小麦内质网氧化还原酶在毕赤酵母中的表达

论文摘要

为开发健康天然的新型酶制剂型面粉改良剂,利用毕赤酵母重组表达了小麦内质网氧化还原酶1(wEro1);将wero1基因亚克隆至毕赤酵母表达载体pPICZα A,实现了wEro1在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中的分泌表达,优化诱导表达条件后wEro1的产量可达(53.24±2.11) U/mL;应用硫酸铵沉淀和阴离子交换层析纯化了wEro1,对电泳纯wEro1进行酶学性质研究.结果表明:wEro1具有催化二硫键异构酶(PDI)的巯基氧化活性,且最适pH为7.5,最适温度为30℃;在低温和中性pH条件下,该酶具有较好的稳定性.将毕赤酵母重组wEro1添加到面粉中,考察其对面粉加工品质的影响,发现毕赤酵母重组wEro1改善面粉粉质特性的能力比大肠杆菌重组wEro1更强.

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与试剂
•     1.1.1 宿主菌株与质粒
•     1.1.2 主要试剂与仪器
•   1.2 方法
•     1.2.1 重组wEro1的亚克隆
•     1.2.2 重组wEro1表达载体的构建和鉴定
•     1.2.3 重组毕赤酵母菌株的构建及鉴定
•     1.2.4 重组wEro1的诱导表达
•     1.2.5 毕赤酵母诱导表达产物的Western Blot鉴定
•     1.2.6 重组wEro1的活性测定
•     1.2.7 重组wEro1的诱导表达条件优化
•     1.2.8 重组wEro1的分离纯化
•     1.2.9 重组wEro1的酶学特性分析
•     1.2.10 重组wEro1对面粉粉质特性的影响
• 2 结果与讨论
•   2.1 wero1基因的表达载体的构建
•   2.2 重组毕赤酵母菌株的鉴定
•   2.3 毕赤酵母诱导表达产物的Western Blot鉴定
•   2.4 重组wEro1的表达条件优化
•   2.5 重组wEro1的分离纯化与活性测定
•   2.6 重组wEro1的酶学特性
•     2.6.1 最适pH和pH稳定性
•     2.6.2 最适温度和温度稳定性
•   2.7 重组wEro1对面粉粉质特性的影响
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 胡松青,李旺,陈煜,侯轶

关键词: 小麦内质网氧化还原酶,重组蛋白,巯基氧化,面粉粉质

来源: 华南理工大学学报(自然科学版) 2019年08期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅱ辑,工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 华南理工大学食品科学与工程学院,广东省食品工业研究所有限公司,华南理工大学轻工科学与工程学院

基金: 国家自然科学基金资助项目(31471691,31771906)~~

分类号: TS201.2;TS211.4

页码: 57-63+70

总页数: 8

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