内蒙古东部地区的可培养粘细菌及其抗菌活性的初步检测

论文摘要

粘细菌（Myxobacteria）是一类专性好氧的单细胞型革兰氏阴性菌,能产生结构新颖、种类丰富以及机制独特的次级代谢产物,是研发新药或其先导化合物的重要药源资源菌,在农业、生态、医药等方面有着极大的应用及开发价值。本研究所用150份土壤样品均采自内蒙古东部地区。首先,测定所有土样的环境参数。结果表明,内蒙古东部地区的土壤多呈中性偏酸性,且处于不同程度的干旱状态,有机质、有效磷、速效钾及水解氮的含量普遍较低,土壤肥力整体较差。利用大肠杆菌划线、兔粪诱导及滤纸诱导3种方法从150份土样中分离粘细菌,以直接挑取子实体与抗生素处理相结合等方式对粘细菌进行纯化,最终共分离到300株粘细菌,分属于 5 个属,即 Myxococcus、Corallococcus、Pyxidicoccus、Cystobacter、Archangium,优势菌属为Myxococcus。粘细菌资源丰富度最佳的是赤峰地区,呼伦贝尔地区相对较差。土壤利用方式为耕地和草地的粘细菌种类及数量分布较丰富,而林地及未利用土地的土壤中相对较少。土壤类型为栗钙土、风沙土及草甸土中分离到的粘细菌种类及数量较多,分布在棕壤土、棕色针叶林土及灰色森林土中较少。可培养的粘细菌分布与样品的环境参数中pH表现为显著正相关、与有机质含量表现为显著负相关。在对东部地区所有粘细菌的抑菌活性检测中,最为显著的是94.67%的粘细菌对马铃薯晚疫病菌都能表现出不同水平的抑制作用,且有7.75%的菌株抑菌能力极强,其中Myxococcus、Corallococcus、Pyxidicoccu和Archangium 这四个属的粘细菌阳性检出率均为100%,对其活性物质的确定及拮抗机理等问题需进一步探究。本研究对粘细菌的保藏方法进行了初步探究与检测,包括滤纸保藏法、蒸馏水保藏法、甘油-生理盐水保藏法及甘油直接保藏法。结果显示,所有方法都能够检测到粘细菌的生存力;4种保藏方法对不同种属的粘细菌形态及生理生化特征无任何显著性影响;4种方法对粘细菌抑菌能力强弱是受菌株特异性影响的;考虑到污染率、复苏率、生长率等各个方面的因素,所有被检测的粘细菌在-80℃滤纸保藏法中保藏效果最佳,在甘油浓度为20%条件下次之,蒸馏水保存法中4℃保藏及20%甘油-生理盐水保藏法效果稍弱。对不同种属的粘细菌菌株应通过几种不同方法进行保藏,以保证菌株的性能稳定。本研究首次对内蒙古东部地区可培养粘细菌的分布及其抗菌活性进行了分析,该实验的完成不仅丰富了内蒙古自治区的粘细菌资源库,更为未来本地区粘细菌资源的开发及利用奠定基础。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
•   1.1 内蒙古东部地区概况
•   1.2 粘细菌
•   1.3 粘细菌的特征
•   1.4 粘细菌的分类
•   1.5 粘细菌活性物质的探究
•   1.6 粘细菌的长期保藏
•   1.7 研究的目的与内容
• 2 材料和方法
•   2.1 采集样品
•   2.2 材料
•     2.2.1 供试的菌株
•     2.2.2 主要仪器和设备
•     2.2.3 土样环境参数测定的实验试剂
•     2.2.4 粘细菌分离纯化的关键试剂
•     2.2.5 所需培养基
•     2.2.6 分析数据软件
•   2.3 实验方法
•     2.3.1 土样的采集与保存
•     2.3.2 土样环境参数的测定
•     2.3.3 粘细菌的初步分离
•     2.3.4 粘细菌菌株的纯化
•     2.3.5 粘细菌验纯
•     2.3.6 纯化菌株的保存
•     2.3.7 粘细菌基于16S rRNA分子鉴定
•     2.3.8 粘细菌抗菌谱的检测
•     2.3.9 粘细菌保藏方法的建立
• 3 结果与分析
•   3.1 土样环境参数测定
•   3.2 粘细菌的分离及纯化
•   3.3 粘细菌鉴定
•     3.3.1 形态学初步鉴定
•     3.3.2 基于16S rRNA分子鉴定
•   3.4 粘细菌的分布情况
•     3.4.1 内蒙古东部地区粘细菌的分布规律
•     3.4.2 粘细菌在不同土壤利用方式下的分布
•     3.4.3 粘细菌在不同土壤类型下的分布
•     3.4.4 环境因子与粘细菌分布的相关分析
•   3.5 粘细菌的抗菌活性分析
•   3.6 粘细菌保藏方法的建立
•     3.6.1 不同保藏条件粘细菌菌株存活率的检测
•     3.6.2 不同保藏条件粘细菌子实体形态的检测
•     3.6.3 不同保藏条件粘细菌生理生化特征的检测
•     3.6.4 不同保藏条件粘细菌生长速率的检测
•     3.6.5 不同保藏条件粘细菌抗菌活性的检测
• 4 讨论
•   4.1 内蒙古东部地区土样的环境参数
•   4.2 粘细菌分离及纯化
•   4.3 粘细菌多样性的分析
•   4.4 粘细菌抗菌活性的分析
•   4.5 粘细菌不同保藏方法的分析
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 作者简介

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 王雪寒

导师: 刘惠荣

关键词: 内蒙古东部地区,粘细菌,分离鉴定,抗菌活性,保藏方法

来源: 内蒙古农业大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 内蒙古农业大学

基金: 国家自然科学基金项目“内蒙古粘细菌资源多样性及其抗马铃薯晚疫病活性分析”(No.31370058)

分类号: Q93

DOI: 10.27229/d.cnki.gnmnu.2019.000221

总页数: 88

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