日本乙型脑炎病毒感染对CD8+ T细胞免疫应答的影响

论文摘要

日本乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）是黄病毒属的一种蚊媒病毒,是急性病毒性脑炎和流行性脑炎的常见病因。世界上大约60%的人口居住在JEV流行地区。由于全球变暖,病毒继续传播到以前未受影响的地区。JEV感染机体后大部分的病毒能被机体的免疫系统清除,但有少量病毒能够逃逸机体的免疫反应并穿越血脑屏障（blood-brain barrier,BBB）进入到中枢神经系统（central nervous system,CNS）。基于以上原因,本课题对JEV逃逸适应性免疫反应的机制进行了研究。首先,本研究采用尾静脉注射JEV于6-8周龄C57BL/6小鼠中。RT-PCR检测小鼠脾脏中MHCⅠ类抗原加工相关基因的表达情况;流式检测小鼠脾脏中树突状细胞以及巨噬细胞表面MHCⅠ类分子的变化;流式检测骨髓来源的巨噬细胞中MHCⅠ类抗原加工相关基因的表达情况。结果表明JEV P3强毒株感染引起脾脏中MHCⅠ类抗原加工相关基因的表达下调;JEV P3强毒株感染引起小鼠脾脏中树突状细胞以及巨噬细胞表面MHCⅠ类分子的表达上调,同时引起骨髓来源的巨噬细胞中抗原加工相关基因的表达上调,可能有助于CD8+T细胞的活化。其次,流式检测树突状细胞、巨噬细胞和CD8+T细胞上共刺激分子的表达情况。结果显示树突状细胞、巨噬细胞和CD8+T细胞上共活化分子和共抑制性分子的表达上调,通过这些抑制性分子的相互作用,可能影响CD8+T细胞的活化。最后,体内流式检测CD8+T细胞效应功能的变化和CD8+T细胞的比例变化以及体外杀伤实验检测CD8+T细胞的杀伤功能。结果表明JEV P3强毒株感染引起CD8+T细胞的活化和效应功能的增强,但是CD8+T细胞的比例显著减少,这可能会影响CD8+T细胞的免疫应答。综上所述,JEV P3强毒株感染导致CD8+T细胞的活化及杀伤功能的增强,但引起CD8+T细胞比例显著减少,可能从个体水平上影响细胞免疫应答及介导病毒逃逸。该研究有助于更好的理解JEV感染过程中免疫逃逸的机制,为相关研究提供借鉴。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略语表（Abbreviation）
• 1 文献综述
•   1.1 日本乙型脑炎病毒
•   1.2 乙型脑炎病毒的病原学特点
•   1.3 乙型脑炎病毒的致病机制
•   1.4 病毒感染对天然免疫应答的影响
•     1.4.1 Ⅰ型干扰素应答
•     1.4.2 自然杀伤细胞的免疫应答
•     1.4.3 细胞凋亡的调节
•   1.5 病毒感染对适应性免疫应答的影响
•     1.5.1 体液免疫应答
•     1.5.2 细胞免疫应答
•     1.5.3 CD4+T 细胞的免疫应答
• + T 细胞的免疫应答'>    1.5.4 CD8⁺ T 细胞的免疫应答
• 2 目的与意义
• 3 材料与方法
•   3.1 实验材料
•     3.1.1 病毒、细胞
•     3.1.2 主要药品和试剂
•     3.1.3 培养基及其配制
•     3.1.4 溶液及其配制
•     3.1.5 实验动物
•     3.1.6 实验所用手术器械
•     3.1.7 重要仪器及设备
•   3.2 实验方法
•     3.2.1 细胞的复苏和培养
•     3.2.2 JEV的扩增与毒价滴定
•     3.2.3 L929 上清的收集
•     3.2.4 BMDM样品的收集
•     3.2.5 靶细胞的制备
•     3.2.6 JEV-P3和SA14-14-2 感染C57BL/6 小鼠
•     3.2.7 混合白血球反应（mixed leucocyte reaction,MLR）
•     3.2.8 小鼠脾脏组织的处理
•     3.2.9 细胞表面染色和胞内染色
•     3.2.10 体外杀伤实验
•     3.2.11 流式细胞术数据分析
•     3.2.12 数据统计分析
•     3.2.13 手术器械消毒
•     3.2.14 实验动物伦理声明
•     3.2.15 实验动物及废物无害化处理
• 4 结果与分析
•   4.1 JEV-P3 株和JEV-SA14-14-2 株毒价的测定
•   4.2 JEV感染对小鼠体内抗原加工呈递相关分子的影响
•   4.3 JEV感染对BMDM中抗原加工相关分子的影响
•   4.4 JEV感染对小鼠脾脏中共刺激分子的影响
•     4.4.1 JEV感染对CD40和CD40L表达的影响
•     4.4.2 JEV感染对CD80和CD86 表达的影响
•     4.4.3 JEV感染对CD28和CTLA-4 表达的影响
•     4.4.4 JEV感染对PD-L1和PD-1 表达的影响
•     4.4.5 JEV感染对HVEM和 BTLA表达的影响
• +T 细胞杀伤功能的影响'>  4.5 JEV感染对CD8⁺T 细胞杀伤功能的影响
• 5 讨论
• 6 结论
• 参考文献
• 致谢

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 张静

导师: 崔旻

关键词: 日本乙型脑炎病毒,细胞,共刺激分子,效应分子,免疫逃逸

来源: 华中农业大学

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 华中农业大学

分类号: R373.31

DOI: 10.27158/d.cnki.ghznu.2019.000420

总页数: 77

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