（上海市宝山区中西医结合医院检验科上海200900）
【摘要】流式细胞技术是目前较为先进的细胞定量分析技术，本文以大量文献资料作为基础，对当前该技术的研究结果进行总结，再结合临床工作经验，对流式细胞技术在医学检验中的应用进行综合论述，包括其工作设备、原理、技术流程等，最后以细胞免疫功能检测、白血病免疫分型检测作为对象进行分析，为流式细胞技术在医学检验中的进一步应用提供必要参考。
【关键词】流式细胞技术；流动系统；光学系统；细胞免疫功能
【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2018）25-0372-02
前言
流式细胞技术（flowcytometry,FCM）是在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。该技术实现了大量细胞（10000个以上）的同步分析，可以从单一细胞中测得多个参数，具有速度快、精度高、准确性好的优点。20世纪早期流式细胞技术就开始应用于医学领域，获取了较为理想的效果，本文对其在医学检验中的应用进行综述。
1.流式细胞技术
流式细胞技术是一种综合了多项科学成果的综合性技术，该技术涵盖一般性的细胞学知识和统计学理论，同时牵涉到生物学、流体力学、电子等生物技术学科，应用的原理并不复杂，结果也比较理想，但过程较为繁琐，对各环节的技术要求都较高。目前的医学检验中，流式细胞技术也被称为流式细胞分析，主要借助流式细胞仪以及其他专业设备、辅助设备，对流式细胞仪，再分析测量结果，包括细胞的基本态势、特异性、功能情况等等。20世纪后期以来，随着医疗技术和生物学、信息技术的持续进步，流式细胞技术在医学检验中的应用越发广泛，涵盖肿瘤检验、常规细胞检测、血液检验等多个领域，应用效果也较为理想。
2.流式细胞技术在医学检验中的应用
2.1应用设备
流式细胞技术的原理虽然明确，但检测过程需要多项技术的支持，且各个环节的都要求给予精确化、规范化处理，这使得传统人工处理的方式不再适用，设备的应用价值也因此更加突出，目前主要的工作设备为流式细胞仪。20世纪30年代，随着现代生物技术的发展和医疗技术的进步，德国学者古斯特（Guclcer）在细胞计数学的基础上，进行了流式细胞技术的初步研究，到1947年，古斯特已经初步完成了细胞计数对层流以及端流的原理研究，并在实验室中发明了细胞计数仪器，该设备被命名为烟雾微粒计数器，能够同步进行50～100个对象目标的单一参数分析，被认为是现代流式细胞仪的始祖。
1953年，法国学者在古斯特研究的基础上，对设备进行了改造，发明了全血细胞计数器。随后的多年时间里，各国学者纷纷投入到流式细胞仪的研究中，第一台光电计数器发明于1954年；1969年，医学界出现第一台使用荧光检测进行细胞计数仪器；而后在1972年，对细胞分选器的研制取得了成功；单克隆抗体技术在1975年被提出，为细胞研究中应用特异性免疫试剂提供了更多的理论支持[1]。到21世纪，现代意义上的细胞分析仪出现，并开始服务于医学工作。
2.2工作原理
流式细胞仪分为五个工作系统，即液体流动系统、激光系统、光学分析系统、信号系统、细胞分析系统。在常规工作状态下，对象目标被投入分析仪后，分析仪通过激光对其染色细胞进行测量，存在特异性（如被病毒和细菌破坏的细胞）的细胞得到捕捉，其标志也在捕捉过程中被记录下来，这种特异性主要通过荧光强度、荧光宽度、散射光强度等参数表达，特异性突出的对象（如肿瘤细胞）被捕捉后，可以作为分析的有效参考。在定量分析模式下，细胞抗原物质也可以得到区分，并据此得到细胞成分的基本信息。
2.3常见分析方法
目前流式细胞分析方法包括流式细胞免疫表型分析法、血液淋巴细胞免疫表型分析法、流式细胞内或细胞核内抗原分析法等。这三种方法均强调以标准化的模型为基础，选取若干参数做特异性观察，以此判定细胞态势。流式细胞免疫表型分析法下，通过分子探针进行标记，对单克隆抗体进行分析，探针上附荧光素，可以鉴别单细胞的抗原，完成对大量细胞的同步判断，当其中部分细胞荧光素的宽度、亮度存在异常时，特异性会直接得到捕捉，用于细胞态势解读。血液淋巴细胞免疫表型分析法下，可使用多种荧光色，与全血中淋巴细胞膜的特异性抗原进行结合，溶解红细胞，洗涤抗体，统计存在异常的细胞数目，使用的荧光色越多，分析的结果越全面，但可能导致分析精度出现下降。流式细胞内或细胞核内抗原分析法一般应用于白血病和肿瘤检测，主要捕捉异常细胞核健康细胞的差异，分析靶细胞态势进行诊断[2]。
2.4典型应用
流式细胞技术在医学检验中的应用广泛，本节选取细胞免疫功能检测、白血病免疫分型检测作为对象进行综述。细胞免疫功能检测是常规检测的一项核心内容，主要分析患者体内部分细胞或者固定组织、器官内细胞的基本情况。由于很多疾病的靶器官较为固定，病毒/细菌的破坏作用也会造成明显的特异性变化，针对细胞免疫功能的检测往往可以收获较为良好的效果。如淋巴肿瘤检测，借助设备对淋巴细胞膜表面使用荧光抗原以及抗体检测技术进行抗原、各亚群等进行检测分析，了解不同亚群的发展态势、占比情况，可以评估患者病情以及免疫系统态势，可以作为早期诊断的重要依据。白血病免疫分型检测方面，通过分析血细胞与白细胞的分化程度可以了解抗原水平，获取可靠的成果，对患者是否患有白血病、白血病的发展态势进行科学评估。
综上所述，流式细胞技术的应用价值突出，原理也较为明确，但在医学检验中应用时，需要注意各环节操作的精细化程度。其应用借助流式细胞仪和其他专业设备，常见方法也较多，在细胞免疫功能检测、白血病免疫分型检测工作中的成果良好，可以进一步加以推广。
【参考文献】
[1]郑美娟.流式细胞术在医学检验专业实习教学中的应用[J].安徽卫生职业技术学院学报,2018,17(02):104-105+154.
[2]杨红艳,焉力方,王如刚,等.应用流式细胞技术分选单核细胞亚群不同预富集方法的探讨[J].现代检验医学杂志,2018,33(01):128-130.