导读:本文包含了酪蛋白调控序列论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:蛋白,基因,序列,山羊,乳腺,乳白,转基因。
酪蛋白调控序列论文文献综述
张莉,李庆章,陈建晖,高学军,田雷[1]（2008）在《牛αS1-酪蛋白5′调控序列驱动人α-LA基因与LacZ基因在牛乳腺上皮细胞中的表达》一文中研究指出将牛αS1-酪蛋白5′调控序列约1.2kb的片段,连接到含SV40启动子调控下β-半乳糖苷酶基因(LacZ)的PSV载体上,做为启动子,在其后连接0.76kb的人α-乳白蛋白基因(α-LA),构建真核表达载体αS1-LA-psv.采用组织块接种法,培养奶牛乳腺上皮细胞,经传代纯化后,对细胞接种存活率、群体倍增时间、生长曲线、形态学等生物学性状进行检测,用免疫荧光细胞染色法对培养的奶牛乳腺上皮细胞进行角蛋白18鉴定,结果表明,成功建立奶牛乳腺上皮细胞系,细胞传至20代以上时仍保持旺盛的增殖活力.将构建的真核表达载体αS1-LA-psv转染奶牛乳腺上皮细胞,培养24～120h均检测到了β-半乳糖苷酶的表达;培养72h检测到细胞中人α-乳白蛋白的表达,表达量约为0.64g/L.实验结果表明,建立的奶牛乳腺上皮细胞系具有外源基因表达活性,得到的牛αS1-酪蛋白5′调控序列能作为启动子指导外源基因的表达,构建的真核表达载体能在体外培养的牛乳腺上皮细胞中同时表达人α-乳白蛋白和β-半乳糖苷酶.(本文来源于《生物化学与生物物理进展》期刊2008年12期）
张莉,李庆章,田雷[2]（2008）在《牛αs1-酪蛋白5′调控序列调控人α-乳白蛋白DNA序列真核表达载体的构建》一文中研究指出牛乳和人乳在组成上是有差别的,人乳蛋白主要是乳清蛋白,约占总蛋白的70%,而牛乳中的蛋白主要是酪蛋白约占总蛋白的78.8%,乳清蛋白含量低,只占总蛋白的21.2%。所以,改良牛乳的蛋白组成和含量,使之更接近于人乳,会提高牛乳的营养价值。(本文来源于《全国动物生理生化第十次学术交流会论文摘要汇编》期刊2008-07-01）
田雷,李庆章,张莉[3]（2007）在《牛αS1酪蛋白5′调控序列驱动报告基因LacZ在奶山羊乳腺上皮细胞中的表达》一文中研究指出αS1酪蛋白是牛乳中含量最高的酪蛋白.本研究克隆了牛αS1酪蛋白5′调控序列约1.2kb的片段,应用基因重组技术将其插入lacZ基因上游,构建真核表达载体gαs1p-psv.胶原酶消化法对奶山羊乳腺上皮细胞进行了分离培养,并用免疫荧光法鉴定了乳腺上皮细胞.将重组载体转染奶山羊乳腺上皮细胞,在细胞培养液中,转染后24h可以检测到lacZ基因的表达,之后表达水平有逐渐升高的趋势,72h开始降低,144h降到最低;在细胞破碎液中,转染后24h表达水平最高,之后表达水平有逐渐降低的趋势,144h降到最低.转染细胞的第1代表达水平最高,随细胞传代表达水平降低,传到第3代时基本检测不到表达产物.对转染后的细胞进行了β-半乳糖苷酶原位细胞染色.实验证明,得到的牛αS1酪蛋白5′调控序列能指导外源基因在奶山羊乳腺上皮细胞中表达.(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2007年09期）
张玉峰[4]（2006）在《增强子对提高山羊β-酪蛋白调控序列指导人乳铁蛋白基因在转基因动物乳腺中特异性表达水平的研究》一文中研究指出人乳铁蛋白(human lactoferrin)又称乳转铁蛋白,是人乳汁中主要的铁结合蛋白,广泛分布于多种组织、体液中,具有提高免疫力,抗菌抑菌,参与铁代谢等多种生物学功能,具有广泛的应用前景。从理论上说动物乳腺组织是表达人乳铁蛋白最为理想的器官。然而,人乳铁蛋白基因在动物乳腺中高效表达的报道较少。因此,如何提高人乳铁蛋白基因在动物乳腺中的表达水平是这方面研究的关键。我们在以前实验研究的基础上,选用山羊β-酪蛋白启动子、外显子1、外显子2和内含子1共6.7kb大小的序列作为人乳铁蛋白乳腺特异性表达的调控序列。用PCR的方法从质粒载体上扩增出增强子DNA片段,通过xhol酶切PL18获得hLTF cDNA片段,共同构建了由Chickenβ-globin+山羊β-酪蛋白5`端+增强子+hLTF cDNA+山羊β-酪蛋白3`端组成的人乳铁蛋白基因乳腺特异表达载体pCL25。通过制备转基因小鼠验证所获得的乳腺特异性表达载体的表达特性。将构建的pCL25质粒用sal1与not1限制性内切酶消化,回收和纯化约18kb的表达载体部分,将回收的片段通过显微注射法导入小鼠受精卵原核,结果获得29只G0代小鼠,经PCR检测,其中1只小鼠整合有外源基因(2~#)。转基因小鼠与正常小鼠交配,出生小鼠经PCR筛选,获得F1代转基因小鼠4只(2公,2母),F2代转基因小鼠8只(母)。采用酶联免疫法(ELISA assay)和蛋白印迹(Western Blot)对原代转基因小鼠及其后代的乳汁进行目的蛋白的表达检测。ELISA检测结果表明在转基因小鼠G0和F1、F2代乳汁中人乳铁蛋白表达均为阳性,表达量约在6～8g/L。Western Blot结果表明,转基因小鼠的乳汁中所表达的目的蛋白的分子量大小约为60kDa,小于(本文来源于《扬州大学》期刊2006-05-01）
刘建[5]（2003）在《在山羊胎儿成纤维细胞中以山羊β-酪蛋白基因的调控序列为同源序列进行基因打靶的初步研究》一文中研究指出本研究是利用山羊β-酪蛋白基因的调控序列作为同源序列，以neo基因和HSV—tk基因分别作为正反双向药物筛选基因，共同构建成以乳蛋白基因为靶位点的基因打靶构件；以山羊胎儿成纤维细胞为基因打靶的宿主细胞，以获得定点重组的成纤维细胞。 以质粒pNe为模板，利用PCR法扩增出我们所需的两侧带有loxP位点的neo基因，并将之插入带有山羊酪蛋白调控序列的质粒pBC_1中，得到重组质粒PBN。为获得适当大小的基因组同源片断作为基因打靶的同源序列，从质粒pBN中的酪蛋白3’端调控序列中切除4.8kb的下游部分，保留长约1.5kb的片断，得到重组质粒pBC_1-S。从质粒PGH-4中取3.0 kb的HSV-tk基因片断，将之插入到质粒PBN的酪蛋白调控序列外侧，最终得到打靶载体pTarget1。 取30日龄的山羊胎儿，分离并培养获得16个细胞系。利用Sry-PCR法鉴定细胞系的性别，得到了2个雌性细胞系。 用质粒pBN电转染山羊胎儿成纤维细胞，经药物G418筛选获得对G418有抗性作用的胎儿成纤维细胞GFFC14-pBN。用线性化的Ptarget1载体电转染山羊胎儿成纤维细胞，转染后48小时用G418和ganciclovir进行正反筛选，得到了具有抗药性的细胞集落GFFC14-pTarget1。GFFC14-pTarget1细胞经PCR检测，证实得到的具有抗性的细胞中发生了同源重组事件。 用细胞GFFC14-pBN作为供核细胞进行山羊的体细胞克隆，共得到18头受体羊，B超检查有3头羊怀孕。(本文来源于《扬州大学》期刊2003-05-01）
耿士忠[6]（2002）在《酪蛋白调控序列指导下的人乳铁蛋白基因在动物乳腺中表达特性的研究》一文中研究指出本研究是利用牛和羊的酪蛋白的基因组调控序列和人乳铁蛋白cDNA组成融合基因，应用转基因技术制作乳腺特异性表达人乳铁蛋白的转基因山羊。 从正常妇女乳腺细胞cDNA库中，利用高保真Taq酶PCR法扩增出我们所需要的人乳铁蛋白cDNA基因的两个不同大小的片段(2.18Kb，2.32Kb)。经克隆和测序，证明DNA序列是正确的，然后以PGEX4T-3为载体进行部分片段原核表达。所产生的融合蛋白中与人乳铁蛋白部分具有相同的抗原性。再用PCR方法从牛基因组DNA中扩增出牛α_(sl)-酪蛋白基因的5′调控区(2.3Kb)和3′调控区(1.5Kb)以PGEM质粒为载体拼接成的调控序列A；然后在调控序列A的基础上，在5′端上游又增加了长约为4Kb牛酪蛋白基因的基因组DNA调控序列，形成调控序列B。以及构建好的山羊β-酪蛋白基因的调控序列C。得到的叁个调控序列(A、B、C)与人乳铁蛋白基因cDNA的两个片段(2.18Kb，2.32Kb)构建成六个融合基因构件(PCN1，PCN2，261，AF203，PL238，PF84)。此六个基因构件分别在泌乳之前10天左右导入母山羊的乳腺组织中进行暂态表达。结果出现了不同的表达水平，其中PCN2，261，AF203较高，分别为88ng/ml，144ng/ml，63ng/ml，用表达量比较高的构件“261”进行制备转基因动物。显微注射148个受精卵，产羊羔16只，最后获得了4只整合人乳铁蛋白基因的转基因山羊。(本文来源于《扬州大学》期刊2002-05-01）
欧阳红生,孙燕,张永亮,张玉静,赵建军[7]（1999）在《牛β-酪蛋白5′端上游调控序列的克隆和序列分析》一文中研究指出该文用PCR扩增了牛β－酪蛋白基因5′－端上游调控序列，并对其进行了克隆和序列分析。采集成年母牛肝，提取DNA。在牛β－酪蛋白基因外显子1和上游调控区内设计引物，扩增其上游调控序列。两条引物长均为19个核苷酸，引物间跨度为635bp。以牛肝DNA为模板，进行PCR扩增，扩增产物在2％琼脂糖凝胶上电泳，可见特异的目的条带。从凝胶中回收目的片段，克隆到pGEM－T载体中。重组质粒提取DNA，进行序列分析。测序结果与文献发表的类似序列相比，仅有4个碱基不同，同源性达99．4％。表明获得了牛β－酪蛋白基因5′－端上游调控序列的克隆。(本文来源于《生物技术》期刊1999年05期）
刘松财,张玉静,欧阳红生,张永亮,刘万臣[8]（1998）在《牛β-酪蛋白基因上游调控序列PCR扩增及克隆》一文中研究指出采用蛋白酶Ｋ法从母牛肝中提取染色体ＤＮＡ，将其纯化后作为ＰＣＲ扩增模板。以引物设计软件从牛β－酪蛋白基因上游６００ｂｐ至第１个外显子设计引物，引物长度１９ｎｔ，跨度６３７ｂｐ。扩增产物电泳结果显示，在分子量Ｍａｒｋｅｒ６５７ｂｐ带附近，出现一明显亮带，这一结果与设计产物大小基本一致。用低温冷冻法纯化ＰＣＲ产物，煮沸裂解法提取载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＫｓ＋质粒，ＥｃｏＲＶ酶切质粒ＤＮＡ，Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接ＰＣＲ扩增片段和质粒ＤＮＡ。将重组质粒ＤＮＡ转化到ＪＭ１０１大肠杆菌中，经筛选、酶切、测序鉴定，结果表明所克隆的片段为牛β－酪蛋白基因上游调控序列。(本文来源于《中国兽医学报》期刊1998年01期）
岳军明,张宏权,王允玲,任宏波,周廷冲[9]（1995）在《牛αsl乳酪蛋白基因上游调控序列的克隆及序列分析》一文中研究指出应用ＰＣＲ技术从国内小牛胸腺基因组ＤＮＡ中克隆了１．０ｋｂ牛αｓｌ酪蛋白基因的上游调控序列，并进行了序列分析，发现有少量的缺失或突变，其ＴＡＴＡ框和ＣＡＡＴ框均未发生变异，表明已成功克隆了其启动子序列，这为乳腺定位表达的研究奠定了基础。(本文来源于《高技术通讯》期刊1995年09期）
酪蛋白调控序列论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
牛乳和人乳在组成上是有差别的,人乳蛋白主要是乳清蛋白,约占总蛋白的70%,而牛乳中的蛋白主要是酪蛋白约占总蛋白的78.8%,乳清蛋白含量低,只占总蛋白的21.2%。所以,改良牛乳的蛋白组成和含量,使之更接近于人乳,会提高牛乳的营养价值。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
酪蛋白调控序列论文参考文献
[1].张莉,李庆章,陈建晖,高学军,田雷.牛αS1-酪蛋白5′调控序列驱动人α-LA基因与LacZ基因在牛乳腺上皮细胞中的表达[J].生物化学与生物物理进展.2008
[2].张莉,李庆章,田雷.牛αs1-酪蛋白5′调控序列调控人α-乳白蛋白DNA序列真核表达载体的构建[C].全国动物生理生化第十次学术交流会论文摘要汇编.2008
[3].田雷,李庆章,张莉.牛αS1酪蛋白5′调控序列驱动报告基因LacZ在奶山羊乳腺上皮细胞中的表达[J].中国生物化学与分子生物学报.2007
[4].张玉峰.增强子对提高山羊β-酪蛋白调控序列指导人乳铁蛋白基因在转基因动物乳腺中特异性表达水平的研究[D].扬州大学.2006
[5].刘建.在山羊胎儿成纤维细胞中以山羊β-酪蛋白基因的调控序列为同源序列进行基因打靶的初步研究[D].扬州大学.2003
[6].耿士忠.酪蛋白调控序列指导下的人乳铁蛋白基因在动物乳腺中表达特性的研究[D].扬州大学.2002
[7].欧阳红生,孙燕,张永亮,张玉静,赵建军.牛β-酪蛋白5′端上游调控序列的克隆和序列分析[J].生物技术.1999
[8].刘松财,张玉静,欧阳红生,张永亮,刘万臣.牛β-酪蛋白基因上游调控序列PCR扩增及克隆[J].中国兽医学报.1998
[9].岳军明,张宏权,王允玲,任宏波,周廷冲.牛αsl乳酪蛋白基因上游调控序列的克隆及序列分析[J].高技术通讯.1995
论文知识图
