导读:本文包含了孤雌胚体外发育论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:霉素,胚胎,体外,体细胞,茴香,细胞,磷酸酶。
孤雌胚体外发育论文文献综述
姜文杰,李英花,姚雪瑞,赵予晗,高青山[1]（2018）在《冷、热应激对猪孤雌胚胎体外发育的影响》一文中研究指出为研究持续不同时间的冷、热应激对猪孤雌胚胎体外发育的影响,本研究以猪孤雌胚胎为材料,采用免疫荧光染色、实时荧光定量PCR技术检测不同时间的冷(31℃)、热应激(41℃)处理对猪孤雌胚胎发育后囊胚发育率、细胞数、细胞凋亡率、自噬相关基因及细胞凋亡相关基因mRNA转录水平的影响。结果显示,热应激12h后囊胚发育率显着低于对照组(P<0.05),冷应激18h后囊胚发育率显着低于对照组(P<0.05),而冷应激组囊胚发育率高于热应激组。热应激12h和冷应激18h后均导致囊胚内细胞数显着低于对照组(P<0.05),细胞凋亡率显着高于对照组(P<0.05),且冷应激组的细胞凋亡率低于热应激组。冷、热应激组自噬相关蛋白LC3的表达均高于对照组;冷、热应激中自噬相关基因Atg6和Atg8的表达均极显着高于对照组(P<0.01),Lamp2基因的表达均显着高于对照组(P<0.05),热应激组中的Atg6和Atg8基因的表达高于冷应激组。通过检测细胞凋亡相关基因mRNA的转录水平发现,冷、热应激组中细胞凋亡相关基因Bak、Casp-3、Fas的表达均极显着高于对照组(P<0.01),Bcl-xl基因的表达均显着低于对照组(P<0.05)。综上,猪孤雌胚胎对冷应激(31℃)的耐受性比对热应激(41℃)强,且热应激可诱导体外培养的猪孤雌胚胎自噬及凋亡相关基因的表达,从而降低孤雌胚胎发育的能力。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2018年09期）
张宇辰[2]（2017）在《茴香霉素结合电激活对猪孤雌激活和体细胞核移植胚胎的体外发育的影响》一文中研究指出孤雌激活与体细胞核移植在动物育种、生产转基因动物、建立动物模型、保护珍稀濒危动物、提供人造器官异种移植研究以及发育生物学的研究等方面有着重要的作用与意义。而卵母细胞激活是影响孤雌激活和体细胞核移植效率的重要因素之一。同时也是确定孤雌激活和核移植以及随后的克隆胚胎的发育的基本要素之一。因此,如何有效提高卵母细胞激活效率具有十分重要的意义。而茴香霉素是一种蛋白合成抑制剂,首次在牛孤雌激活胚胎和体细胞核移植激活处理上应用,发现能够显着提高牛的孤雌激活胚胎和体细胞核移植胚胎囊胚率并提高囊胚质量。但茴香霉素应用在猪的孤雌激活胚胎和体细胞核移植胚胎尚未见报道。所以在本研究中,我们利用蛋白质合成抑制剂茴香霉素在电激活后处理猪的孤雌激活胚胎和体细胞核移植胚胎来观察实验效果。我们获得以下试验结果:1.茴香霉素,CB组与未处理组对比胚胎排出第二极体。实验发现茴香霉素和未处理组与CB组相比在排出第二极体上差异显着。(51.9%and 51.6%vs.14.3%p<0.05),结果说明茴香霉素不能抑制第二极体的排出。2.茴香霉素在1μg/mL与其他各个浓度下的胚胎发育到2-4细胞阶段有显着差异(table3-2)。通过Hoechest 33342染色的方法观察茴香霉素处理组与对照组(CB)在囊胚的细胞数上没有着显着性差异(table2),0.01 μg/mL,0.1 μg/mL药物浓度与1 μg/mL及对照组在达到囊胚的效率上有显着地差异(31.8%and 27.1%vs.0 and 16.7%,p<0.05)。在最佳浓度下的茴香霉素处理不同的时间下观察胚胎发育能力。分别测量了 Oh,2h,4h,6h,下胚胎的发育能力,结果显示:茴香霉素是在处理2,4,6h下孤雌激活胚胎有最好的发育能力(39.5%,33.3%and29.2%vs.20.3%,p<0.05)。同样,在胚胎发育到 2-4 细胞时期,以及囊胚平均细胞数上都没有显着差异。以上结果表明:茴香霉素的最佳处理条件为0.01 μg/mL下作用2h。3.6-DMAP,茴香霉素与未处理组对孤雌激活胚胎的影响,茴香霉素处理组和6-DMAP处理组与未处理组相比,在2-4细胞时期和囊胚平均细胞数上并无显着性差异,在胚胎发育情况上,茴香霉素处理组和6-DMAP处理组与未处理组相比,能够显着提高孤雌激活胚胎发育能力(37.6%and 30.0%vs 19.9%,p<0.05)。4.孤雌激活胚胎在0.01μg/mL茴香霉素作用4h下测量MPF活性,结果显示茴香霉素处理下的孤雌生殖胚胎MPF水平明显低于对照组(361.3 pg/ml vs 254.2 pg/mL,p<0.05)。5.在染色体我们对激活7天左右的分别来自茴香霉素处理组,6-DMAP处理组和对照组(CB)处理的早期囊胚进行核型分析。结果显示茴香霉素与6-DMAP处理组和对照(CB)差异显着(33.3%vs60%and 50%,p<0.05)以上结果表明:在茴香霉素处理下可以降低囊胚染色体异常比例。6.PA胚胎在0.01μg/mL茴香霉素作用4h下通过RT-PCR检测多能性基因(Sox2,Oct4,Nanog)和凋亡基因(Blc-2,Bax),实验结果表明茴香霉素对PA囊胚的多能性基因和凋亡基因并无显着性影响。7.6-DMAP,茴香霉素与未处理组对SCNT胚胎的影响,茴香霉素处理组和6-DMAP处理组与未处理组相比,在2-4细胞时期和囊胚平均细胞数上并无显着性差异,在胚胎发育情况上,茴香霉素处理组与未处理组相比,能够显着提高SCNT胚胎发育能力(18.3%vs 4.2%p<0.05)。结论:1)茴香霉素能够通过改变MPF活性来影响孤雌激活胚胎和体细胞核移植胚胎的发育能力。2)茴香霉素能够显着降低孤雌激活囊胚染色体异常比例。3)茴香霉素对孤雌激活囊胚的多能性基因(Sox2,Oct4,Nanog)和凋亡基因(Blc-2,Bax)并无显着影响。其中,茴香霉素处理的最佳条件为0.01 μg/mL,2h。(本文来源于《延边大学》期刊2017-05-19）
李啸晨[3]（2017）在《AZD5438对猪孤雌激活与体细胞核移植胚胎体外发育的影响》一文中研究指出现如今,猪卵母细胞激活方法和相关激活参数的研究己经比较成熟,但激活的效率仍然很低。此外,由于卵母细胞激活是细胞核移植等生物技术的关键环节,提高孤雌激活效率也可以促进细胞核移植技术的提高。AZD5438是一种细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)抑制剂,在体外试验中,AZD5438可通过抑制CDK底物的磷酸化,从而阻断细胞周期。本试验目的是探索AZD5438对猪孤雌激活与体细胞核移植胚胎体外发育的影响,为研究新型的MPF抑制剂,优化猪卵母细胞体外激活程序奠定基础。本研究主要内容及结果如下:1.试验探索了 AZD5438的最佳处理条件。采用不同处理浓度(10μM,20μM和50μM)的AZD5438分别处理电激活后的猪卵母细胞孤雌激活(Parthenogenetic Activation,PA)胚胎,通过比较体外猪PA囊胚率得出,添加10μM AZD5438的试验组囊胚率最高,并且显着高于5 μg/ml细胞松弛素 B(cytochalasin B,CB)组(46.4%vs.34.5%,P<0.05)。随后,采用10μM AZD5438分别处理电激活后的猪PA胚胎不同时间(2h,4h和6h)。结果表明,在10μMAZD5438处理4 h的条件下,猪PA囊胚发育率高于其他时间组(42.8%vs.38.6%,37.2%),但并无显着差异性。2.试验将 AZD5438 和 6-二甲基氨基嘌呤(6-dimethylaminopurine,6-DMAP)对猪 PA 胚胎与体细胞核移植(Somatic Cell Nuclear Transfer,SCNT)胚胎早期发育的影响进行比较。采用10μMAZD5438和2mM6-DMAP分别处理电激活后的猪PA胚胎和猪SCNT胚胎4h,比较PA囊胚率和猪SCNT囊胚率。结果表明,10μM AZD5438处理4 h的条件下得到了与6-DMAP处理组相似的猪PA囊胚率(42.4%vs.34.3%)和SCNT囊胚率(13.40%vs.11.11%)。3.试验对经10μMAZD5438处理4h后得到的猪PA囊胚进行核型分析。结果表明,10μM AZD5438组猪囊胚中60%为二倍体,10%猪PA囊胚的为单倍体,10%猪PA囊胚的为四倍体,20%猪PA囊胚的为杂合体。4.试验将使用10μM AZD5438和5 μg/ml CB处理4h得到的猪PA胚胎内成熟促进因子(MPF)活性水平进行测定。结果表明,10μMAZD5438处理显着降低猪PA胚胎中MPF活性水平(125.8 vs.288.7,P<0.05)。5.试验采用Real-time PCR方法检测多能相关基因(Sox2、0ct4和Nanog)和凋亡相关基因(Bcl-2和Bax)的相对表达量,研究11μ AZD5438处理猪孤雌激活胚胎4 h后,对基因表达、胚胎发育能力的影响。结果表明,10 μM AZD5438处理猪PA胚胎4h,对多能相关基因(Sox2、0ct4和Nanog)和凋亡相关基因(Bcl-2和Bax)的相对表达水平与CB对照组(5μg/mml)无显着差异。上述研究结果表明,AZD5438通过降低猪PA胚胎内MPF活性水平来提高猪PA胚胎体外发育能力,并在10μM AZD5438处理4h的条件下,能够提高猪孤雌激活胚胎与体细胞核移植胚胎体外发育水平。除此之外,孤雌囊胚中多能性相关基因(Sox2、Oct4和Nanog)和凋亡相关基因(Bax和Bcl-2)的相对mRNA表达水平没有差异。证明AZD5438处理能够提高孤雌胚的体外发育水平,可作为一种新型MPF抑制剂应用于卵母细胞激活体系之中。(本文来源于《延边大学》期刊2017-05-19）
余朝阳[4]（2017）在《抗氧化剂对小鼠孤雌胚胎体外发育的影响》一文中研究指出目的研究不同浓度谷胱甘肽(GSH)、维生素E(VE)、维生素C(VC)对小鼠孤雌激活胚胎体外发育的影响,探讨叁种抗氧化剂提高孤雌胚胎发育能力的适宜浓度,为改善胚胎体外培养体系及提高孤雌胚胎体外发育潜能提供实验依据。方法本实验以CD-1?小鼠为研究对象,根据不同的抗氧化剂分为叁个实验组,每组设置4个浓度点,每个浓度点随机分配10只雌性小鼠。谷胱甘肽组设置0mmol/L(空白对照组)、0.5mmol/L、1mmol/L、1.5mmol/L四个浓度点;维生素E组设置0μmol/L(空白对照组)、50μmol/L、100μmol/L、150μmol/L四个浓度点;维生素C组设置0μmol/L(空白对照组)、100μmol/L、200μmol/L、300μmol/L四个浓度点。对小鼠促排卵后取卵团,体外进行孤雌激活。将激活后的卵母细胞分配到含有不同浓度抗氧化剂培养液中,观察、计数各发育阶段卵裂率、囊胚形成率、囊胚孵出率等指标,并在卵裂期和囊胚期阶段抽取样本在透射电镜下观察抗氧化剂对孤雌胚胎细胞微结构的影响。结果1谷胱甘肽(GSH)组中,各浓度点小鼠孤雌胚胎卵裂率比较差异无统计学意义(P>0.05),囊胚形成率和囊胚孵出率之间差异均有统计学意义(P<0.05);GSH浓度为1mmol/L时所获得的卵裂率、囊胚形成率、囊胚孵出率较高。透射电镜下观察添加谷胱甘肽实验组比对照组细胞器结构良好,线粒体空泡及细胞凋亡现象较少。2维生素E(VE)组中,各浓度点卵裂率、囊胚形成率、囊胚孵率比较差异均有统计学意义(P<0.05);VE浓度为100μmol/L获得的卵裂率、囊胚形成率、囊胚孵出率较高。透射电镜下观察添加VE实验组与对照组比较细胞微结构良好,线粒体空泡及细胞凋亡现象少。3维生素C(VC)组中,小鼠孤雌胚胎各浓度点卵裂率、囊胚形成率、囊胚孵出率比较差异均有统计学意义(P<0.05);200μmol/L组的卵裂率、囊胚形成率、囊胚孵出率较高,300μmol/L组的卵裂率、囊胚形成率、囊胚孵出率较低。透射电镜下观察200μmol/L组与对照组比较细胞器结构良好,300μmol/L组比对照组线粒体空泡及细胞凋亡现象增多。4对1.0mmol/L谷胱甘肽、100μmol/L维生素E、200μmol/L维生素C进行比较,200μmol/L VC获得的卵裂率、囊胚形成率和囊胚孵出率均最高,与其它两种浓度的抗氧化剂比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论1胚胎培养液中添加一定浓度的抗氧化剂对小鼠孤雌胚胎体外发育有促进作用,1mmol/L GSH、100μmol/L VE、200μmol/L VC是提高发育潜能的适宜浓度。2300μmol/L VC显着降低小鼠孤雌胚胎的发育潜能,提示高浓度的VC可能对孤雌胚胎产生不良影响。3叁种不同浓度抗氧化剂中,200μmol/L的VC对小鼠孤雌胚胎体外发育促进作用最明显,能够获得较高的卵裂率、囊胚形成率及囊胚孵出率。(本文来源于《华北理工大学》期刊2017-04-14）
钟小毛[5]（2017）在《小鼠孤雌激活胚胎干细胞体外发育潜能的探讨》一文中研究指出目的研究小鼠孤雌囊胚(实验组)及精卵结合囊胚(对照组)A、B、C叁个级别内细胞团(ICM)形成胚胎干细胞的发育潜能,为探索孤雌胚胎发育特点、发育潜能以及孤雌胚胎干细胞后续分化能力提供实验数据。方法应用HMG和HCG联合法雌鼠促排卵,实验组的MⅡ卵化学联合法激活形成孤雌胚胎,对照组合笼饲养、自然受精形成受精卵,两组体外培养至囊胚阶段,分别获取A、B、C叁个级别的内细胞团,置于饲养层细胞进行传代培养至干细胞阶段,检测不同组间胚胎干细胞标志物碱性磷酸酶和端粒酶表达水平,并应用透射电子显微镜观察各组胚胎干细胞的形态和超微结构。结果实验组与对照组囊胚的A、B级内细胞团形成的胚胎干细胞标志物碱性磷酸酶表达水平相同(A级两组68.39±7.92、65.79±7.42;B级两组66.5±8.32、66.16±8.68),差异不显着(P>0.05);两组囊胚的C级内细胞团形成的胚胎干细胞碱性磷酸酶表达水平不同(C级两组24.98±4.37、44.26±4.19),实验组较低,差异具有统计学意义(P<0.05)。实验组内比较,囊胚A级、B级内细胞团形成的孤雌胚胎干细胞碱性磷酸酶表达水平相同(A级68.39±7.92;B级66.5±8.32),差异不显着(P>0.05),C级内细胞团形成的孤雌胚胎干细胞碱性磷酸酶表达水平低于A级、B级(C级24.98±4.37),差异有统计学意义(P<0.05)。实验组与对照组囊胚的A、B级内细胞团形成的胚胎干细胞标志物端粒酶表达水平相同(A级两组10.18±1.52、10.00±1.24;B级两组10.00±1.50、10.11±1.43),差异不显着(P>0.05);两组囊胚的C级内细胞团形成的胚胎干细胞标志物端粒酶表达水平不同(5.67±1.43、8.94±0.99),实验组较低,差异具有统计学意义(P<0.05);实验组内比较,孤雌囊胚的A级、B级内细胞团形成的孤雌胚胎干细胞标志物端粒酶表达水平相同(A级10.18±1.52、B级10.00±1.50),差异不显着(P>0.05);孤雌囊胚C级内细胞团形成的孤雌胚胎干细胞端粒酶表达水平低于A级与B级(C级5.67±1.43),差异有统计学意义(P<0.05)。透射电子显微镜下观察孤雌囊胚A、B级内细胞团形成的孤雌胚胎干细胞的超微结构完整性保持较好、形态简单规整,细胞间隙基本不可见,皮质区内含有大量球状线粒体,体积小且数量多,形态正常,胞质内仅可见少量空泡;孤雌囊胚C级内细胞团形成的孤雌胚胎干细胞的超微结构不规则,核糖体数目较少,形态也相对不规整,体积明显肿胀变圆,凋亡情况较常见,细胞基质增多变浅,嵴减少或消失,部分细胞胞质内线粒体肿胀失去正常形态,部分转变为形态、大小不等的空泡。结论1.小鼠孤雌囊胚A、B级内细胞团形成的孤雌胚胎干细胞碱性磷酸酶、端粒酶表达活性相同,C级内细胞团形成的孤雌胚胎干细胞碱性磷酸酶、端粒酶表达活性低于A、B级内细胞团。2.小鼠孤雌囊胚具有较好的发育潜能及后续分化能力,A级与B级内细胞团后续发育潜能较好,尤以A级最佳。(本文来源于《华北理工大学》期刊2017-04-14）
张宇辰,朱海瑛,金龙,郭庆,李啸晨[6]（2016）在《茴香霉素结合电激活对孤雌激活和体细胞核移植胚胎体外发育的影响》一文中研究指出引言/目的茴香霉素,一种蛋白合成抑制剂,先前的研究证实了茴香霉素在牛的孤雌激活(PA)和体细胞核移植(SCNT)当中对比常用的MPF抑制剂二甲胺基嘌呤(6-DMAP)能够显着提高PA和SCNT的囊胚率。但其对猪的PA和SCNT的影响尚未见报道,我们首次使用茴香霉素在电激活之后处理猪的PA和SCNT胚胎并评估茴香霉素对胚胎随后发育的影响。材料方法实验中核移植和电激活方法参照Yin等中的方法。在结合电激活观察不同处理浓度(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十八届学术研讨会暨中日韩第四届动物繁殖学术交流会论文集》期刊2016-08-18）
李运生,童彬彬,刘晓蕊,凌英会,方富贵[7]（2015）在《生长素对猪孤雌激活胚胎体外发育的影响及其受体基因的表达模式》一文中研究指出为探明生长素及其受体GHSR-1a在胚胎早期发育中的作用,以猪孤雌激活胚胎为研究对象,在其体外发育过程中添加不同浓度生长素,观察胚胎发育速度和发育效率,并用荧光定量PCR检测猪孤雌激活胚胎早期发育过程中生长素特异性受体基因GHSR-1a的表达。结果显示,相对于对照组,添加10.0 mg/L生长素可以显着提高4-细胞胚胎、8-细胞胚胎、桑葚胚的发育率(P<0.05),并能加快4-细胞胚胎、8-细胞胚胎、桑葚胚的发育速度(P<0.05)。GHSR-1a mRNA在2-细胞期到桑葚胚期保持较高表达水平,囊胚期后显着下降(P<0.05);免疫荧光染色表明GHSR-1a在猪孤雌激活胚胎各发育时期均有表达,4-细胞期、8-细胞期和桑葚胚期的表达量显着高于囊胚期(P<0.05)。推测生长素通过提高GHSR-1a的表达来提高猪孤雌激活胚胎的发育速度和效率。(本文来源于《江苏农业学报》期刊2015年04期）
岑文,华再东,郑新民,肖红卫,张立苹[8]（2015）在《卵丘细胞对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育的影响》一文中研究指出为探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)的添加浓度及脱卵丘细胞时间对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育的影响。试验通过在体外成熟液中添加不同浓度(0、10、15、20、30、40ng/mL)的EGF来研究其对培养44h的卵母细胞成熟率以及孤雌胚胎发育的影响;在培养开始后的不同时间(18、24、38、44h)进行脱卵丘细胞处理来研究不同时间脱卵丘处理对培养44h的卵母细胞成熟率以及孤雌胚胎发育的影响。结果表明,成熟培养基中添加10ng/mL EGF能显着提高卵母细胞的卵裂率和囊胚率(P<0.05)。共培组和独培组卵母细胞培养18h后脱卵丘细胞成熟率均低于44h,但差异不显着(P>0.05);共培组卵母细胞培养18h后脱卵丘细胞的卵裂率和囊胚率显着高于培养44h(P<0.05);独培组卵母细胞培养18h后脱卵丘细胞的卵裂率与44h无显着差异(P>0.05),但囊胚率显着高于培养44h后脱卵丘细胞(P<0.05)。添加10ng/mL EGF对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育较好;卵母细胞培养18h后脱卵丘细胞可提高孤雌胚胎早期发育能力。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2015年03期）
易康乐,雷虹,李纯锦,陈露,燕海峰[9]（2014）在《NGF和BDNF对猪孤雌激活胚胎体外发育的影响》一文中研究指出在NCSU-23改良培养液中分别添加不同质量浓度的脑源性神经生长因子(不rain-derived neurotrophic factor,BDNF)和神经生长因子(nerve growth factor,NGF),观察其对猪孤雌激活胚胎体外生长的影响。结果显示:在培养液中添加40μg/L的BDNF,可促进猪孤雌激活胚胎的囊胚形成;在猪PA胚胎培养液中添加不同质量浓度的NGF,对猪孤雌激活胚胎的在卵裂率、囊胚率和囊胚孵化率影响不明显。结果表明,在NCSU-23改良培养液中添加一定质量浓度的BDNF可促进猪孤雌激活胚胎体外培养过程中囊胚的形成。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2014年06期）
马力,袁宁[10]（2013）在《体外培养时间和表皮生长因子对牦牛卵母细胞成熟及孤雌胚胎体外发育的影响》一文中研究指出研究在成熟液中添加表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)以及成熟时间对牦牛卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育的影响,以确立牦牛卵母细胞体外成熟的最佳体系.结果表明,成熟液中添加EGF组的成熟率明显高于未添加组(P<0.05),并且牦牛卵母细胞的成熟率随着EGF添加的浓度增加也不断上升;随着体外培养时间的延长,成熟率逐渐增加,培养24 h后成熟率趋于稳定;胚胎体外培养液中添加EGF能显着提高孤雌胚胎的8-细胞和囊胚形成率(P<0.05).由此推测:在体外培养22-24 h,且添加40μg/mL EGF最有利于牦牛卵母细胞体外成熟;胚胎培养液中添加40μg/mL EGF能显着提高牦牛孤雌胚胎的体外发育能力.(本文来源于《西南民族大学学报(自然科学版)》期刊2013年06期）
孤雌胚体外发育论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
孤雌激活与体细胞核移植在动物育种、生产转基因动物、建立动物模型、保护珍稀濒危动物、提供人造器官异种移植研究以及发育生物学的研究等方面有着重要的作用与意义。而卵母细胞激活是影响孤雌激活和体细胞核移植效率的重要因素之一。同时也是确定孤雌激活和核移植以及随后的克隆胚胎的发育的基本要素之一。因此,如何有效提高卵母细胞激活效率具有十分重要的意义。而茴香霉素是一种蛋白合成抑制剂,首次在牛孤雌激活胚胎和体细胞核移植激活处理上应用,发现能够显着提高牛的孤雌激活胚胎和体细胞核移植胚胎囊胚率并提高囊胚质量。但茴香霉素应用在猪的孤雌激活胚胎和体细胞核移植胚胎尚未见报道。所以在本研究中,我们利用蛋白质合成抑制剂茴香霉素在电激活后处理猪的孤雌激活胚胎和体细胞核移植胚胎来观察实验效果。我们获得以下试验结果:1.茴香霉素,CB组与未处理组对比胚胎排出第二极体。实验发现茴香霉素和未处理组与CB组相比在排出第二极体上差异显着。(51.9%and 51.6%vs.14.3%p<0.05),结果说明茴香霉素不能抑制第二极体的排出。2.茴香霉素在1μg/mL与其他各个浓度下的胚胎发育到2-4细胞阶段有显着差异(table3-2)。通过Hoechest 33342染色的方法观察茴香霉素处理组与对照组(CB)在囊胚的细胞数上没有着显着性差异(table2),0.01 μg/mL,0.1 μg/mL药物浓度与1 μg/mL及对照组在达到囊胚的效率上有显着地差异(31.8%and 27.1%vs.0 and 16.7%,p<0.05)。在最佳浓度下的茴香霉素处理不同的时间下观察胚胎发育能力。分别测量了 Oh,2h,4h,6h,下胚胎的发育能力,结果显示:茴香霉素是在处理2,4,6h下孤雌激活胚胎有最好的发育能力(39.5%,33.3%and29.2%vs.20.3%,p<0.05)。同样,在胚胎发育到 2-4 细胞时期,以及囊胚平均细胞数上都没有显着差异。以上结果表明:茴香霉素的最佳处理条件为0.01 μg/mL下作用2h。3.6-DMAP,茴香霉素与未处理组对孤雌激活胚胎的影响,茴香霉素处理组和6-DMAP处理组与未处理组相比,在2-4细胞时期和囊胚平均细胞数上并无显着性差异,在胚胎发育情况上,茴香霉素处理组和6-DMAP处理组与未处理组相比,能够显着提高孤雌激活胚胎发育能力(37.6%and 30.0%vs 19.9%,p<0.05)。4.孤雌激活胚胎在0.01μg/mL茴香霉素作用4h下测量MPF活性,结果显示茴香霉素处理下的孤雌生殖胚胎MPF水平明显低于对照组(361.3 pg/ml vs 254.2 pg/mL,p<0.05)。5.在染色体我们对激活7天左右的分别来自茴香霉素处理组,6-DMAP处理组和对照组(CB)处理的早期囊胚进行核型分析。结果显示茴香霉素与6-DMAP处理组和对照(CB)差异显着(33.3%vs60%and 50%,p<0.05)以上结果表明:在茴香霉素处理下可以降低囊胚染色体异常比例。6.PA胚胎在0.01μg/mL茴香霉素作用4h下通过RT-PCR检测多能性基因(Sox2,Oct4,Nanog)和凋亡基因(Blc-2,Bax),实验结果表明茴香霉素对PA囊胚的多能性基因和凋亡基因并无显着性影响。7.6-DMAP,茴香霉素与未处理组对SCNT胚胎的影响,茴香霉素处理组和6-DMAP处理组与未处理组相比,在2-4细胞时期和囊胚平均细胞数上并无显着性差异,在胚胎发育情况上,茴香霉素处理组与未处理组相比,能够显着提高SCNT胚胎发育能力(18.3%vs 4.2%p<0.05)。结论:1)茴香霉素能够通过改变MPF活性来影响孤雌激活胚胎和体细胞核移植胚胎的发育能力。2)茴香霉素能够显着降低孤雌激活囊胚染色体异常比例。3)茴香霉素对孤雌激活囊胚的多能性基因(Sox2,Oct4,Nanog)和凋亡基因(Blc-2,Bax)并无显着影响。其中,茴香霉素处理的最佳条件为0.01 μg/mL,2h。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
孤雌胚体外发育论文参考文献
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