人羊膜上皮细胞的体外培养及诱导分化

论文摘要

人羊膜上皮细胞由外胚层发育而来,属于成体干细胞,具有来源广泛、免疫原性低、非致瘤性、不存在医学伦理道德限制等优点.研究目的:建立人羊膜上皮细胞的体外分离培养的方法,检测其向三胚层诱导分化培养潜能.在无菌条件下机械分离羊膜,使用胰蛋白酶分步消化法收集人羊膜上皮细胞,体外培养,观察其细胞形态与生长规律;并通过免疫细胞化学法,RTPCR及三胚层定向诱导等方法对其进行鉴定.结果:成功从人羊膜中分离得到纯度较高的人羊膜上皮细胞.免疫细胞化学法鉴定结果显示,分离到的羊膜上皮细胞内的角蛋白19呈阳性;RT-PCR鉴定干细胞标志基因REX1、Oct-4和Nanog,在mRNA水平均有表达;定向诱导条件下,人羊膜上皮细胞可向成脂、成神经和成肝样细胞分化.结论:人羊膜上皮细胞可在体外分离培养,具有干细胞特性,可以定向诱导分化成内胚层、中胚层、和三胚层三个胚层组织与细胞.

论文目录

• 引言
• 1 材料与方法
•   1.1 实验材料与试剂
•     1.1.1 实验材料
•     1.1.2 实验试剂
•   1.2 实验方法
•     1.2.1 人羊膜上皮细胞的分离培养
•     1.2.2 人羊膜上皮细胞的传代培养
•     1.2.3 人羊膜上皮细胞的生长曲线测定
•     1.2.4 免疫细胞化学法检测细胞内角蛋白19
•     1.2.5 人羊膜上皮细胞向成脂细胞诱导分化及鉴定
•     1.2.6 人羊膜上皮细胞向成神经细胞诱导分化及鉴定培养
•     1.2.7 人羊膜上皮细胞向成肝样细胞诱导分化及鉴定
•     1.2.8 RT-PCR检测干细胞标志基因的表达情况
• 2 实验结果与分析
•   2.1 人羊膜上皮细胞的形态观察
•   2.2 人羊膜上皮细胞的生长曲线
•   2.3 免疫细胞化学法检测角蛋白19 （CK19） 的表达
•   2.4 RT-PCR检测干性基因Oct-4、Nanog和REX1的mRNA水平的表达情况
•   2.5 人羊膜上皮细胞成脂诱导分化及鉴定
•   2.6 人羊膜上皮细胞成神经诱导分化及鉴定
•   2.7 人羊膜上皮细胞成肝样细胞诱导分化及鉴定
• 3 讨论
•   3.1 人羊膜上皮细胞的分离培养
•   3.2 人羊膜上皮细胞的生物学特性
•   3.3 人羊膜上皮细胞的多向分化潜能
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 白立恒,张钰堃,刘默凝,李岩,曹贵方

关键词: 羊膜上皮细胞,体外培养,诱导分化

来源: 内蒙古大学学报(自然科学版) 2019年02期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 内蒙古妇幼保健医院,内蒙古农业大学内蒙古自治区基础兽医学重点实验室

基金: 内蒙古自治区自然科学基金项目(2015MS0375)

分类号: R329.2

DOI: 10.13484/j.nmgdxxbzk.20190208

页码: 162-170

总页数: 9

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