北京地区犬冠状病毒的分离鉴定及遗传进化分析

论文摘要

采集北京地区宠物医院2～4周龄发生腹泻的幼犬粪便样品,经胶体金和PCR,将其初筛为犬冠状病毒（CCoV）阳性。然后,将其处理液接种于MDCK细胞和CRFK细胞,进行连续传代培养,出现特征性细胞病变。通过形态学观察、RT-PCR鉴定、间接免疫荧光试验,证明该分离株为犬冠状病毒,遂将其命名为CCoV BJ02株。针对M基因通过RT-PCR法鉴定分离株的基因型,证明其为CCoV-Ⅱ型。Reed-Muench法测得CCoV BJ02株的TCID50为10–5.2/100 L。通过绘制一步生长曲线发现,该病毒在48小时左右收毒效果最好。遗传进化分析表明,CCoV BJ02株与日本分离株CCoV fc1株位于同一分支中,同源性最高,有较近亲缘关系。上述研究结果为深入了解北京地区CCoV的流行情况,给犬冠状病毒病的诊断、防治及后续研究奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 细胞及主要试剂
•   1.2 粪样的采集及处理
•   1.3 病毒的分离、传代及滴度测定
•   1.4 病毒的鉴定
•     1.4.1 病毒的电镜观察
•     1.4.2 间接免疫荧光试验
•     1.4.3 病毒的基因型鉴定
•   1.5 一步生长曲线的测定
•   1.6 病毒3’端序列的扩增及遗传进化分析
•     1.6.1 引物设计
•     1.6.2 PCR扩增
•     1.6.3 克隆测序及遗传进化分析
• 2 结果
•   2.1 病毒分离培养
•   2.2 电镜观察
•   2.3 基因型鉴定
•   2.4 间接免疫荧光试验结果
•   2.5 一步生长曲线的测定
•   2.6 遗传进化分析
•     2.6.1 分离株3′端序列扩增
•     2.6.2 遗传进化分析
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王静,秦彤,由欣月,刘畅,史利军,梁琳,李金祥,崔尚金

关键词: 犬冠状病毒,分离鉴定,进化分析

来源: 中国兽医科学 2019年01期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,中国农业科学院

基金: 国家“十三五”重点研发计划项目(2016YFD0501003,2017YFD0501603),中国农业科学院创新工程项目(ASTIPIAS15),中国农业科学院基本科研业务费(2018-YWF-YTS-16)

分类号: S852.655

DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0011

页码: 92-98

总页数: 7

文件大小: 1878K

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