中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会论文集》期刊2013-10-21）
谢碧林,李超美,王芳,宋艳华,何孔旺[6]（2013）在《猪胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅱ蛋白的间接ELISA检测》一文中研究指出为了建立快速检测猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropeumoniae)抗体的间接ELISA方法,将质粒pET-rApxⅡ转化至BL21,IPTG诱导表达毒素rApxⅡ融合蛋白,经亲和层析纯化后的蛋白作为检测抗原。对ELISA各检测条件进行优化,结果显示,抗原最适包被浓度为10μg/mL,血清最佳稀释度为1∶80。用建立的ELISA方法对猪链球菌、多杀性巴氏杆菌、猪副嗜血杆菌、大肠杆菌阳性血清进行检测,均无交叉反应。利用建立的ELISA方法从172份临床血清样本中检测出84份阳性血清样本,而利用Cps-ELISA试剂盒检测到74份阳性样品,本方法检测总符合率达83%。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2013年01期）
刘琼,龚雨恒,王国镔,文心田,黄小波[7]（2012）在《猪传染性胸膜肺炎放线杆菌缺失毒素1激活基因C(ApxIC)同时嵌合副猪嗜血杆菌外膜蛋白P2基因(ompP2)复合突变株的构建》一文中研究指出猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)以及副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis,Hps)是引起猪发病的2种病菌。本研究以APP血清5型分离株(SW1)为基础材料,通过构建重组转移载体pBOSKΔIC-1和pBOSKΔIC/ompP2,构成卡那霉素抗性基因(Kanr)和枯草芽胞杆菌(Bacillussubtilis)的果聚蔗糖酶基因(sacB)的正负双向筛选表达盒,并筛选获得SW1株缺失毒素I的激活基因C(ApxIC),同时嵌合Hps外膜蛋白P2基因(ompP2)的复合突变株SW1ΔApxIC/ompP2。该突变株经鉴定,与SW1亲本株相比,其缺失了大小为475bp的apxIC基因,同时嵌合有大小为1107bp的Hps ompP2基因,其基本生长特性与亲本株(SW1)没有显着区别;同时在体外,连续传代10代之后缺失的apxIC基因不会发生回复突变,嵌入的ompP2基因仍能够稳定遗传。本研究成功构建了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌缺失apxIC基因并嵌合有Hps ompP2基因复合突变株,为今后研究APP和Hps新型二联疫苗打下基础。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2012年06期）
郭丽琼[8]（2010）在《胸膜肺炎放线杆菌RTX毒素与宿主细胞相互作用的初步研究》一文中研究指出由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)引起的猪传染性胸膜肺炎造成了世界养猪业的重大经济损失,其最重要的毒力因子之一是胸膜肺炎放线杆菌外毒素(Apx)。Apx毒素属于RTX毒素家族,是Ca2+依赖性的溶血素,有的还同时具有细胞毒素作用。到目前为止,已经在胸膜肺炎放线杆菌的15个血清型菌株中发现了四种Apx毒素,即ApxⅠ、ApxⅡApxⅢ和ApxⅣ。Apx毒素一般由C、A、B、D四个基因组成的操纵子编码,A基因编码结构蛋白并能被C基因的编码产物激活,B和D基因的编码产物参与毒素蛋白的分泌。由RTX毒素引发的细胞死亡主要有两种方式,即细胞凋亡和细胞坏死。以往的研究表明,高浓度的RTX毒素能导致靶细胞迅速死亡并伴随细胞坏死的特征,而当靶细胞接触低浓度的RTX毒素时呈现出细胞凋亡的的形态学、生化和分子变化特征。由于Apx的复杂性,Apx与靶细胞之间的相互作用目前还不清楚。本论文初步研究了ApxⅠ、ApxⅡ与猪外周血白细胞、猪肺上皮细胞之间的相互作用。Apx毒素引起猪外周血白细胞凋亡：利用常规方法提取猪胸膜肺炎放线杆菌血清10型的天然毒素ApxⅠ和血清7型的天然毒素ApxⅡ,并制备了重组蛋白rApxⅠA。分别设置天然毒素ApxⅠ组、天然毒素ApxⅡ组、重组蛋白rApxⅠA组、叁种蛋白的caspase广谱抑制剂组、叁种蛋白的caspase-3抑制剂组以及叁种蛋白的caspase-9抑制剂组,然后分别设置时间梯度和浓度梯度,作用于猪外周血白细胞,用DNA ladder方法检测其凋亡并分析其凋亡途径。实验结果显示,ApxⅡ引起的白细胞凋亡是通过caspase-9和caspase-3共同激活途径,而ApxⅠ毒素和重组蛋白rApxⅠA在较低浓度时未能引起白细胞凋亡Apx毒素引起猪肺上皮细胞凋亡：分别设置天然毒素ApxⅠ组、重组蛋白rApxⅠA组、两种蛋白的caspase广谱抑制剂组、两种蛋白的caspase-3抑制剂组以及两种蛋白的caspase-9抑制剂组,然后分别设置时间梯度和浓度梯度作用SJPL猪肺上皮细胞,用DNA ladder方法检测其凋亡并分析其凋亡途径。实验结果显示,ApxⅠ引起SJPL细胞凋亡是通过caspase-3激活途径,而rApxⅠA不引起SJPL细胞发生凋亡现象。抗生素对ApxⅠ致猪肺上皮细胞凋亡的影响：以往研究表明,长期在抗生素培养条件下的细胞常常会出现生理生化特性的微小变化。为了研究此现象是否对凋亡产生作用,我们将猪肺上皮细胞分成两组,一组用“双抗”培养5代,另一组不用抗生素培养,然后用天然毒素ApxⅠ分别作用两组细胞,检测抗生素是否会对靶细胞凋亡产生影响。实验结果显示,在抗生素培养下的细胞呈现出凋亡延迟现象,而且毒素作用浓度的高低对细胞凋亡的延迟时间也有影响。(本文来源于《华中农业大学》期刊2010-06-01）
Park,C,邱文英[9]（2010）在《突变缺失Apx毒素分泌蛋白基因apxⅢB和apxⅢD的胸膜肺炎放线杆菌血清2型的构建与鉴定》一文中研究指出经鉴定,Apx毒素是猪胸膜肺炎的病原体—胸膜肺炎放线杆菌的重要毒力因子。在一些胸膜肺炎放线杆菌血清型中,Apx毒素是由apxⅢB和apxⅢD编码后经细胞膜分泌的。为了构建1株抗胸膜肺炎放线杆菌的活疫苗株,笔者将胸膜肺炎放线杆菌血清2型菌株-1536的apxⅢB和apxⅢD基因进行灭活,从而构建DeltaapxⅢB/DapxⅢD突变株(1536DeltaBDeltaD)。用活的1536DeltaBDeltaD胸膜肺炎放线杆菌对猪进行免疫后,能保护猪免于同源的野生型胸膜肺炎放线杆菌1536的攻击。因此,被损坏的Apx毒素分泌物可使胸膜肺炎放线杆菌的毒力减弱,并可作为开发胸膜肺炎放线杆菌弱毒疫苗的有效策略。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2010年02期）
张志妮,张伟娟,林燕清,顾万军,黄良宗[10]（2009）在《抗猪胸膜肺炎放线杆菌ApxIV毒素单克隆抗体的制备及初步应用》一文中研究指出据猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,App)apxⅣ毒素基因5′端的保守区域设计一对特异性引物,应用PCR方法扩增出致病性App1~12血清型菌株的保守5′端序列片段,构建的重组质粒pETapxⅣN经IPTG诱导表达出分子量大小为35.3kDa的可溶性重组蛋白。以亲和层析试剂盒纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗ApxⅣ毒素单克隆抗体(McAb)。以间接ELISA法筛选到两株分泌稳定、抗体亚类均为IgGl的杂交瘤细胞5B7和5C11,其培养上清和小鼠腹水抗体效价分别为1∶64、1∶128和1∶64 000、1∶128 000.两株单抗与临床猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪呼吸道繁殖障碍综合征病毒、猪黄、白痢产肠毒素大肠杆菌和猪肺疫多杀性巴氏杆菌感染阳性血清均不发生交叉反应,显示出良好的特异性.竞争性结合试验表明两株单抗识别不同的抗原结合表位.以(NH4)2SO4盐析法纯化的5C11小鼠腹水单抗包被酶标板,生物素标记纯化的5B7单抗建立了检测ApxⅣ毒素的双抗体夹心ELISA法,其包被单抗最佳工作浓度为4μg/ml,生物素标记单抗最佳工作浓度为0.8μg/mL,对重组表达ApxⅣ毒素(rApxⅣ)的最低检出量为60pg/mL。从10份临床病猪血清样本中检出6份ApxⅣ毒素阳性,与细菌分离鉴定和PCR结果相符合,结果表明此法可用于App感染的临床诊断。(本文来源于《中国动物传染病学报》期刊2009年04期）
胸膜肺炎放线杆菌毒素论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)是一种能够引起临床上以急性出血和坏死性、慢性纤维素性胸膜肺炎为主要特征的高度接触传染性疾病猪传染性胸膜肺炎(Porcine Contagious Pleuropneumoniae,PCP)的病原菌,一旦发病,将给国内外养猪业带来很大的经济损失。毒素-抗毒素(Toxin-antitoxin,TA)系统是一种在细菌和古生菌中广泛分布的小型基因组件。大多TA模型在许多细菌中已经被研究,并被证实在细菌生理机能和毒力方面起着重要作用。然而,在放线菌属中还没有被研究。因此,本研究主要研究猪胸膜肺炎放线杆菌中TA系统的分布存在情况,深化我们对APP生物学特性的认识;对APP中TA系统进行预测鉴定并对鉴定为TA系统的作进一步功能研究,希望可以筛选出与毒力相关的TA系统,为临床上弱毒疫苗及药物靶标的研究提供参考。主要研究内容如下:1、APP中Ⅱ型TA系统的鉴定在APP中,通过Ⅱ型TA系统预测软件RASTA-Bacteria和TADB2.0预测胸膜肺炎放线杆菌JL03菌株中TA系统,并选择两软件预测相同的7对作进一步的研究。通过RT-PCR实验验证TA基因共转录;超表达毒素使细菌生长受到抑制,但这种抑制可被其同源抗毒素中和;pull-down实验表明毒素与其同源抗毒素在体内发生相互作用;启动子活性实验表明抗毒素能够促进或者抑制自动调节TA操纵子的转录活性;此外,APJL_0660/0659 TA系统在被检测的部分APP血清型中存在,而其它3对TA系统在所检血清型中都存在。最终,我们在APP中确定了4对TA系统,为进一步的功能研究奠定基础。2、APP中4对TA系统的功能研究首先,通过自杀性质粒pEMOC2构建重组质粒pEΔTA,将测序正确的pEΔTA转化到β2155感受态中,将pEΔTA/β2155与亲本菌株APP5进行结合转移,挑出单交换菌株,进一步通过单交换传代挑取到基因缺失株ΔTA。其次,通过E.coli-APP穿梭质粒pJFF224-XN构建重组质粒pJFTA,将重组质粒电转化到ΔTA感受态中,挑菌鉴定氯霉素抗性菌株即可得到互补菌株CΔTA。最后,研究缺失株及互补菌株的生长特性、遗传稳定性和对小鼠的毒力。结果显示:CΔTA3和ΔTA3生长特性与APP5略有差异,而其它3对TA系统生长特性与亲本菌没有明显差异;4对TA系统对APP5的毒力没有影响。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
胸膜肺炎放线杆菌毒素论文参考文献
[1].万玉萌,安家慧,纪玉洁,郑瑞程,李玉峰.胸膜肺炎放线杆菌3种Apx毒素及外膜蛋白Omp2的原核表达及免疫反应性鉴定[J].畜牧与兽医.2019
[2].赵席功.猪胸膜肺炎放线杆菌Ⅱ型毒素—抗毒素系统的鉴定与功能研究[D].华中农业大学.2018
[3].张小勇.胸膜肺炎放线杆菌外毒素ApxⅣA的翻译后修饰及其生物学活性研究[D].华中农业大学.2016
[4].季洪伟.猪传染性胸膜肺炎放线杆菌LAMP检测方法的建立及ApxⅣ毒素部分功能研究[D].四川农业大学.2014
[5].周家强,张洋溢,曹叁杰,黄小波,文心田.猪传染性胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ毒素的纯化及免疫原性研究[C].中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会论文集.2013
[6].谢碧林,李超美,王芳,宋艳华,何孔旺.猪胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅱ蛋白的间接ELISA检测[J].江苏农业科学.2013
[7].刘琼,龚雨恒,王国镔,文心田,黄小波.猪传染性胸膜肺炎放线杆菌缺失毒素1激活基因C(ApxIC)同时嵌合副猪嗜血杆菌外膜蛋白P2基因(ompP2)复合突变株的构建[J].农业生物技术学报.2012
[8].郭丽琼.胸膜肺炎放线杆菌RTX毒素与宿主细胞相互作用的初步研究[D].华中农业大学.2010
[9].Park,C,邱文英.突变缺失Apx毒素分泌蛋白基因apxⅢB和apxⅢD的胸膜肺炎放线杆菌血清2型的构建与鉴定[J].中国畜牧兽医.2010
[10].张志妮,张伟娟,林燕清,顾万军,黄良宗.抗猪胸膜肺炎放线杆菌ApxIV毒素单克隆抗体的制备及初步应用[J].中国动物传染病学报.2009
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