导读:本文包含了重组质粒论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:质粒,基因,蛋白,细胞,荧光,磷酸酶,座子。
重组质粒论文文献综述
朱学伟,段伟那,陈明星[1]（2019）在《LMP-1重组质粒滴鼻对变应性鼻炎鼠模型Th2方向的免疫调节作用》一文中研究指出近一个世纪以来,变应性疾病的发病率增加,医疗支出加剧,给病患及社会带来沉重负担。包括细菌超抗原,病毒以及大气污染等外界环境因素变化对变应性鼻炎的影响为我们提出新的问题与挑战。病毒广泛存在于呼吸道,中国10岁以上人口EB病毒(EBv)感染率高达86%以上,是研究呼吸道变态反应中不能忽视的外部因素[1]。近年来研究显示,病毒感染不但与肿瘤有关而且与变应性鼻炎及哮喘密切相关,可能是促进变应性鼻炎发生发展的重要病因之一[2]。本研究拟通过制备LMP-1重组质粒,(本文来源于《中国实验诊断学》期刊2019年12期）
柴云,于明,朱颖[2]（2019）在《真核重组质粒pCDNA3.1-Flag-PTEN 和原核重组质粒pGEX-6P-1-GST-PTEN构建》一文中研究指出目的:构建人第10号染色体缺失的磷酸酶(PTEN)真核重组质粒pCDNA3.1-Flag-PTEN和原核重组质粒pGEX-6P-1-GST-PTEN,研究PTEN融合质粒生物学效应。方法:根据基因库中PTEN序列,设计并合成相关引物。用基因重组技术将目的片段插入pCDNA3.1-Flag和pGEX-6P-1-GST空载质粒中,通过PCR和DNA测序,鉴定插入基因序列。将pCDNA3.1-Flag-PTEN转染到HEK 293细胞,将pGEX-6P-1-GST-PTEN转到E.coli BL-21中,通过Western blotting和考马斯亮蓝染色法分别检测PTEN蛋白的表达。结果:PCR显示目的基因插入成功;DNA测序显示插入序列与目的基因序列完全一致,无位点突变;Western blotting和考马斯亮蓝染色法证实融合质粒可以在生物体内正确表达。结论:成功构建PTEN相关真核和原核融合质粒并正确表达,为PTEN在帕金森疾病中的机制研究奠定了基础。(本文来源于《蚌埠医学院学报》期刊2019年11期）
程芯育,钟海凤,徐绍业,张聪慧,韦睿妮[3]（2019）在《pEGFP-N1-BRCC3重组质粒的构建、鉴定及其表达》一文中研究指出目的构建pEGFP-N1-BRCC3真核表达重组质粒,鉴定并检测其在HEK293细胞中的表达。方法根据去泛素化酶BRCC3(人的同源物称为BRCC36)基因cDNA克隆基因序列和表达载体增强绿色荧光蛋白真核表达载体(pEGFP-N1)质粒上的多克隆位点设计引物,利用RT-PCR从小鼠脑组织中提取BRCC3全长基因作为目的DNA片段,选择HindⅢ/SalⅠ内切酶将目的片段与pEGFP-N1真核表达载体进行双酶切,然后用T4连接酶连接,导入大肠杆菌经过转化、抗性筛选、质粒提取等过程获得融合的重组质粒,并再次双酶切电泳后初步筛选出可能正确的重组质粒,进而寄送公司进行DNA测序分析,通过DNAMAN软件比对,鉴定出目的基因BRCC3成功插入pEGFP-N1的重组质粒,以脂质体介导法转染HEK293细胞,通过Western blot检测BRCC3蛋白的表达。结果 DNA测序结果显示,pEGFP-N1-BRCC3重组质粒中目的DNA序列及方向完全正确,开放阅读框正确无误,表明重组pEGFP-N1-BRCC3质粒构建成功,将其转染HEK293细胞后,Western blot检测BRCC3蛋白表达明显增加。结论成功构建了pEGFP-N1-BRCC3真核表达重组质粒,并能在HEK293真核细胞中有效表达,为深入研究BRCC3基因在神经生物学领域的功能提供了实验基础。(本文来源于《广东医学》期刊2019年19期）
李妮,王海杰,吕诗韵,杜沧浩,孙鸽[4]（2019）在《EV713D聚合酶基因体外重组质粒的构建、表达及活性检测》一文中研究指出目的构建编码肠道病毒71型(EV71)3D聚合酶基因的重组质粒,表达和纯化3D聚合酶并检测其活性。方法将编码3D聚合酶的基因片段克隆至pGEX-4T-1原核表达载体,重组质粒转化入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,经谷胱甘肽琼脂糖亲和层析、TEV酶酶切、Ni-NTA柱亲和纯化后获得高纯度3D聚合酶蛋白,放射测量法是体外酶活力测定方法中较常见的一种方法,本研究通过测定插入poly(U) RNA放射性标志UMP的量确定3D聚合酶的活性。结果经酶切、PCR、测序鉴定pGEX-4T-3D重组质粒构建成功,3D聚合酶基因片段大小为1 386 bp。与未诱导相比,经IPTG诱导后带有GST标签的3D聚合酶成功表达,表达产物的相对分子质量约为79×10~3,TEV酶酶切掉GST标签后的相对分子质量约为55×10~3。纯化的3D聚合酶经体外延伸反应后跑变性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳得知,3D聚合酶溶解液DMSO组相比于3D聚合酶强抑制剂EDTA组,在DMSO组中,可以观察到强电泳条带,表明放射性同位素标志程度强,表明反应速率快,即3D聚合酶酶活较好。结论构建了EV71 3D聚合酶基因重组质粒,其表达产物3D聚合酶为以EV71 3D聚合酶为靶点的抗EV71药物筛选奠定基础。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2019年09期）
李琳,李俊[5]（2019）在《鼠源GFP-VNN1重组质粒的构建及其功能研究》一文中研究指出目的构建鼠源绿色荧光蛋白-重组人血管非炎性因子1基因(GFP-VNN1)重组质粒,并观察其对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞因子分泌及细胞凋亡的影响。方法从RAW264.7细胞中获得总RNA,逆转录得到cDNA,用HindⅢ和BamHⅠ限制性内切酶双酶切后连接至绿色荧光蛋白(GFP)载体上。表达载体经限制性内切酶酶切和DNA序列分析正确后转染至RAW264.7细胞中,ELISA试剂盒及Western blot法检测细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)分泌,流式细胞术检测细胞凋亡。结果阳性克隆经双酶切法鉴定可见VNN1基因片段,重组质粒GFP-VNN1可以显着促进细胞因子TNF-α和IL-6的分泌及RAW264.7细胞的凋亡。结论表明成功构建重组GFP-VNN1质粒,其能促进细胞因子分泌及细胞凋亡。(本文来源于《安徽医科大学学报》期刊2019年11期）
陈俊宇,顾欣雨,顾靖钏,鱼敏逸,甘卫华[6]（2019）在《lncRNA-uc.412重组质粒构建及在大鼠肾小球系膜细胞中的转染》一文中研究指出目的构建长链非编码RNA-uc.412(lncRNA-uc.412)的重组质粒,并观察其转染后在大鼠肾小球系膜细胞中的表达情况。方法自大鼠系膜细胞中提取总RNA,根据lncRNA-uc.412的基因信息设计上下游引物,应用PCR技术与琼脂糖凝胶电泳获得扩增后分离纯化的lncRNA-uc.412基因片段。将lncRNA-uc.412基因片段质粒与pRP[Exp]经双酶切处理后,通过凝胶电泳分离纯化,加入T4-DNA连接酶,即获得lncRNA-uc.412重组质粒。将lncRNA-uc.412重组质粒进行双酶切鉴定,检测目的基因片段大小;选取经双酶切鉴定连接成功的lncRNA-uc.412重组质粒,PCR扩增后进行双向测序。采用脂质体转染法转染lncRNA-uc.412重组质粒和空白质粒pRP[Exp]至大鼠肾小球系膜细胞,分别记为实验组和阴性对照组,采用RT-qPCR法检测lncRNA-uc.412在大鼠肾小球系膜细胞中的相对表达量。结果 lncRNA-uc.412重组质粒的双酶切鉴定结果显示,得到大小在200～300 bp的特异性条带,与lncRNA-uc.412的长度相符。测序结果显示,lncRNA-uc.412重组质粒的碱基序列与理论预期序列一致。阴性对照组大鼠肾小球系膜细胞中lncRNA-uc.412的相对表达量记为1.00±0.00,实验组大鼠肾小球系膜细胞中lncRNA-uc.412的相对表达量为8.01±0.97,两组相比,P<0.05。结论成功构建了lncRNA-uc.412重组质粒,并成功转染至大鼠肾小球系膜细胞。(本文来源于《山东医药》期刊2019年24期）
施然,钱程,张献全[7]（2019）在《pLKO.1-shSIRT7重组质粒的构建及其对人肝癌PLC/PRF/5细胞系增殖的影响》一文中研究指出基于近年来研究发现sirtuin 7 (SIRT7)与肝癌密切相关,为此,本研究获取SIRT7基因敲除小鼠的肝细胞基因表达谱数据,在m RNA整体水平上分析SIRT7在肝细胞中的作用;另外,构建特异性下调人SIRT7基因的短发夹RNA (shRNA)表达质粒,并初步研究SIRT7基因沉默对肝癌PLC/RPF/5细胞系的影响。应用DAVID、GSEA、Cytoscape等生物信息学相关工具分析基因表达谱数据。基于pLKO.1空载质粒构建p LKO.1-sh SIRT7重组质粒并通过酶切和测序鉴定。使用Lipofectamin 2000转染重组质粒进入PLC/RPF/5细胞,并通过PCR和Western blotting验证SIRT7基因的沉默效率。通过MTT实验检测细胞增殖能力的改变和流式细胞术检测细胞周期的变化,并使用PCR检测鉴定CDC4、TK1、CDC34、BCL2等基因表达水平的变化。基因表达谱分析结果显示,SIRT7基因敲除后,基因mRNA整体水平变化主要集中在与细胞周期、细胞凋亡等相关的通路中。重组质粒酶切与测序结果显示,成功构建了pLKO.1-shSIRT7重组质粒。转染后PLC/RPF/5细胞SIRT7基因的表达得到有效沉默,与对照组相比,沉默SIRT7基因的表达可导致细胞的增殖能力降低并引起G0/G1期的细胞比例增多,PCR实验显示CDC4与BCL2表达水平增高,TK1与CDC34表达水平降低。以上研究结果提示,在肝癌PLC/RPF/5细胞系中沉默SIRT7的表达可使更多的细胞阻滞在G0/G1期,从而降低其增殖能力,其机制可能与引起细胞周期相关基因的表达改变有关。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2019年08期）
陈伟,许厚强,陈祥,杨涛,吴雨[8]（2019）在《PiggyBac转座子介导关岭牛UCP3基因启动子重组质粒的构建与鉴定》一文中研究指出为了构建以PiggyBac(PB)转座子为载体元件,绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,含UCP3基因启动子的PiggyBac转座子二元系统PB-513B-UCP3,并验证其转座活性,试验采用PCR技术扩增获得UCP3基因启动子,分别通过T4 DNA连接酶与质粒PB-513B-1和pEGFP-N3连接,构建重组质粒PB-513B-1-UCP3和pEGFP-N3-UCP3-pro;用脂质体法将质粒pEGFP-N3、重组质粒pEGFP-N3-UCP3-pro和PB-513B-1-UCP3以及PiggyBac转座子二元系统分别转染至小鼠成肌细胞C2C12中,检测其在小鼠成肌细胞C2C12中的表达情况。结果表明:PCR扩增得到大小为1 080 bp的单一目的条带;经酶切和测序鉴定,成功构建重组质粒PB-513B-1-UCP3和pEGFP-N3-UCP3-pro,PiggyBac转座子二元系统的阳性克隆数明显多于重组质粒PB-513B-1-UCP3和pEGFP-N3-UCP3-pro的克隆数。说明试验成功构建了PiggyBac转座子介导的重组质粒PB-513B-1-UCP3及pEGFP-N3-UCP3-pro,且证实PiggyBac转座子介导的牛UCP3基因启动子在小鼠成肌细胞C2C12中具有较高的转座活性。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2019年15期）
邓青,杨成园,王安彦,牛仕诗,郝跃鹏[9]（2019）在《IQ结构域的GTP酶激活蛋白1基因短发卡RNA重组质粒的构建及表达》一文中研究指出目的构建特异性针对人IQ结构域的GTP酶激活蛋白1(IQ-domain GTPase-activating protein 1,IQGAP1)基因短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)的重组质粒,检测其在人食管癌KYSE150细胞中的表达。方法以人IQGAP1 mRNA序列为靶向设计合成含有shRNA序列的寡核苷酸,克隆至真核表达载体GV102中,构建重组质粒IQGAP1-shRNA,转化DH5α感受态细胞,挑取阳性克隆测序鉴定。用脂质体2000介导IQGAP1-shRNA转染KYSE150细胞作为IQGAP1-shRNA干扰组,同时设转染载体GV102为对照组,RT-PCR及Western blot法检测IQGAP1基因的干扰效果。结果经测序鉴定,重组质粒IQGAP1-shRNA构建正确。IQGAP1-shRNA干扰组及对照组转染KYSE150细胞均可见绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP),两组转染效率分别为(76±5. 780)%和(83±3. 851)%。IQGAP1-shRNA干扰组IQGAP1 mRNA转录水平和蛋白表达水平与对照组比较差异均有统计学意义(P <0. 001),表达抑制率分别为(82±2. 424)%及(77±2. 791)%。结论成功构建了IQGAP1-shRNA真核表达质粒,能特异性降低食管癌KYSE150细胞中IQGAP1基因的表达,为进一步研究IQGAP1基因在食管癌中的功能及靶向治疗作用奠定了基础。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年08期）
许中衎,王静,李畅,乔尚怡,安健[10]（2019）在《rEtHP重组质粒对鸡柔嫩艾美耳球虫病保护效应的评估》一文中研究指出本实验通过分析鸡柔嫩艾美耳球虫HP基因原核表达重组蛋白其在鸡抗柔嫩艾美耳球虫感染中对鸡平均增重、卵囊数量、减少盲肠病变和抗球虫指数(ACI)的作用来评估鸡柔嫩艾美耳球虫HP基因原核表达重组蛋白的免疫效力。实验从柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊中提取总RNA作为模板,用RT-PCR扩增出HP基因片段,再应用DNA重组技术将HP基因克隆到原核表达载体p ET32a(+)中并用IPTG诱导表达。用纯化的重组蛋白进行动物免疫试验,共有50μg/μl、100μg/μl、200μg/μl叁种浓度,结果显示,HP重组蛋白能够显着减少柔嫩艾美耳球虫感染鸡的盲肠病变、和抗球虫指数(ACI),对提高鸡柔嫩艾美耳球虫感染鸡的平均增重和卵囊数量也有部分作用。结果说明,HP重组蛋白在鸡抗柔嫩艾美耳球虫感染中有较好的免疫保护作用,且50μg/μl的免疫保护作用最高。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集》期刊2019-07-27）
重组质粒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:构建人第10号染色体缺失的磷酸酶(PTEN)真核重组质粒pCDNA3.1-Flag-PTEN和原核重组质粒pGEX-6P-1-GST-PTEN,研究PTEN融合质粒生物学效应。方法:根据基因库中PTEN序列,设计并合成相关引物。用基因重组技术将目的片段插入pCDNA3.1-Flag和pGEX-6P-1-GST空载质粒中,通过PCR和DNA测序,鉴定插入基因序列。将pCDNA3.1-Flag-PTEN转染到HEK 293细胞,将pGEX-6P-1-GST-PTEN转到E.coli BL-21中,通过Western blotting和考马斯亮蓝染色法分别检测PTEN蛋白的表达。结果:PCR显示目的基因插入成功;DNA测序显示插入序列与目的基因序列完全一致,无位点突变;Western blotting和考马斯亮蓝染色法证实融合质粒可以在生物体内正确表达。结论:成功构建PTEN相关真核和原核融合质粒并正确表达,为PTEN在帕金森疾病中的机制研究奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重组质粒论文参考文献
[1].朱学伟,段伟那,陈明星.LMP-1重组质粒滴鼻对变应性鼻炎鼠模型Th2方向的免疫调节作用[J].中国实验诊断学.2019
[2].柴云,于明,朱颖.真核重组质粒pCDNA3.1-Flag-PTEN和原核重组质粒pGEX-6P-1-GST-PTEN构建[J].蚌埠医学院学报.2019
[3].程芯育,钟海凤,徐绍业,张聪慧,韦睿妮.pEGFP-N1-BRCC3重组质粒的构建、鉴定及其表达[J].广东医学.2019
[4].李妮,王海杰,吕诗韵,杜沧浩,孙鸽.EV713D聚合酶基因体外重组质粒的构建、表达及活性检测[J].中国病原生物学杂志.2019
[5].李琳,李俊.鼠源GFP-VNN1重组质粒的构建及其功能研究[J].安徽医科大学学报.2019
[6].陈俊宇,顾欣雨,顾靖钏,鱼敏逸,甘卫华.lncRNA-uc.412重组质粒构建及在大鼠肾小球系膜细胞中的转染[J].山东医药.2019
[7].施然,钱程,张献全.pLKO.1-shSIRT7重组质粒的构建及其对人肝癌PLC/PRF/5细胞系增殖的影响[J].基因组学与应用生物学.2019
[8].陈伟,许厚强,陈祥,杨涛,吴雨.PiggyBac转座子介导关岭牛UCP3基因启动子重组质粒的构建与鉴定[J].黑龙江畜牧兽医.2019
[9].邓青,杨成园,王安彦,牛仕诗,郝跃鹏.IQ结构域的GTP酶激活蛋白1基因短发卡RNA重组质粒的构建及表达[J].中国生物制品学杂志.2019
[10].许中衎,王静,李畅,乔尚怡,安健.rEtHP重组质粒对鸡柔嫩艾美耳球虫病保护效应的评估[C].中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集.2019
论文知识图
