导读:本文包含了黑色素基因克隆论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:玉米弯孢叶斑病菌,强致病力菌株,LNC,弯孢叶斑病
黑色素基因克隆论文文献综述
吕宾,夏淑春,张茹琴,王麒然,鄢洪海[1]（2015）在《玉米弯孢叶斑病菌(Curvlaria lunata)漆酶的致病性、基因克隆与黑色素合成相关性分析》一文中研究指出玉米弯孢菌叶斑病是玉米上的重要叶部病害,曾经造成过玉米严重减产,因此,研究其致病机制和建立行之有效的防控技术是生产上需要解决的关键问题。本实验室之前的研究证实玉米弯孢叶斑病菌在活体外、离体叶片及愈伤组织中均可分泌一系列的细胞壁降解酶:多聚半乳糖醛酸酶(PG)、果胶甲基半乳糖醛酸酶(PMG)、漆酶、纤维素酶(Cx)和β-葡萄糖苷酶。尤其是弯孢菌对玉米愈伤组织的侵染致病过程中,产生的漆酶活性是其他酶活性的1.09~7.3倍,且证实以木质素为诱导产生的细胞壁降解酶对寄主组织的浸解能力最强,引起了我们的特别关注。为此,我们进一步做了漆酶活性与弯孢叶斑病菌菌株致病力相关性分析,结果表明:弯孢叶斑病菌强致病力菌株LNC0907产生的漆酶活性显着高于弱致病力菌株LNC1403,接种自交系黄早四植株后弯孢叶斑病的病情指数也存在显着差异,且漆酶活性与玉米弯孢叶斑病病情指数之间存在密切相关性(r=0.958),以及抗性越弱的玉米品系诱导病菌漆酶活性提高也显着。根据GenBank上已登录真菌漆酶基因氨基酸序列的保守区域设计兼并引物,成功克隆到玉米弯孢叶斑病菌强致病力菌株LNC0907的两个漆酶同源基因片段(593 bp)。推导其相应氨基酸序列进行比对分析,分别与棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)和尖孢镰刀菌(F.oxysporum)漆酶基因的序列同源性为74%和73%,为利用RACE技术克隆基因全长cDNA及进行基因的表达特性和功能鉴定等研究奠定了基础。做玉米弯孢菌黑色素合成基因PKS、Brn1的qRT-PCR表达与病菌漆酶活性相关性,结果表明黑色素合成基因PKS、Brn1的瞬时表达与漆酶活性呈正相关,初步判断漆酶与玉米弯孢菌黑色素合成有关。(本文来源于《植物病理学研究进展——中国植物病理学会第十二届青年学术研讨会论文选编》期刊2015-10-23）
林宇纾,蒋恒洁,杨丰硕,崔奎青,石德顺[2]（2015）在《水牛黑色素皮质素1受体基因克隆、生物信息学分析及表达模式研究》一文中研究指出本试验旨在对水牛黑色素皮质素1受体(MC1R)基因进行克隆、生物信息学分析及表达模式研究。参考牛MC1R基因(GenBank登录号:JN123363.1)序列设计引物,以本地沼泽水牛、白沼泽水牛、摩拉水牛和黄牛基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增克隆MC1R基因片段并进行测序分析。运用QRT-PCR方法检测摩拉水牛、沼泽水牛、白沼泽水牛和黄牛皮肤组织中MC1R基因的表达模式,并通过Western blotting方法检测沼泽水牛和白沼泽水牛MC1R基因的蛋白表达差异。结果表明,应用PCR方法成功克隆了水牛MC1R基因,其编码区全长954bp,共编码317个氨基酸。测序分析后发现沼泽水牛、白沼泽水牛、摩拉水牛和黄牛MC1R基因的核苷酸序列和氨基酸序列相似性很高。沼泽水牛与白沼泽水牛在476、618、881、930和931bp位点上分别发生T→C、G→C、G→A、G→A和A→G突变,导致了沼泽水牛和白沼泽水牛第159位氨基酸由丝氨酸变成苯丙氨酸,第310位氨基酸由谷氨酸变成丙氨酸,第294位氨基酸由天冬氨酸变成丙氨酸,发生了非同义突变。QRT-PCR结果发现,MC1R基因在摩拉水牛、沼泽水牛和黄牛皮肤组织中的相对表达量均显着高于白沼泽水牛(P<0.05);Western blotting分析结果显示,沼泽水牛皮肤组织中MC1R蛋白的表达量高于白沼泽水牛。综上所述,白沼泽水牛MC1R基因的编码区发生氨基酸位点突变,且相对表达量和蛋白表达量均低于沼泽水牛,推测此为白沼泽水牛体内合成的黑色素缺失而导致毛色白化的主因。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2015年10期）
宋娜娜[3]（2015）在《企鹅珍珠贝Creb基因克隆分析及黑色素合成抑制剂和增强剂对幼贝生长性状影响的研究》一文中研究指出企鹅珍珠贝是培育优质海水珍珠的大型育珠母贝,外壳一致的黑色,其黑色素的表达水平可影响珍珠质的色泽,进而影响珍珠质量。本研究首次半定量分析了黑色素合成相关基因Tyr,Creb,Cdk2,Pax3,Sox10,Bcl-2在企鹅珍珠贝各组织中的表达,克隆了企鹅珍珠贝Creb基因c DNA序列全长,初步研究了黑色素合成的增强剂和抑制剂对企鹅珍珠贝生长性状的影响,结果如下:1、采用半定量分析技术初步研究了黑色素合成通路中的调控基因Tyr,Creb,Cdk2,Pax3,Sox10,Bcl-2在企鹅珍珠贝外套膜、鳃、闭壳肌、消化盲囊、足、精巢、卵巢7个组织中的表达。半定量结果显示:Tyr基因在外套膜和精巢中表达量最高,鳃、闭壳肌卵巢中也有表达,初步判定Tyr基因与珍珠层成色有关。Bcl-2在外套膜、闭壳肌、和精巢中高表达,消化盲囊和卵巢中没有表达。Creb在各个组织中均有表达,但有差异,在消化盲囊、足、精巢和卵巢中表达量较高。Cdk2在消化盲囊和精巢中表达量较高,其他5个组织中表达较低。Pax3只在足组织中表达,Sox10在鳃和消化盲囊中表达量较高,精巢和卵巢中有少量表达。2、采用RACE-PCR技术首次从企鹅珍珠贝中克隆了Creb基因的全长cDNA序列:基因的cDNA全长为1484bp,开放阅读框长为1071 bp,编码356个氨基酸。该基因的氨基酸序列中有一个bZIP结构域位于278~341氨基酸残基处,存在4个蛋白结合位点,分别在1,253~254,273,356氨基酸残基处,1个多聚核苷酸结合位点,位于296氨基酸处。企鹅珍珠贝的Creb与太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)、近江牡蛎(Crassostrea ariakensis)、欧洲牡蛎(Ostrea edulis)氨基酸序列的同源性分别为46%、45%、46%;与其它软体动物如静水椎实螺(Lymnaea stagnalis)、海兔(Aplysia californica)光滑双脐螺(Biomphalaria glabrata)的同源性分别是50%、33%、30%。3、不同浓度的黑色素合成抑制剂熊果苷和增强剂丙戊酸分别处理1月龄的企鹅珍珠贝幼贝,处理不同时间后,在实验室养殖,观察其壳色的变化,同时分析处理方式对企鹅珍珠贝的壳长(SL)、壳高(SH)、壳宽(SW)的影响。结果发现:不同浓度和不同处理时间的熊果苷处理组的幼贝壳长、壳高、壳宽叁个指标增长显着高于对照组,丙戊酸处理组略高于对照组;处理组和对照组幼贝前90天和前150天SL、SH、SW增长较快,但在养殖5个月后即150天-200天,处理组和对照组SL、SH、SW增长变慢。结果表明:两种处理剂对幼贝的SL,SH,SW无抑制影响,反而比对照组长得快。实验发现熊果苷处理组有壳色明显变浅个体,丙戊酸处理组有明显壳色变深的个体,结果表明:熊果苷有使企鹅珍珠贝生长过程中壳色变浅的作用,丙戊酸有使壳色变深的作用。熊果苷在浓度为0.4mM、2mM和4mM,丙戊酸浓度在1mM、5mM、10mM时对企鹅珍珠贝幼贝的SL、SH、SW生长无抑制作用。(本文来源于《广东海洋大学》期刊2015-06-01）
程炜轩,许国焕,熊达,张丽,吴清洋[4]（2014）在《黄颡鱼黑色素细胞原代培养及迁移相关基因克隆分析》一文中研究指出黑素皮质素受体-1(MC1R)在鱼体中对黑色素细胞的分化及迁移起主要的调控作用,而且在神经系统和免疫系统中均表现出重要的生理功能。本研究对黄颡鱼表皮黑色素细胞的培养条件进行探索,并在此基础上对MC1R基因进行克隆,为后续研究黄颡鱼黑色素异常的细胞及分子机理研究提供基础。结果表明,黄颡鱼表皮黑色素细胞在27℃培养条件下,72 h开始贴壁生长,培养基中添加20%小牛血清培养效果比添加10%小牛血清好。此外,我们对黄颡鱼MC1R基因进行克隆。MC1R基因克隆方面,黄颡鱼MC1R基因全长为936 bp,编码312个氨基酸,与剑尾鱼(Xiphophorus maculates)、孔雀鱼(Poecilia reticulata)、条斑星鲽(Verasper moseri)、海鲈(Dicentrarchus labrax)、大菱鲆(Psetta maxima)等5种鱼类MC1R基因的同源性分别为97%、96%、90%、90%、90%,系统分析结果显示,黄颡鱼MC1R基因在进化树上的位置与黄颡鱼的分类所处位置基本吻合。黄颡鱼表皮黑色素细胞原代培养的条件为:27℃,添加20%小牛血清,所克隆基因为黄颡鱼MC1R基因。本研究为后续研究黄颡鱼黑色素异常的细胞及分子机理研究提供基础。(本文来源于《生态毒理学报》期刊2014年06期）
程炜轩,许国焕,熊达,张丽,吴清洋[5]（2013）在《黄颡鱼黑色素细胞原代培养及迁移相关基因克隆分析》一文中研究指出黄颡鱼是一种优质养殖鱼类,养殖效益高。然而,在养殖过程中,容易出现黑色素缺失这种体色异常的现象,严重影响黄颡鱼的外观及商品价值。为阐明鱼类黑体色变异的细胞及分子调控机理,本研究对黄颡鱼表皮黑色素细胞的培养条件进行探索,并对黑色素迁移相关的重要基因黑素皮质素受体(MC1R)进行克隆。结果表明,黄颡鱼表皮黑色素细胞在27℃培养条件下,72h开始贴壁生长,144d形成单细胞层,培养基中添加20%小牛血清培养效果比添加10%小牛血清好。MC1R基因克隆方面,黄颡鱼MC1R基因全长为969bp,编码312个氨基酸,与剑尾鱼(Xiphophorus maculates)、孔雀鱼(Poecilia reticulata)、条斑星鲽(Verasper moseri)、海鲈(Dicentrarchus labrax)、大菱鲆(Psetta maxima)等5种鱼类MC1R基因的同源性分别为97%、96%、90%、90%、90%,系统分析结果显示,黄颡鱼MC1R基因在进化树上的位置与黄颡鱼的分类所处位置基本吻合。(本文来源于《第九届世界华人鱼虾营养学术研讨会论文摘要集》期刊2013-11-12）
林育泉[6]（2012）在《小鼠Mageb18基因克隆、表达分析及其调节黑色素瘤B16-F0细胞恶性表型的初步研究》一文中研究指出黑色素瘤相关抗原（melanoma-associated antigens，MAGE)是一个多成员基因家族。目前在人、大鼠和小鼠中已经发现的MAGE基因约100个左右。所有的MAGE基因其蛋白序列中都有一个含200个氨基酸左右的结构域，称为MAGE同源结构域（MHD）。根据MAGE基因序列保守性的不同，这些基因可以分为多个不同的亚家族。另外，根据表达谱的不同，MAGE基因还可以分为I型和II型两类。I型MAGE基因由MAGE-A、-B和-C叁个亚家族组成，其他的亚家族则都属于II型MAGE基因。已经发现，I型MAGE基因在许多不同类型的肿瘤组织和细胞中表达，但是在正常组织中只有睾丸、卵巢和胎盘表达。正好相反，II型MAGE基因却在许多正常组织中广谱表达。因为睾丸、卵巢和胎盘中HLA分子的表达水平很低，因此I型MAGE基因独特的表达特点使得它们成为肿瘤免疫治疗的理想靶标。目前，针对I型MAGE基因已经开发了许多不同类型的肿瘤疫苗，有的甚至已经开始进入临床试验。但是，由于对I型MAGE基因的表达谱及功能的研究相对较少，因此这在很大程度上限制了MAGE肿瘤疫苗的推广和应用。虽然有研究表明，I型MAGE基因在正常组织中的表达是睾丸特异的，但是我们前期利用表达序列标签（expressed sequence tag，EST）序列都对应于小鼠Mageb18基因。据此，我们假设认为，小鼠Mageb18基因在正常组织中的表达不是睾丸特异的，而是广谱的。本课题的目的就是克隆小鼠的Mageb18基因，分析它的表达特征以及调控机制，并研究它在调节肿瘤细胞恶性表型方面的功能以及相关分子机制。为此，我们首先借助生物信息学工具分析和预测了Mageb18基因的结构和功能。结果表明，小鼠Mageb18基因全长2160bp，由5个外显子组成。它最大的开放阅读框为984bp，编码蛋白含327个氨基酸，蛋白的理论分子量和等电点分别为37203.31Da和6.43。MAGEB18蛋白含有一个MAGE N-末端结构域和一个保守的MHD，分别位于Arg~3–Asp82和Ile~(91)–Ala~(289)。亚细胞定位预测表明，MAGEB18蛋白不含亚细胞定位序列，但是可能存在8个磷酸化位点和一个N-豆蔻酰化位点，提示MAGEB18可能是一个胞浆蛋白，并且存在翻译后修饰加工。以前的研究表明，I型MAGE基因主要定位在X染色体，而且同一亚族的基因往往形成相对独立的基因簇。染色体定位分析发现，小鼠Mageb18基因也定位在X染色体的C2-C3区域，并与其他多个MAGE-B亚家族的基因形成基因簇。而且系统进化树分析也表明，Mageb18基因与MAGE-B亚家族基因间的亲缘关系最近。此外，基因同源搜索则发现，Mageb18基因在高等哺乳动物中高度保守，而在哺乳动物以外的物种中不存在。这些结果集中提示，Mageb18基因是一个在高级哺乳动物中高度保守的I型MAGE基因。接下来，RT-PC分析Mageb18基因的表达谱发现，小鼠Mageb18基因在正常组织中的表达确实是非睾丸特异的。除了睾丸以外，它在胃、大肠、小肠、脾脏、淋巴结、骨髓和外周淋巴细胞都有较高水平表达。另外，我们发现Mageb18基因在小鼠睾丸中的表达是发育相关的。它在出生后第1天的睾丸中开始表达，而且随着时间的进行它的表达逐渐增高，在第21天左右达到最高，此后一直维持在较高的表达水平，提示Mageb18可能与睾丸的发育和精子的形成有关。继续分析Mageb18基因在小鼠细胞株中的表达谱发现，Mageb18在成纤维瘤细胞L929、黑色素瘤细胞B16-F0、肝癌细胞MM45T.Li、乳腺癌细胞4T1、胚胎成纤维细胞NIH3T3和巨噬细胞RAW264.7中表达，而在肝癌细胞H22和脑胶质瘤细胞C6中不表达。但是DNA甲基转移酶抑制剂5-氮-2’-脱氧胞苷和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A能够激活Mageb18阴性细胞H22和C6中Mageb18基因的表达，提示表观遗传机制调节Mageb18的转录激活。然后，利用Western印迹分析HEK293中瞬时表达的HA-MAGEB18融合蛋白表明，小鼠Mageb18基因编码的蛋白大小约为46kDa。进一步分析小鼠正常组织中内源性MAGEB18蛋白则发现，MAGEB18蛋白在小鼠的胃、大肠、小肠、脾脏、淋巴结、骨髓和血液淋巴细胞中表达，而在脑、心脏、肺、肝脏和肾脏中不表达，提示在正常组织中MAGEB18蛋白的表达谱与其mRNA的表达谱完全一致。另外，在组织中全长MAGEB18蛋白大小也为46kDa左右，但是它可能存在翻译后的剪切加工，从而产生一条大小约为26kDa的片段。奇怪的是，小鼠细胞株中的内源性MAGEB18蛋白只存在大小为46kDa一种形式。这些结果提示，MAGEB18蛋白在小鼠组织和细胞株中可能存在不同的翻译后修饰，从而导致形成大小不同的蛋白产物。利用间接免疫荧光分析MAGEB18蛋白的亚细胞定位表明，小鼠MAGEB18蛋白主要定位在细胞浆中，但在不同细胞株的细胞核里也有或多或少的定位。免疫组化分析进一步发现，在睾丸组织中MAGEB18蛋白主要在具有增殖能力的初级和次级精原细胞的细胞浆中表达，但是在成熟的精子中不表达。这些结果提示，MAGEB18蛋白是一个胞浆蛋白，它可能与细胞的增殖表型有关。接下来，为了阐明Mageb18基因的功能，我们通过siRNA技术干扰内源性MAGEB18基因的表达，定量RT-PCR和Western印迹分析表明siRNA能够有效抑制细胞中Mageb18基因在mRNA和蛋白水平的表达。随后我们通过生长曲线分析、平板克隆形成实验以及皮下成瘤实验证明，干扰Mageb18基因的表达能够显着抑制B16-F0细胞和4T1细胞体外和体内的增殖。Annexin-V-APC/7-AAD细胞凋亡分析发现，干扰Mageb18能够显着增强B16-F0细胞的凋亡。Western印迹分析则表明，这个细胞凋亡增强的过程可能与TP53通路有关，因为干扰MAGEB18蛋白的表达能够提高TP53的蛋白水平，同时激活TP53的靶基因p21和Bax。最后，进一步分析Mageb18基因在小鼠细胞株中的表达发现，MAGEB18蛋白在高成瘤和高转移的肿瘤细胞株，包括肿瘤干细胞和前癌干细胞中表达，提示Mage18基因不仅与细胞增殖表型有关，而且可能还调节细胞的转移特性。为此，我们通过划痕实验、基质胶侵袭实验以及体内肺转移动物模型分析了Mageb18基因对B16-F0细胞运动性的影响。结果表明，干扰MAGEB18蛋白的表达能够显着抑制B16-F0细胞的迁移、侵袭和转移能力。基质金属蛋白酶家族在肿瘤的迁移和转移中扮演重要角色。我们通过RT-PCR分析发现，B16-F0细胞表达多种不同类型的MMPs。但是，干扰Mageb18基因以后只能特异性地下调MMP2和MMP9的表达，而其他MMP的表达却没有明显的差异。这些结果提示，Mageb18基因确实可以通过MMP2和MMP9调节B16-F0细胞的迁移、侵袭和转移。总之，我们的工作首次证明小鼠Mageb18基因一个非睾丸特异表达的I型MAGE基因。我们的结果提示，某些I型MAGE基因，至少是Mageb18基因的表达并不像传统观点所认为的那样是睾丸特异的，而是广谱的。由于MAGE家族基因是目前肿瘤疫苗研发中使用最多的靶标，因此我们的结果表明，以MAGE基因为靶标开发肿瘤疫苗之前，为了提高疫苗的有效性和安全性，非常有必要对该MAGE基因在正常组织中的表达谱和功能进行深入的研究。(本文来源于《南开大学》期刊2012-05-01）
许晓东,张德意,朱冠保,张丽芳[7]（2007）在《人乳头瘤病毒-黑色素瘤抗原细胞毒T淋巴细胞表位嵌合基因克隆及其表达》一文中研究指出目的构建人乳头瘤病毒(HPV)6b型结构蛋白L1-黑色素瘤抗原(MAGE-A3)细胞毒T淋巴细胞(CTL)表位嵌合基因并表达目的蛋白,为下一步制备HPV6bL1/MAGE-A3-CTL嵌合疫苗提供理论基础和实验依据。方法将MAGE-A3 CTL表位基因插入到UPV6bL1的羧基端序列中,将目的基因连入真核表达转移载体pFastBac~(TM)1,构建重组质粒pFastBac~(TM)1/HPV6bL1/MAGE- A3-CTL,转化DH10Bac感受态细胞,获得重组杆状病毒Bacmid/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL;将重组杆状病毒转染sf-9昆虫细胞表达嵌合目的蛋白,并经SDS-Page电泳、考马斯亮蓝染色及Western blot分析鉴定。结果成功构建了重组质粒pFastBac~(TM)1/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL,获得了重组杆状病毒Bacmid/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL,并在真核细胞sf-9昆虫细胞中成功表达了嵌合目的蛋白。结论通过基因克隆方法能成功的将MAGE-A3 CTL表位基因插入到HPV6bL1基因中,并能在真核细胞表达系统中表达出嵌合目的蛋白,为进一步制备HPV6bL1/MAGE-A3-CTL嵌合疫苗提供理论基础和实验依据。(本文来源于《中华实验外科杂志》期刊2007年08期）
庄然,欧阳为明,谢鑫,张新海,蓝天[8]（2005）在《一种新的黑色素瘤相关抗原MAGE-C2的基因克隆及表达》一文中研究指出目的：克隆人黑色素瘤相关抗原MAGE-C2的cDNA,构建真核、原核表达载体并转入相应细胞获得表达。方法：采用RT-PCR技术,从直肠癌细胞系SW480的总RNA中克隆了MAGE-C2 cDNA序列,并将开放读框分别插入质粒pEGFP-C1和pGEX-4T-3中,获得pEGFP-MAGE-C,2绿色荧光蛋白(GFP)融合表达载体和pGEX-MAGE-C2谷胱甘肽转移酶(GST)融合蛋白表达载体,将pEGFP-MAGE-C2转染293T细胞,观察绿色荧光融合蛋白在细胞中的定位；将pGEX-MAGE-C2转化大肠杆菌B1221株,经IPTG诱导表达GST融合蛋白,并用谷胱甘肽亲和层析法纯化重组蛋白。结果：获得MAGE-C2开放读框并构建表达载体,测序结果与GenBank收录的序列相一致。真核表达载体转染293T细胞后显示MAGE-C2蛋白定位于细胞核；原核重组蛋白大部分以可溶性形式表达,亲和层析后,获得了较高纯度的MAGE-C2-GST融合蛋白。分析显示原核表达GS了融合蛋白的相对分子质量为70000,使用抗GST单克隆抗体进行Westem blot分析证实为目的蛋白。结论：成功的获得MAGE-C2基因,构建了其表达载体并获得表达,为进一步制备MAGE-C2特异性单抗及深入探讨MAGE-C2可能参与肿瘤发生发展的机制提供了重要条件。(本文来源于《中国肿瘤生物治疗杂志》期刊2005年04期）
许晓东,朱冠保,张丽芳,张德意,张启瑜[9]（2005）在《人乳头瘤病毒-黑色素瘤抗原CTL表位嵌合基因克隆及其表达》一文中研究指出目的构建人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)6b型结构蛋白L1-黑色素瘤抗原 (Melanoma antigen A3,MAGE-A3)细胞毒T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位的嵌合基因,通过基因克隆并在昆虫细胞中表达,为进一步研究其免疫原性、免疫学效应及制备HPV6bL1/ MAGE-A3-CTL嵌合疫苗治疗胃肠道肿瘤提供理论基础和实验依据。方法将MAGE-A3 CTL表位基因插入到HPV6bL1的羧基端序列中,通过TA克隆将目的基因(本文来源于《2005年浙江省外科学术会议论文汇编》期刊2005-11-01）
李林,欧阳为明,陈丽华,庄然,谢鑫[10]（2004）在《人黑色素瘤抗原MAGE-A10的基因克隆及原核表达》一文中研究指出目的 :扩增和克隆人黑色素瘤抗原MAGE A1 0(melanomaantigenA1 0 )cDNA ,构建原核表达载体并在大肠杆菌表达 .方法 :从人黑色素瘤细胞系LiBr中提取总RNA ,用RT PCR从中扩增出MAGE A1 0cDNA ,插入载体pMD1 8 T中 .测序正确后 ,克隆至原核表达载体pGEX 4T 3中 ,构建重组表达载体pGEX 4T 3 MAGE A1 0 ,转化大肠杆菌BL2 1株进行表达 .经IPTG诱导表达 ,谷胱甘肽亲和层析获得重组目的蛋白 .结果 :成功获得MAGE A1 0编码基因并构建原核表达载体 ,测序结果与GenBank收录序列相一致 .可以获得部分可溶性的原核重组蛋白 ,经亲和层析和分析 ,证实融合蛋白占总量的 5 8.9% .SDS PAGE分析其相对分子质量 (Mr)为 6 70 0 0 ,Westernblot证实为目的蛋白 .结论 :成功获得MAGE A1 0cDNA ,构建得原核表达载体并获得高效表达 .本研究为制备MAGE A1 0mAb及研究MAGE A1 0可能参与肿瘤发生发展的机制奠定了基础 .(本文来源于《第四军医大学学报》期刊2004年09期）
黑色素基因克隆论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本试验旨在对水牛黑色素皮质素1受体(MC1R)基因进行克隆、生物信息学分析及表达模式研究。参考牛MC1R基因(GenBank登录号:JN123363.1)序列设计引物,以本地沼泽水牛、白沼泽水牛、摩拉水牛和黄牛基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增克隆MC1R基因片段并进行测序分析。运用QRT-PCR方法检测摩拉水牛、沼泽水牛、白沼泽水牛和黄牛皮肤组织中MC1R基因的表达模式,并通过Western blotting方法检测沼泽水牛和白沼泽水牛MC1R基因的蛋白表达差异。结果表明,应用PCR方法成功克隆了水牛MC1R基因,其编码区全长954bp,共编码317个氨基酸。测序分析后发现沼泽水牛、白沼泽水牛、摩拉水牛和黄牛MC1R基因的核苷酸序列和氨基酸序列相似性很高。沼泽水牛与白沼泽水牛在476、618、881、930和931bp位点上分别发生T→C、G→C、G→A、G→A和A→G突变,导致了沼泽水牛和白沼泽水牛第159位氨基酸由丝氨酸变成苯丙氨酸,第310位氨基酸由谷氨酸变成丙氨酸,第294位氨基酸由天冬氨酸变成丙氨酸,发生了非同义突变。QRT-PCR结果发现,MC1R基因在摩拉水牛、沼泽水牛和黄牛皮肤组织中的相对表达量均显着高于白沼泽水牛(P<0.05);Western blotting分析结果显示,沼泽水牛皮肤组织中MC1R蛋白的表达量高于白沼泽水牛。综上所述,白沼泽水牛MC1R基因的编码区发生氨基酸位点突变,且相对表达量和蛋白表达量均低于沼泽水牛,推测此为白沼泽水牛体内合成的黑色素缺失而导致毛色白化的主因。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
黑色素基因克隆论文参考文献
[1].吕宾,夏淑春,张茹琴,王麒然,鄢洪海.玉米弯孢叶斑病菌(Curvlarialunata)漆酶的致病性、基因克隆与黑色素合成相关性分析[C].植物病理学研究进展——中国植物病理学会第十二届青年学术研讨会论文选编.2015
[2].林宇纾,蒋恒洁,杨丰硕,崔奎青,石德顺.水牛黑色素皮质素1受体基因克隆、生物信息学分析及表达模式研究[J].中国畜牧兽医.2015
[3].宋娜娜.企鹅珍珠贝Creb基因克隆分析及黑色素合成抑制剂和增强剂对幼贝生长性状影响的研究[D].广东海洋大学.2015
[4].程炜轩,许国焕,熊达,张丽,吴清洋.黄颡鱼黑色素细胞原代培养及迁移相关基因克隆分析[J].生态毒理学报.2014
[5].程炜轩,许国焕,熊达,张丽,吴清洋.黄颡鱼黑色素细胞原代培养及迁移相关基因克隆分析[C].第九届世界华人鱼虾营养学术研讨会论文摘要集.2013
[6].林育泉.小鼠Mageb18基因克隆、表达分析及其调节黑色素瘤B16-F0细胞恶性表型的初步研究[D].南开大学.2012
[7].许晓东,张德意,朱冠保,张丽芳.人乳头瘤病毒-黑色素瘤抗原细胞毒T淋巴细胞表位嵌合基因克隆及其表达[J].中华实验外科杂志.2007
[8].庄然,欧阳为明,谢鑫,张新海,蓝天.一种新的黑色素瘤相关抗原MAGE-C2的基因克隆及表达[J].中国肿瘤生物治疗杂志.2005
[9].许晓东,朱冠保,张丽芳,张德意,张启瑜.人乳头瘤病毒-黑色素瘤抗原CTL表位嵌合基因克隆及其表达[C].2005年浙江省外科学术会议论文汇编.2005
[10].李林,欧阳为明,陈丽华,庄然,谢鑫.人黑色素瘤抗原MAGE-A10的基因克隆及原核表达[J].第四军医大学学报.2004