导读:本文包含了器官培养法论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:角膜,器官,内皮,细胞,血清,乙基,沙土。
器官培养法论文文献综述
魏捷,蒋华[1]（2014）在《羟乙基淀粉130/0.4对器官培养法保存兔角膜的脱水作用》一文中研究指出目的:研究羟乙基淀粉的最新剂型HES 130/0.4对器官培养保存角膜的持续脱水效果。方法:20对配对兔角膜,一半于含10%HES 130/0.4的ACF培养液中保存28d作为实验组,不再单独脱水;另一半于ACF培养液中保存28d后再葡聚糖T500脱水48h作为对照组。内皮细胞活性和植片质量评估指标包括:内皮细胞计数、角膜厚度和含水量、角膜透明度和后弹力层皱褶程度、内皮层中肌动蛋白微丝(filament actin,F-actin)的表达,及透射电镜下内皮细胞超微结构的变化。结果:保存结束时,实验组植片明显较薄,角膜透明度和皱褶程度也优于对照组,内皮细胞密度为2371±159个/mm~2。对照组继续脱水后,角膜厚度、含水量和透明度与实验组间差别变小,内皮细胞密度却降至2138±182个/mm~2。免疫印迹法证实F-actin在两组内皮层都有表达,实验组的F-actin表达水平更高。电镜下实验组的细胞超微结构改变较小。结论:HES 130/0.4的细胞毒性小,可成为器官保存液中的持续添加组分,不仅避免角膜过度水肿,还简化了保存程序,减轻了感染风险,有希望成为新型角膜脱水剂。(本文来源于《国际眼科杂志》期刊2014年01期）
魏捷,蒋华[2]（2011）在《无动物成分器官培养法保存角膜内皮细胞活性的实验研究》一文中研究指出目的探讨无动物成分(ACF)器官培养保存角膜内皮细胞活性方面的效果。方法将Wistar大鼠角膜16只密闭保存于ACF中4周,葡聚糖T500脱水2 d,作为ACF组。以常规含2%胎牛血清(FBS)的MEM基础培养基组作为对照组。保存结束,计数角膜内皮细胞密度(ECD),免疫组织化学染色法和RT-PCR法检测大鼠角膜内皮层中胞质紧密粘连蛋白1(ZO-1)的表达水平,以评估内皮细胞活性和细胞间紧密连接的屏障功能。结果保存结束后,对照组大鼠角膜的ECD值仅为(1 875±162)个/mm2,ACF组则高达(2 143±169)个/mm2,两组间比较差异显着(P=0.006)。角膜冰冻切片显示ZO-1在保存后大鼠内皮层成功表达。RT-PCR检测表明ZO-1mRNA在ACF组的表达水平高于对照组。结论 ACF器官培养法保存角膜可以更好地保持内皮细胞的活性和紧密连接的屏障功能,在无血清器官培养保存角膜方面具有良好的应用前景。(本文来源于《实用医药杂志》期刊2011年08期）
魏捷,蒋华[3]（2011）在《无血清器官培养法保存大鼠角膜内皮细胞的活性》一文中研究指出目的:研究两种新型培养基-内皮细胞培养基(endothelial cell medium,ECM)和无动物成分培养基(animal compoundfree medium,ACF)在无血清器官培养法保存角膜内皮细胞活性方面的应用效果。方法:将大鼠角膜密闭保存于ECM和ACF培养基中4wk,再经葡聚糖T500脱水2d。以含低浓度牛血清的MEM基础培养基作为对照。计数保存前后角膜内皮细胞密度,检测保存结束大鼠角膜内皮层中胞质紧密粘连蛋白1(zonula occludens-1,ZO-1)的表达水平,评估内皮细胞层的屏障功能。结果:保存结束后,MEM+20mL/L FBS对照组大鼠的角膜内皮细胞密度值最低,ECM+20mL/L FBS组则高达2250±202个/mm2,ECM和ACF组结果与ECM+20mL/LFBS组接近,细胞死亡率也较低,组间差异有统计学意义(F=28.965,P=0.000)。冰冻切片显示ZO-1在保存后大鼠角膜内皮层成功表达。RT-PCR检测表明ZO-1mRNA在各组的表达趋势与内皮细胞密度结果一致(F=592.751,P=0.000)。结论:无血清ECM和ACF培养基可以很好地保持器官培养法保存角膜内皮细胞的活性和紧密连接的屏障功能。(本文来源于《国际眼科杂志》期刊2011年05期）
魏捷[4]（2009）在《器官培养法保存角膜的内皮细胞活性研究及在基因转染和移植排斥研究中的应用》一文中研究指出目的1.对两种新型培养基—内皮细胞培养基(Endothelial Cell Medium,ECM)和无动物细胞成分培养基(Animal compound free medium,ACF)在无血清器官培养保存角膜内皮细胞活性方面的效果进行综合评估,对其在无血清角膜培养保存领域的应用前景进行初步探索。2.观察新型人造胶体羟乙基淀粉(Hydroxyethyl Starch,HES)的最新剂型HES130/0.4对器官培养保存角膜片的脱水效果,并与葡聚糖T500相比较,探讨其成为新型角膜脱水剂的可行性。3.为控制移植术后排斥反应发生,阻止内皮细胞损失,探索腺病毒载体对器官培养法保存的离体兔角膜片上内皮细胞的转染效率,以检测报告基因增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的荧光表达来明确腺病毒的转染效率和动态过程。4.建立不同类型器官培养法保存角膜植片的大鼠角膜移植模型,检测移植后数种参与两大类辅助性T细胞因子Th1因子和Th2因子平衡调节作用的细胞因子和T细胞亚群在眼局部和(或)全身的表达,分析其在器官培养保存角膜移植相关免疫排斥反应中的作用。方法1.将兔和大鼠角膜各80只平均分为5组,在5种含或不含胎牛血清(fetal calf serum,FBS)的培养基中(MEM+2%FBS、高糖DMEM+2%FBS、ECM+2%FBS/ECM、ACF)密闭保存3周后,进行角膜内皮细胞(corneal endothelial cells,CEC)计数和活性染色、兔角膜厚度测量、免疫组织化学染色法(immunohistochemistry,IHC)、免疫印迹法(western blotting,WB)和反转录-聚合酶链反应法(reverse transcription polymerase chain reagction,RT-PCR)定性或半定量检测兔角膜内皮层中肌动蛋白微丝(filament actin,F-actin)和大鼠角膜内皮层中紧密连接蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)的表达来衡量CEC间连接的紧密程度以及透射电镜(Transmission electron microscopy,TEM)下CEC超微结构的观察。2. 18对配对兔角膜片,一半于无血清ACF培养液中保存21d,葡聚糖T500脱水48h作为对照组;另一半于含10%HES 130/0.4的ACF培养液中保存21d作为实验组,不再另外行脱水程序。保存前后进行CEC计数及活性染色、角膜厚度和含水量的测定、角膜透明度和后弹力层皱褶程度的评估、IHC和WB法分别定性和半定量检测兔角膜内皮层中F-actin的表达以及TEM下CEC超微结构的观察。3.去上皮兔角膜片24只随机分为4组,每组6只角膜,在添加2%FBS的ECM培养液中保存2~3周后与编码增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的腺病毒载体Ad5(滴度范围5×106 vp/uL～5×109vp/uL)37℃下共同孵育3h进行基因转染,随后31℃下继续器官培养观察角膜2周。检测前剥离大部分植片基质,倒置荧光显微镜下观察不同时间点EGFP在CEC中的表达强度,比较不同滴度组腺病毒载体的转染效率、CEC计数,TEM观察CEC超微结构变化。4.选用Wistar大鼠24只,SD大鼠54只,新西兰大白兔12只。将54只SD大鼠随机分为5组:①为正常角膜组成的对照组,②为新鲜大鼠角膜同种异体穿透性移植组(penetrating keratoplasty,PKP),③为去CEC同种异体大鼠角膜+器官保存兔角膜后弹力层和内皮细胞复合体(DM+CEC)移植组,④为器官培养法保存大鼠角膜同种异体PKP组,⑤为去CEC同基因大鼠角膜+器官保存兔角膜DM+CEC移植组。兔角膜保存时间2~3周不等。②～④组制备Wistar→SD大鼠PKP模型,⑤组制备SD→SD大鼠PKP模型。术后观察各组植片的排斥情况和存活时间,酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)定量检测房水和血清中白细胞介素2(IL-2)、干扰素-gamma(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达,IHC法定性检测术后植片内CD25+ T细胞的表达,RT-PCR半定量检测植片内TNF-α、IFN-γ、IL-4和CD25 mRNA的表达,流式细胞术检测外周血中CD25和CD28亚群的表达。结果1.结果显示,ECM和ACF保存组角膜的ECD最高,细胞超微结构与正常角膜间的区别最小,MEM组的ECD值则最低,降幅最大,细胞器等超微结构破坏较严重。F-actin和ZO-1在各组兔和大鼠角膜内皮层都有表达。WB显示F-actin蛋白在ECM和ACF组表达水平最高,DMEM组次之,MEM组最低, RT-PCR法证实ZO-1 mRNA在各组的表达趋势与兔F-actin的结果一致。2.保存结束时含10%HES130/0.4的实验组植片较薄,但ECD值略低于对照组。对照组经葡聚糖T500脱水后,厚度和透明度与实验组差别变小,但ECD值明显降低。IHC和WB证实F-actin蛋白在两组内皮层都表达,实验组表达水平高于对照组。3.在有效浓度范围内,EGFP的荧光在器官保存的兔角膜内皮层强烈表达,随时间延长强度逐渐降低。5×107~5×108vp/μL AdV是载体滴度最为适宜的转染组,转染组中EGFP在角膜内皮细胞中的表达面积为67～84%,相对表达强度为34～75。过高浓度AdV(5×109vp/μL)导致ECD值显着下降。4.④和⑤组(即器官培养保存的同种异体全角膜和单纯异种异体内皮层移植组)的植片存活时间明显长于②和③手术组(即新鲜同种异体PKP组和联合器官培养保存的异种异体内皮层移植组),又以⑤组的存活期最长。术后各组血清和房水中IL-2、IFN-γ、IL-4和TNF-α的含量与排斥反应程度成正比,以②组最高,⑤组最低;各组植片内CD25的表达无显着差别;IFN-γ、TNF-α、IL-4和CD25mRNA在植片内的表达水平也与植片排斥程度成正比;外周血淋巴细胞中CD25亚群表达水平升高不明显,而CD28亚群的表达明显增强并与植片排斥程度成正比。结论1.无血清的ECM和ACF培养基在保持内皮细胞活力方面体现出了比常规含低浓度血清的MEM基础培养基更好的保护作用,在无血清器官培养保存角膜方面极具发展潜力。2. HES能有效避免器官培养过程中角膜过度水肿,且细胞毒性小可以成为器官保存液中的持续添加组分。它的应用也简化了保存程序,在一定程度上减轻了感染风险,有希望成为角膜器官培养保存法中的新型脱水剂。3.器官培养法保存后的角膜内皮细胞层可以同新鲜角膜一样被腺病毒载体高效率、特异性地转染成功并持续表达,转染效率只略低于新鲜角膜片。EGFP是监测这一转染过程的理想标记物。4. Th1/Th2平衡调节机制和CD28+T细胞亚群在器官培养法保存角膜移植后的免疫排斥反应中发挥了重要作用;动态检测外周血CD28和IFN-γ等Th1因子和Th2因子的表达有助于临床了解局部免疫反应进程并预测排斥反应的发生。器官培养法保存的角膜,无论是以全层还是单纯DM+CEC复合体形式进行移植,术后植片的存活时间都得以延长。促进Th2因子表达,抑制Th1类因子表达可能有益于降低排斥反应。同基因大鼠去CEC角膜联合器官保存兔异种CEC移植取得了最佳效果,为深层角膜病患者及时有效复明提供了新思路。(本文来源于《第二军医大学》期刊2009-05-01）
王旭,张华,张玉光,叶思勇,韩旭光[5]（2007）在《改良器官培养法保存人角膜的临床研究》一文中研究指出目的：探讨应用改良的器官培养法保存角膜供体的临床应用效果。方法：自行设计角膜培养瓶保存人供体角膜13个。供体植片在保存25天内分别应用于穿透性角膜移植术,对照组是在同期应用甘油保存的供体角膜进行角膜移植术的(本文来源于《中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编》期刊2007-08-01）
张永明[6]（2002）在《器官培养法保存供体角膜的研究》一文中研究指出目的：建立器官培养法供体角膜保存技术，观察和评价保存时间、保存角膜片的脱水对角膜内皮细胞的影响，及保存期内微生物学的安全性。 材料与方法：37只供体人角膜作为研究材料；20只为周边巩膜角膜片(中央部已供临床角膜移植使用)，分成培养保存7天组、14天组、21天组和28天组；17只为完整的巩膜角膜片(包含完整的角膜及角膜缘后2～3mm的巩膜组织)。保存液为含添加剂的MEM培养液，含2％胎牛血清。培养保存条件为37℃或34℃，5％CO_2，95％O_2。 角膜内皮细胞的密度评价采用0.3％曲利本兰染液染色后光学显微镜下计数。因经培养后的巩膜角膜片的基质发生高度水肿，在进行临床角膜移植前需对保存片进行脱水处理，因此本研究还观察高分子右旋糖苷对培养后的完整巩膜角膜片的脱水处理及脱水时间对角膜内皮细胞的影响。内皮细胞评价选在培养保存前、保存结束时以及脱水后3个时点进行计数，并计算内皮细胞的丢失率。通过观察培养液性状，培养液抽样微生物培养检查，观察器官培养保存期间的微生物污染的发生情况。 硕士研究生学位论文结果：20只周边巩膜角膜片分成4组；培养保存7天组保存前的内皮细 胞密度为2860．341339．96个／ITln’，保存7天后的内皮细胞密度为 2758．77土301．sl个八mn’；培养保存14天组保存前的内皮细胞密度为 2968．of土1165．97个／llllll’，保存14天后的内皮细胞密度为2673．77 土 1059．43个／mln；培养保存 ZI天组保存前的内皮细胞密度为 2614．ZI i883．52个加f，保存ZI天后的内皮细胞密度为2406．42i 808．68个limn‘；培养保存28天组保存前的内皮细胞密度为3614．74 t 198．97个加奸，保存 28天后的内皮细胞密度为 3234．241 176．37 个W‘；四个组的内皮细胞丢失率分别为 3．45．73％、9．96 2．26％、8刁4土5石3％。10．50士2．62％。 17只完整的巩膜角膜片的保存培养时间 28．6413．19天，在培养 过程中1只发生霉菌性污染，其余16只完整的巩膜角膜片保存前的 内皮细胞密度为 2923．95 97．18个八山n’，保存后的内皮细胞密度为 2695．45 215．38个／nm‘，内皮细胞丢失率为7．75f7．42％。 经过培养后的16只完整巩膜角膜片，分为4组，分别脱水1天。 2天、3天和4天，脱水1天组脱水前内皮细胞密度为2645．66土305．25 个／Injn’，脱水后内皮细胞密度为 2550．54 226．55个人m口’；脱水 2天 组脱水前内皮细胞密度为2571．35土197．15个／inln’，脱水后内皮细胞 密度为 2464．331200．24个加d；脱水 3天组脱水前内皮细胞密度为 2743．76土86．50个IInln‘，脱水后内皮细胞密度为2541石2i85．40个 i‘；脱水 4天组脱水前内皮细胞密度为 2821．05土210．79个／。’， 脱水后内皮细胞密度为 2455．41上 147刀8个加f；四个组的内皮细胞 丢失率分别为3．37．78％、4．16i2．92％、7．2315．87％、12．77t 5．17％。 ．2－ 硕土研究生学位论文结论：器官培养法有效地保存供体角膜时间达4周。结果表明该方法为 安全有效的供体角膜保存技术。脱水时间不应超过3天。本方法的 建立有利于我国眼库技术的发展，使现有的供体材料得到更有效的 利用。(本文来源于《浙江大学》期刊2002-05-01）
赵靖[7]（2001）在《器官培养法保存人角膜》一文中研究指出器官培养是欧洲眼库保存角膜的主要方法 ,它可以保存角膜活性达数周 ,并且可以降低感染率 ,临床应用效果良好。本文就器官培养保存角膜的方法、临床应用效果及保存角膜的生理、病理变化作一综述(本文来源于《国外医学.眼科学分册》期刊2001年06期）
[8]（1998）在《用简便新型的器官培养法研究新生沙土鼠Corti器》一文中研究指出目前体外培养Corn器应用最普遍的maximor滑动组合技术（maximorslideassemblytechnique）及改良方法既费时又复杂。该作者报告了一种简便的方法来培养Corn器。实验用动物是当日出生的沙上鼠，动物在麻醉和无菌条件下断头，取颧骨(本文来源于《国外医学(耳鼻咽喉科学分册)》期刊1998年04期）
李新人,林文娜,李海缨,张德宁,秦国强[9]（1992）在《用器官培养法研究抗连接蛋白单克隆抗体对鸡胚水晶体发育的影响》一文中研究指出用器官培养技术研究了抗连接蛋白单克隆抗体NC6对鸡胚水晶体发育的影响,同时进行了原位眼内注射NC6的实验。水晶体大小的统计分析结果指出,离体器官培养结果与原位眼内注射结果完全一致:实验组水晶体均明显地大于对照组;这种差异显着性又与培养时间正相关。但正常水晶体左右侧之间无显着的大小差异。这些结果表明,NC6确有促使水晶体增大的作用。以前的工作已经证明,NC6能阻断间隙连接的形成。因此,作者推测,可能是NC6阻断了水晶体纤维细胞中的间隙连接形成,造成了细胞分裂的失控,从而导致水晶体的增大。本文结果进一步证实了间隙连接在生长控制中起重要作用。(本文来源于《细胞生物学杂志》期刊1992年01期）
张彩霞,励永明,孟爱英,钱云芳,薛淼[10]（1991）在《体外器官培养法评价四种高分子材料毒性》一文中研究指出本文应用玻璃管架法培养鸡胚股骨的体外器官培养法评价了指关节、Ⅴ型节育环、男性依赖性假体修复件和宫颈帽四种硅橡胶材料,并进行了组织学观察和电镜的超微结构变化检查。结果显示:组织学观察,阴性对照毒性分级为0级,阳极对照毒性分级Ⅳ级,男性依赖性假体修复件硅橡胶的毒性分级为Ⅱ级,余为Ⅰ级。超微结构电镜观察,阴性对照软骨细胞呈双核,核大,核膜完整,胞浆中的内质网丰富,有少量空泡。阳性对照细胞明显变性,胞膜破裂,细胞器溶解,部分核膜破裂,核内有空泡变性。男性依赖性假体修复件硅橡胶所致细胞浆内部分区域细胞器结构不清楚,粗面内质网数目较少,显示了轻微的毒性反应,其它叁种材料未见异常,四种材料中以男性依赖性假体修复件材料对组织器官的影响较为明显,但均属轻度毒性反应。(本文来源于《生物医学工程学杂志》期刊1991年01期）
器官培养法论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨无动物成分(ACF)器官培养保存角膜内皮细胞活性方面的效果。方法将Wistar大鼠角膜16只密闭保存于ACF中4周,葡聚糖T500脱水2 d,作为ACF组。以常规含2%胎牛血清(FBS)的MEM基础培养基组作为对照组。保存结束,计数角膜内皮细胞密度(ECD),免疫组织化学染色法和RT-PCR法检测大鼠角膜内皮层中胞质紧密粘连蛋白1(ZO-1)的表达水平,以评估内皮细胞活性和细胞间紧密连接的屏障功能。结果保存结束后,对照组大鼠角膜的ECD值仅为(1 875±162)个/mm2,ACF组则高达(2 143±169)个/mm2,两组间比较差异显着(P=0.006)。角膜冰冻切片显示ZO-1在保存后大鼠内皮层成功表达。RT-PCR检测表明ZO-1mRNA在ACF组的表达水平高于对照组。结论 ACF器官培养法保存角膜可以更好地保持内皮细胞的活性和紧密连接的屏障功能,在无血清器官培养保存角膜方面具有良好的应用前景。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
器官培养法论文参考文献
[1].魏捷,蒋华.羟乙基淀粉130/0.4对器官培养法保存兔角膜的脱水作用[J].国际眼科杂志.2014
[2].魏捷,蒋华.无动物成分器官培养法保存角膜内皮细胞活性的实验研究[J].实用医药杂志.2011
[3].魏捷,蒋华.无血清器官培养法保存大鼠角膜内皮细胞的活性[J].国际眼科杂志.2011
[4].魏捷.器官培养法保存角膜的内皮细胞活性研究及在基因转染和移植排斥研究中的应用[D].第二军医大学.2009
[5].王旭,张华,张玉光,叶思勇,韩旭光.改良器官培养法保存人角膜的临床研究[C].中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编.2007
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[8]..用简便新型的器官培养法研究新生沙土鼠Corti器[J].国外医学(耳鼻咽喉科学分册).1998
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[10].张彩霞,励永明,孟爱英,钱云芳,薛淼.体外器官培养法评价四种高分子材料毒性[J].生物医学工程学杂志.1991
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