近交系五指山小型猪脂肪间充质干细胞分离培养及生物学特性

论文摘要

目的:建立近交系五指山小型猪（inbreed line miniature pig of Wuzhishan,ILMW）脂肪间充质干细胞（adiposederived mesenchymal stem cells,ASCs）体外分离培养和鉴定方法。方法:选取6月龄健康ILMW 3头,从颈部皮下无菌获取脂肪组织约100 g,采用0.1%I型胶原酶消化组织,获得ILMW-ASCs,并进行体外培养和增殖;取第3,5,8,13代细胞进行如下实验:测量细胞大小,观察细胞形态,检测细胞表型、细胞周期、细胞凋亡,并进行细胞诱导分化和绘制细胞增殖曲线。结果:体外分离培养的ILMW-ASCs在体外贴壁,呈成纤维样或旋涡状生长;原代细胞培养36 h出现贴壁,第5天进入对数增殖期,约7 d后80%的细胞汇合。ILMW-ASCs细胞直径及体积分别为（17.00±0.54）μm和（2.58±0.24）×10–9 L。细胞表面抗原CD29,CD44和CD90呈高表达,不同代数之间的差异不明显（均P>0.05）;CD45,CD8a和HLA-DR呈低表达,与第3代相比,随着代数的增加细胞表面抗原的阳性率逐渐增高（均P<0.05）。ILMW-ASCs成脂诱导结果为油红O染色呈阳性;ILMW-ASCs成骨诱导结果为茜素红染色呈阳性。ILMW-ASCs的第13代细胞出现凋亡和衰老,与较低培养代数相比细胞周期S期的比例下降（均P<0.05）。结论:ILMW-ASCs取材方便,贴壁时间早,细胞增殖活跃,传代周期短,传代后能保持稳定的生物学特性,是猪来源ASCs的最佳选择之一,可为大动物疾病模型和组织器官修复的细胞治疗提供候选干细胞来源。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 动物、主要仪器和试剂
•     1.1.1 动物
•     1.1.2 主要仪器
•     1.1.3 试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 脂肪采集
•     1.2.2 ILMW-ASCs分离培养
•     1.2.3 ILMW-ASCs细胞大小测定与计数
•     1.2.4 ILMW-ASCs增殖曲线
•     1.2.5 ILMW-ASCs表面抗原的测定
•     1.2.6 ILMW-ASCs成脂及成骨的诱导分化
•     1.2.7 ILMW-ASCs细胞周期的测定
•     1.2.8 ILMW-ASCs细胞凋亡的测定
•   1.3 统计学处理
• 2 结果
•   2.1 ILMW-ASCs的生长特征
•   2.2 ILMW-ASCs的细胞大小
•   2.3 ILMW-ASCs的生长曲线
•   2.4 ILMW-ASCs的表面抗原
•   2.5 ILMW-ASCs体外诱导的细胞分化
•   2.6 细胞周期
•   2.7 DAPI染色和β-半乳糖苷酶染色实验
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 黄邓高,曹卉,王顺兰,郑琳麟,陈宗文,文小红,张淑芳,向杨,高元慧

关键词: 近交系五指山小型猪,脂肪间充质干细胞,分离培养,生物学特性,组织修复

来源: 中南大学学报(医学版) 2019年03期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 中南大学湘雅医学院附属海口医院中心实验室,中南大学湘雅医学院附属海口医院泌尿外科

基金: 海南省自然科学基金(20168317,20168315),海南省医药卫生科研项目[(2014)51号-自筹47,(2014)51号-46],海口市人民医院院级课题项目(2015-YNJ-03-036)~~

分类号: R329.2

页码: 297-306

总页数: 10

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