羊血清中口蹄疫病毒非结构蛋白3A-3B1-3B2抗体ELISA检测方法的建立

论文摘要

为建立检测羊血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的间接ELISA方法,通过优化抗原表达条件,在大肠杆菌原核表达系统中获得了可溶性的3A-3B1-3B2融合蛋白,基于纯化的可溶性融合蛋白建立了口蹄疫病毒非结构蛋白抗体间接ELISA检测试剂盒。该方法对其他相关的羊类病毒病原无交叉反应,其重复性组内与组间变异系数均低于10%,具有良好的重复性。对300份临床血清样品进行检测,与国内市售的口蹄疫非结构蛋白抗体检测试剂盒进行比较,阳性样品符合率为96.67%,阴性样品符合率为94%,总符合率为95.33%。本研究建立的羊血清中口蹄疫病毒3A-3B1-3B2蛋白抗体间接ELISA检测方法,特异性高、敏感性强,操作简单快速,具有较高的应用推广价值。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 目的基因片段的获得
•     1.2.2 目的基因扩增与融合
•     1.2.3 重组蛋白可溶性诱导表达条件的建立
•     1.2.4 重组蛋白3A-3B1-3B2的表达与纯化
•       1.2.4.1 树脂的预处理
•       1.2.4.2 挂柱
•       1.2.4.3 重组蛋白的洗杂和洗脱
•       1.2.4.4 蛋白的收获
•     1.2.5 纯化后蛋白的抗原性分析（Dot-ElISA）检测
•     1.2.6 3A-3B1-3B2抗原的包被和封闭
•     1.2.7 HRP标记兔抗山羊二抗最适工作浓度的确定
•     1.2.8 样品稀释度的确定
•     1.2.9 抗原最佳反应时间选择
•     1.2.10 酶标记二抗的最佳反应时间选择
•     1.2.11 阴阳性临界值的确定
•     1.2.12 特异性试验
•     1.2.13 敏感性试验
•     1.2.14 重复性试验
•     1.2.15 符合性试验
• 2 结果与分析
•   2.1 SDS-PAGE分析
•   2.2 纯化后蛋白的抗原性分析（Dot-ElISA）检测
•   2.3 3A-3B1-3B2抗原最佳包被浓度与兔抗山羊二抗最佳稀释浓度的选择
•   2.4 样品稀释度
•   2.5 待检抗体反应时间选择
•   2.6 酶标二抗反应时间选择
•   2.7 间接ELISA检测方法阴阳性临界值确定
•   2.8 特异性试验
•   2.9 敏感性试验
•   2.10 重复性试验
•   2.11 符合性试验
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 孙雨,宋晓晖,肖颖,王旭,董浩,王睿男,毕一鸣,蒋菲,李晓霞,杨林,王传彬

关键词: 口蹄疫病毒,蛋白,可溶性表达

来源: 畜牧与兽医 2019年10期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 中国动物疫病预防控制中心,重庆动物疫病预防控制中心,北京农学院

基金: 国家重点计划研发项目(2016YFD0501504),现代农业人才支撑计划(2130106-024)

分类号: S852.654

页码: 92-98

总页数: 7

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