导读:本文包含了单细胞克隆论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:单细胞,干细胞,转录,胚胎,肿瘤,阿霉素,细胞株。
单细胞克隆论文文献综述
王智锋[1]（2019）在《单细胞全外显子组测序在转移性结直肠癌克隆进化中的初步应用》一文中研究指出癌症是全人类共同面对的“健康杀手”之一,肿瘤转移是癌症致死的重要原因。在结直肠癌中,肝转移是常见的肿瘤转移类型。随着二代测序技术在肿瘤领域的普及应用,结直肠癌中存在广泛的遗传异质性,尤其是在转移性结直肠癌中,肿瘤之间和肿瘤内部的异质性以及肿瘤转移的深层机制仍然未能彻底得到剖析。单细胞测序技术可以从单细胞水平揭示肿瘤内部每个细胞的基因型和表型,非常适用于研究肿瘤的异质性、肿瘤细胞谱系追踪和肿瘤微环境等问题。随着单细胞测序技术在肿瘤科学和临床研究上的应用,肿瘤的诊断和治疗水平将得到很大的提高。在本研究中,本研究从单细胞基因组层面研究了1例转移性结直肠癌患者102个单细胞的遗传特征和肿瘤克隆演化过程。首先,本研究通过手术切除收集了患者结直肠癌原发灶的肿瘤组织和癌旁组织,以及肝转移灶的肿瘤组织,同时利用单细胞分离技术分离获得高质量的肿瘤单细胞并采用多重链置换扩增方法进行单细胞全基因组的扩增。通过全外显子组深度测序和低深度全基因组测序,检测不同肿瘤病灶来源的组织的单碱基水平遗传变异和拷贝数变异,以及单细胞层面的体细胞突变。分析发现原发肿瘤与转移肿瘤的突变位点和突变基因均存在60%的一致性,包括结直肠癌中常见的TP53、BRAF、SMAD4等基因,推断该名患者的肿瘤转移符合中晚期转移模型。此外,通过单细胞水平的肿瘤细胞谱系追踪分析,深入分析了部分关键的肿瘤驱动基因突变在转移性结直肠癌肿瘤演化过程中的作用,发现APC抑癌基因的突变模式变化可能对该名患者的肿瘤发生发展起到重要作用。本研究还发现了肿瘤形成早期的驱动基因变异,促使肿瘤转移的关键驱动基因SMAD4的突变,在肿瘤演化的晚期存在与细胞分裂、细胞黏附相关的基因变异,如CDH23、DLG2等。最后,本研究从单细胞基因组层面深入分析了转移性结直肠癌的肿瘤演化进程,可以精细推断具有不同遗传特征的细胞亚群在肿瘤发生发展不同阶段的关键作用。将来单细胞基因组测序技术在通量和成本上得到突破,大规模的单细胞全基因组测序必然会丰富我们对肿瘤转移机制的认识。单细胞测序技术的发展及其临床实践必将对转移性癌症患者的临床诊断、治疗产生深远的影响。(本文来源于《华南理工大学》期刊2019-03-22）
宋明民[2]（2018）在《利用单细胞克隆胚胎转录组挖掘体细胞重编程新的分子标记》一文中研究指出哺乳动物卵母细胞通过体细胞核移植(SCNT)可以将体细胞重编程为全能状态以实现动物克隆。然而,由于重编程过程中存在的诸多缺陷,大多数克隆胚胎在早期阶段发育阻滞。对于核移植胚胎发育率低的问题,研究的焦点基本在其早期发育的分子机理上,到目前为止,仅发现通过组蛋白去甲基化酶的异位表达减少H3K9me3可以大大促进SCNT胚胎发育,其潜在的分子调控机制仍没有被精准解析。本论文中,我们首先综合分析了小鼠体外受精和不同发育命运的体细胞核移植胚胎的转录组表达图谱。通过系统分析不同发育命运克隆胚胎中全基因组表达分子差异,我们发现细胞凋亡、自噬、胞吞和DNA修复等重要功能通路的异常激活是核移植2-cell胚胎阻滞的关键因素;干细胞多能性维持、DNA修复、细胞周期和自噬的异常激活是核移植4-cell胚胎阻滞的标志性事件。通过对不同发育命运的SCNT胚胎之间的转录组比较,我们在转录因子、多能性维持基因、组蛋白表观修饰因子、DNA/RNA去甲基化酶基因等与核重编程调控相关的关键因子中筛选出一系列可能影响核移植胚胎2-cell和4-cell胚胎发育阻滞相关核心基因簇:Ascl2、Bmp7、Kdm4d、Kat2b、Srcap和Zfp217基因属于克隆胚胎2-cell阻滞关键调控因子;Sall4、Ctr9、Vegfa、Hinfp、Kdm3b、Kdm5a、Kdm5b、Ctnnb1、Hdac4、Brca2、Yeats4、Atxu7和Arid4b在克隆胚胎4-cell是发挥重要的调控作用,这些基因在未阻滞克隆胚胎中高表达;Zscan4c、Id1、Pou6f1、Cited1、Nanog、Dppa2、Fgf4、Med17、Cnot1、Kdm4b、Kdm3a、Kdm7a、Kat8、Elp6、Eid1、Gadd45a、Tet1、Tet2等基因在不同命运克隆胚胎2-cell和4-cell与正常胚胎相比均存在差异,属于克隆胚胎持续未正常激活的分子标记,其中小部分基因已有研究报道,这些分子差异也许能解释SCNT胚胎发育阻滞的现象。此外,我们还对比分析了组蛋白去甲基化酶Kdm4b/4d以及Kdm5b能够克服核移植胚胎发育阻滞、提高克隆胚胎发育潜能的潜在分子机制,发现关键性的通路及核心基因簇的激活发挥了重要作用。Kdm4b/4d可以在2-cell促进维持端粒的关键调控因子Zscan4c和Zscan4d的表达。此外,我们还发现Kdm4d在2-cell阶段可以特异性激活Kdm5b、Tet1和Id1,鉴定出Kdm4d显着提高SCNT胚胎细胞囊胚率分子标记。另外,我们发现Kdm5b在4-cell可以激活干细胞维持和DNA修复等通路以及关键因子Ubtfl1、Nr5a2、Prdm14、Thoc5、Dppa3和Klf5的表达,这些关键基因的激活可能是组蛋白去甲基化酶可以克服SCNT胚胎阻滞的重要因素之一。我们的研究发现为探索调控SCNT介导的体细胞重编程的潜在分子机制和关键因子提供了重要理论依据,为深入阐明细胞重编程的分子调控机制提供一定帮助。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2018-06-01）
郭紫轩[3]（2018）在《基于单细胞技术的抗ADMA兔单克隆抗体的制备》一文中研究指出[研究目的]目前心血管疾病(CVD)仍是全球疾病导致死亡的主要原因,而我国心血管疾病占城乡居民总死亡原因的首位。已有临床试验表明,内源性一氧化氮合酶(NOS)的抑制剂——不对称二甲基精氨酸(ADMA)和单甲基精氨酸(L-NMMA)可竞争抑制NOS的结合位点,减少内源性一氧化氮(NO)的产生,导致血管内皮功能障碍和心血管相关疾病的发生发展,如高脂血症、糖尿病、高血压、心力衰竭等。人体ADMA的浓度在一个狭窄的范围内,ADMA浓度的升高与增加心血管疾病的患病风险相关。现阶段检测ADMA的方法比较复杂且耗时,为ADMA检测带来了困难。相比于鼠单克隆抗体,兔单克隆抗体具有更高的亲和力和高特异性、识别更多的新型表位、可识别鼠源蛋白抗体等优点,故制备抗ADMA的兔单克隆抗体,可用来改善目前ADMA的检测技术,也可为其他临床小分子标志物单克隆抗体的制备提供新思路和帮助。同时也为临床医师提供准确、快速、稳定及可靠的检测结果,为心血管相关疾病的早期诊断、治疗提供新的依据。[实验方法]1、动物免疫与抗体效价检测使用KLH-SMCC-Cys-ADMA免疫新西兰大白兔,在检测抗体产生情况的同时,采集兔子外周血进行流式细胞分析,检测是否有抗原特异性细胞产生;采用ELISA以及Western blot进行免疫特异性和抗体效价分析。2、抗体可变区及恒定区序列的获取将兔子淋巴结和脾脏处理成单个细胞,流式分选出特异性浆细胞和B细胞,提取总RNA,利用cDNA5'末端快速扩增技术(5'RACE),合成cDNA,进行PCR获取可变区序列以及恒定区序列。3、获取抗体轻链和重链表达框将序列正确的恒定区进行PCR,利用靶向选择性联合PCR(TS-jPCR)技术连接抗体可变区和恒定区,构建轻链和重链的表达框,用于下一步蛋白表达。[实验结果]1、流式细胞分析显示在免疫前,2只兔子体内的抗原特异性B细胞百分比分别为0.946%和0.403%、抗原特异性浆细胞分别占0.403%和0.881%,存在少量的抗原特异性细胞。免疫后产生的特异性浆细胞和B细胞的百分比较免疫前有所增加,说明兔子经过免疫体内产生一定量的抗原特异性细胞。2、western blot免疫特异性分析显示,发现在64kD附近产生特异性条带,进行抗体滴度检测,1:50000稀释后非特异性结合减少,表明兔子经过免疫后产生的抗ADMA抗体特异且效价较高。3、ELISA法检测抗体效价结果显示,免疫后的OD值是免疫前OD值的2倍以上,即有差异,表明兔子免疫后产生特异性抗体同时测得效价高达1:50000。4、从摘取兔子的淋巴结和脾脏细胞进行流式细胞分选中,分选出抗原特异.性细胞利用5' RACE技术获取其可变区与恒定区序列,琼脂糖凝胶电泳结果发现可变区出现特异性条带。5、恒定区经测序结果显示,轻链恒定区与参考序列完全相符,重链恒定区与参考序列差两个氨基酸。获取恒定区表达载体框实验结果显示,通过琼脂糖凝胶电泳得出轻链的条带约在4000bp附近,重链的条带约在5000bp附近,与理论值接近。[结论]1、本课题使用的抗原能使兔子体内产生抗ADMA特异性抗体。设计的引物可成功获取抗ADMA抗体轻链和重链的恒定区序列,使用TS-jPCR连接抗体可变区和恒定区,构建轻链和重链的表达框,为下一步蛋白表达打下基础。2、可利用5' RACE技术获取抗体轻链和重链的可变区的序列,为后续获取单细胞可变区序列和进一步建立临床检验ADMA的方法打下基础。(本文来源于《昆明医科大学》期刊2018-05-01）
李佩文[4]（2018）在《微流控芯片单细胞克隆形成实验用于乳腺癌干细胞靶向药物筛选》一文中研究指出目的:利用肿瘤干细胞(Cancer Stem Cells,CSCs)的单细胞克隆形成特性,发展基于微流控芯片单细胞克隆形成实验的乳腺癌干细胞靶向药物筛选方法。方法:研究设计并加工了一种具有3840单细胞捕获微池阵列的微流控芯片,并考察了其单细胞操控效果。实验选用MCF-7、MDA-MB-231及T47D叁种乳腺癌细胞系,在微流控芯片上完成了单细胞阵列构建、长期(14天)细胞培养、原位荧光呈像分析以及细胞药物作用实验。实验分别使用紫杉醇、阿霉素、硫链丝菌素和盐霉素作用于芯片单细胞阵列,根据单细胞克隆形成实验结果评价药物对CSCs的选择性杀伤作用。结果:在优化的条件下,芯片单细胞捕获效率达54.2%,相应的单次测试单个肿瘤细胞数量超过2000。捕获前后细胞直径分布检测结果提示,芯片单细胞捕获没有尺寸选择性。紫杉醇和阿霉素显示了部分单细胞克隆形成抑制效应,两种药物处理后MDA-MB-231单细胞成瘤抑制率为39.10%和32.35%,对MCF-7细胞抑制率为16.77%和14.79%。硫链丝菌素和盐霉素显示了完全的单细胞克隆形成抑制效应,其中硫链丝菌素对MDA-MB-231和MCF-7细胞的单细胞成瘤抑制率为100%和96.41%,盐霉素的抑制率为100%和100%。结论:研究发展了一种基于微流控芯片单细胞克隆形成实验的乳腺癌干细胞靶向药物筛选方法。这种芯片方法能够高效构建单细胞阵列并以集成化的方式完成整个分析过程。研究确认了微流控芯片单细胞克隆形成实验的乳腺癌干细胞靶向药物筛选能力。实验结果显示,肿瘤干细胞靶向药物可以完全地抑制单细胞克隆形成,而非靶向药物的抑制效应则是部分的。这种微流控芯片单细胞分析技术具有操作简便、分析高效的优势,因而是CSCs靶向药物筛选的有力工具。(本文来源于《广州医科大学》期刊2018-05-01）
李登坤[5]（2017）在《基于单细胞测序技术分析小鼠不同二细胞克隆胚胎转录组差异》一文中研究指出在体细胞核移植领域上最为着名的是Gurdon和Wilmut两人,从Wilmut成功缔造出世界上第一例克隆哺乳动物——克隆绵羊“多莉”以来,极大的促进核移植技术在哺乳动物上应用的研究。尽管到目前为止已有许多种哺乳动物被成功克隆出来,但是从第一只克隆动物的报道距现在已有近59年的历程,当前在高等生物中的核移植效率依然是很低的,大约有1%~3%的出生率。对于核移植胚胎发育率低的科学问题,也因核移植技术的火热而成为热点研究范畴。随后把研究的焦点聚集在克隆胚胎早期发育的机理上。克隆胚胎最为明显的现象之一是早期卵裂阻滞,其发生的时间和胚胎基因组激活的时期一致,在小鼠上是发生在2-cell阶段,其他物种各有差异。基于克隆胚胎发育的问题,本实验室选用B6D2F1杂交小鼠的体内正常胚胎、卵丘细胞核移植胚胎和MEF核移植胚胎叁组的2-cell时期的胚胎,作为研究材料,运用单细胞转录组测序技术围绕着2-cell胚胎发育阻滞问题分析转录组数据。通过转录组数据分析得出,筛选出了部分可能影响2-cell胚胎阻滞相关的基因。运用聚类、热图和GO注释等分析方法分析不同胚胎的2-cell时期转录组数据,本实验的测序结果揭示了:在本文中筛选出来的高表达差异基因中,核移植胚胎显着性下调表达这类基因;在筛选出来的叁组胚胎中差异表达的基因,核移植胚胎相对于体内正常胚胎,有更多数量的差异表达基因;在表观遗传相关基因、部分OSKM转录因子和细胞周期相关基因的转录组数据分析展示了核移植胚胎与体内正常胚胎之间基因表达水平上差异;对转录组测序中的新转录本基因的分析显示出了,这些新转录本基因在体内正常胚胎普遍为高度活跃的状态,而在核移植胚胎中表达水平较低,且在卵丘细胞核移植胚胎中最不活跃。综上所述,在不同2-cell胚胎转录本中存在显着性差异。比较本实验中我们分析出来的差异表达基因,其中小部分是已有研究报道的,功能是与2-cell阻滞相关的基因,有大部分的基因虽未有在2-cell胚胎发育中功能的研究,我们可以推测这部分基因同样是与2-cell胚胎阻滞紧密相关。用敲低或过表达等实验方法,矫正这些在2-cell时期异常表达的基因可能是提高早期胚胎发育率的一种解决途径。通过对本实验的转录组数据分析,其结果不仅揭示了核移植胚胎与体内正常胚胎转录组之间的差异,同时也为研究核移植胚胎2-cell时期阻滞相关的研究提供了宝贵的线索和指导。(本文来源于《阜阳师范学院》期刊2017-05-25）
向卫军,杨涛涛,李润成,余兴龙[6]（2017）在《BHK-21单细胞克隆敏感株筛选及日本脑炎病毒分离》一文中研究指出为筛选出日本脑炎病毒(JEV)敏感度高的BHK-21细胞株,采用终点稀释法从母代BHK-21混合细胞中分离单细胞克隆株,应用接种BHK-21克隆株方法,从JEV阳性蚊子样品研磨液中分离病毒,筛选出的3号单细胞克隆株经3次传代后细胞产生明显病变,分离到1株JEV,5号单克隆株培养物核酸检测呈阳性,但是不产生细胞病变,母代混合细胞没有病变,JEV核酸检测阴性。根据1、3型JEV的prM与E基因设计4对引物初步鉴定分离株基因型,鉴定分离株为1型JEV。综合以上结果,构建的BHK-21单细胞克隆株比BHK-21混合细胞对分离JEV株敏感,更适合JEV的分离与培养。(本文来源于《动物医学进展》期刊2017年05期）
王卉,冯甜甜,王冰蕊,任思蕊,张玲玲[7]（2017）在《利用单细胞PCR技术高效筛选鉴定CRISPR/Cas9介导的lncRNA敲除克隆细胞株》一文中研究指出CRISPR/Cas9技术可简便、快捷、高效地实现基因的敲除。敲除长非编码RNA(long noncodingRNA,lncRNA)时需同时引入1对guideRNA,将lncRNA基因组的全部或者大部分片段敲除,以实现目的基因功能的缺失。现有鉴定lncRNA敲除细胞株所用的方法一般需单细胞增殖至较多数量,敲除效率较低且筛选耗时耗力。LncRNA DANCR(differentiation antagonizing non-protein codingRNA)在干祖细胞的干性维持过程中起重要作用,且与多种癌症的发生有关,但其作用机制仍未完全明确。作者针对DANCR基因组的3′及5′端设计sgRNA并同时转染到人红白血病细胞系(K562)中。为建立一种高效筛选鉴定lncRNA敲除细胞株的方法,他们先后采用了基因组DNA PCR、少量细胞PCR、单细胞PCR这3种方法来鉴定lncRNA DANCR的敲除情况,系统比较了3种检测方法的优缺点。该文成功建立了利用单细胞PCR技术高效筛选鉴定CRISPR/Cas9介导的lncRNA敲除克隆细胞株的方法。这一方法适用于其他lncRNA敲除情况的鉴定,有助于lncRNA的功能及机制研究。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2017年04期）
韦雪柳[8]（2016）在《舌癌干细胞特性的单细胞克隆实验筛选研究》一文中研究指出目的:1.探讨阿霉素(Adriamycin,ADM)对人舌癌细胞系Tca-8113干预后单细胞克隆培养能否形成全克隆、部分克隆和旁克隆,并对全克隆进行成瘤性检测。2.基于癌干细胞耐药特性,通过应用单细胞克隆培养法和进行裸鼠成瘤实验,以期筛选并富集舌癌肿瘤干细胞样细胞。研究方法:第一部分,以Tca-8113为研究对象,分A、B、C叁组进行单细胞克隆培养和观察研究。A组采用有限稀释法对Tca-8113进行单细胞克隆培养,观察培养所形成的叁种不同形态克隆的特性:克隆形成率、各类克隆构成比和克隆生长曲线;B组用叁种浓度阿霉素(0.01μg/ml ADM,0.05μg/ml ADM和0.1 0μg/ml ADM)对Tca-8113进行体外干预48h后,再采用有限稀释法进行单细胞克隆培养,并同样观察培养后所形成的不同形态克隆的特性;C组则对Tca-8113采用有限稀释法进行单细胞克隆培养2周后,再用叁种不同浓度阿霉素(0.01μg/ml ADM, 0.05μg/mlADM和0.10μg/ml ADM)对培养出的全克隆细胞干预48h,观察干预后一段时期内的全克隆存活情况以及克隆细胞形态变化。第二部分,将A、B、C组存活的全克隆进行传代培养,待细胞传代扩增至2×106个细胞后进行免疫缺陷裸鼠成瘤实验,以检测克隆细胞的致瘤性。实验结果:第一部分实验,A组中经单细胞克隆培养的Tca-8113细胞能形成全克隆、部分克隆和旁克隆,其构成比分别为(49.02±4.44) %,(26.25±1.89) %和(24.72±4.27) %,其总克隆形成率为(57.28±1.81) %。B 组中经 0.01μg/ml ADM,0.05μg/ml ADM 和 0.10μg/ml ADM 体外干预 48h后的Tca-8113干预细胞均能形成克隆。其中,0.011μg/ml ADM干预细胞能形成全克隆、部分克隆和旁克隆,所占的构成比分别为(52.20±1.92) %、(25.31 ±2.30) %和(22.49±1.82) %,总克隆形成率为(65.98±3.12) %;而0.05μg/ml ADM干预细胞或0.10μg/ml ADM干预细胞进行单细胞克隆培养只能形成全克隆,部分克隆与旁克隆均未见形成,总克隆形成率分别为为(0.693±0.140)‰和(0.053±0.032)‰。C 组中 Tca-8113 全克隆经 0.01μg/ml ADM,0.05μg/ml ADM和0.10μg/ml ADM干预48h后的干预克隆细胞存活率分别为(91.15±1.63) %,(61.14±5.35) %和(32.47±1.48) %。第二部分实验结果显示,在A、B、C组中存活全克隆的增殖传代细胞均能在免疫缺陷裸鼠皮下成瘤,成瘤率为100%,且随阿霉素浓度增高,成瘤时间缩短。结论:1.舌癌Tca-8113细胞和阿霉素干预的Tca-8113细胞均具有全克隆形成能力。2.Tca-8113全克隆是肿瘤干细胞克隆的可能性较大,对阿霉素具有较强的抵抗性。3.阿霉素干预Tca-8113全克隆的方法可有效的富集到高致瘤性的舌癌肿瘤干细胞样细胞。(本文来源于《广西医科大学》期刊2016-05-01）
杨帅[9]（2016）在《基于耐药和单细胞全克隆构建肝癌干细胞体外富集模式的实验研究》一文中研究指出背景：肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)是指在肿瘤组织中,极少量具有以无限的自我更新潜能及真正的致瘤能力为最重要特征的肿瘤细胞的群体。肝癌我国最常见的恶性肿瘤,恶性度极高且病情进展很快,病发后的生存时间仅为6个月被称为“癌中之王”,其发病人数也已占到全世界病例的40%,故被列入预防治疗的重点疾病。如何才能积极有效的分离纯化出肝癌干细胞,一直是学术界着眼及研究的重点热点,本课题组选取了肝母细胞瘤HepG2细胞株为研究对象,其来源于一个15岁白人的肝细胞腺瘤组织,因可能是最早分离得到且背景清晰、表型性状稳定等优点,已成为被广泛使用的肝细胞系而应用于肝癌研究的领域内。根据单个细胞全克隆富集方法的优势结合临床广谱抗肿瘤化疗药物阿霉素进行细胞毒性干预,将获得的全克隆肝癌细胞经异种移植实验检测其成瘤性,从而试图建立一种单细胞全克隆加阿霉素干预的改良型肝癌干细胞富集模式。研究发现：单个细胞有效稀释克隆培养法得到的全克隆细胞在裸鼠体内成瘤率达到100%,而在不同浓度阿霉素干预模式下的单个细胞克隆培养,所得到的全克隆比率不尽相同且裸鼠体内成瘤率也有较大差异。研究表明经单个细胞全克隆加阿霉素干预的培养方法较大可能的成为一种新的改良型肝癌干细胞富集模式。目的：观察人肝母细胞瘤HepG2单个细胞培养形成的叁种克隆及阿霉素干预下全克隆裸鼠体内成瘤情况,探讨基于肿瘤干细胞耐药特性和体外单细胞培养形成全克隆现象,建立一种简单易行的肝癌干细胞体外富集模式。方法：选择人肝母细胞瘤HepG2细胞系,以有限稀释法建立体外单细胞克隆培养体系,进行以下两部分实验：1.先观察体外单细胞克隆培养的克隆细胞生长曲线和形成全克隆、部分克隆以及旁克隆等叁类克隆比例后,选取全克隆逐级扩增,最后取106的HepG2细胞进行裸鼠皮下荷瘤实验。2.阿霉素干预HepG2癌细胞克隆的实验模式：(1).先加0.1μMg/mL、0.05μg/mL和0.01μMg/mL梯度浓度的阿霉素干预HepG2细胞48hrs,单个细胞克隆培养后形成的全克隆、部分克隆及旁克隆进行逐级扩增和裸鼠荷瘤实验。(2).先进行单细胞克隆培养,然后只针对全克隆细胞加0.5μg/mL、0.3μg/mL、 0.2μg/mL、0.1μg/mL、0.05μg/mL和0.01μg/mL梯度浓度的阿霉素干预48hrs,观察全克隆生长情况,对于干预后存活的全克隆全部进行逐级扩增和裸鼠荷瘤实验。结果：1.HepG2细胞单细胞培养可形成全克隆、部分克隆和旁克隆等叁种癌细胞扩增生长模式,总克隆形成率为(32.78±9.03)%,其中克隆构成为全克隆(7.12±2.96)%、部分克隆(62.67±13.39)%、旁克隆百分比(30.21±14.87)%；所有全克隆均可逐级扩增,且在106细胞水平裸鼠成瘤率为100%(8/8)。 2.(1)先阿霉素干预后进行单细胞克隆培养,发现仅0.05μg/mL和0.01μg/mL组的全克隆存活,并可逐级扩增培养和100%(3/3、8/8)成瘤。(2)单细胞克隆培养后的全克隆进行阿霉素干预,发现仅0.1μg/mL、 0.05μg/mL、和0.01μg/mL、组全克隆存活,并可逐级扩增培养和100%(5/5、5/5、5/5)成瘤。结论：HepG2细胞体外单细胞培养的全克隆样生长且耐受阿霉素杀伤的细胞群体,极有可能是富含肝癌干细胞,这可能是简单有效体外肿瘤干细胞富集模式。(本文来源于《广西医科大学》期刊2016-05-01）
刘丽杰,林立东,张东向[10]（2015）在《黄芩单细胞克隆愈伤组织酯酶同工酶及过氧化物同工酶酶谱分析》一文中研究指出以黄芩单细胞克隆愈伤组织为试材,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)法,通过分析酯酶同工酶(EST)和过氧化物同工酶(POD)的酶带,研究黄芩单细胞克隆愈伤组织与亲本愈伤组织的遗传特性与品系差异。结果表明:黄芩不同品系单细胞克隆愈伤组织EST谱带间具3个带区特征,最多谱带数品系为4条,最少谱带数品系为3条,其中1号、2号、3号谱带为黄芩单细胞克隆愈伤组织的特征谱带;POD谱带间具4个带区特征,其中1号、3号和7号酶带为特征谱带,EST和POD谱带的有无、宽窄、颜色深浅,相对迁移率大小均不尽相同。黄芩单细胞克隆愈伤组织与亲本细胞愈伤组织既具有亲缘特征又具有品系差异,以期为单细胞克隆品系的遗传特性和品系鉴别提供理论参考。(本文来源于《北方园艺》期刊2015年07期）
单细胞克隆论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
哺乳动物卵母细胞通过体细胞核移植(SCNT)可以将体细胞重编程为全能状态以实现动物克隆。然而,由于重编程过程中存在的诸多缺陷,大多数克隆胚胎在早期阶段发育阻滞。对于核移植胚胎发育率低的问题,研究的焦点基本在其早期发育的分子机理上,到目前为止,仅发现通过组蛋白去甲基化酶的异位表达减少H3K9me3可以大大促进SCNT胚胎发育,其潜在的分子调控机制仍没有被精准解析。本论文中,我们首先综合分析了小鼠体外受精和不同发育命运的体细胞核移植胚胎的转录组表达图谱。通过系统分析不同发育命运克隆胚胎中全基因组表达分子差异,我们发现细胞凋亡、自噬、胞吞和DNA修复等重要功能通路的异常激活是核移植2-cell胚胎阻滞的关键因素;干细胞多能性维持、DNA修复、细胞周期和自噬的异常激活是核移植4-cell胚胎阻滞的标志性事件。通过对不同发育命运的SCNT胚胎之间的转录组比较,我们在转录因子、多能性维持基因、组蛋白表观修饰因子、DNA/RNA去甲基化酶基因等与核重编程调控相关的关键因子中筛选出一系列可能影响核移植胚胎2-cell和4-cell胚胎发育阻滞相关核心基因簇:Ascl2、Bmp7、Kdm4d、Kat2b、Srcap和Zfp217基因属于克隆胚胎2-cell阻滞关键调控因子;Sall4、Ctr9、Vegfa、Hinfp、Kdm3b、Kdm5a、Kdm5b、Ctnnb1、Hdac4、Brca2、Yeats4、Atxu7和Arid4b在克隆胚胎4-cell是发挥重要的调控作用,这些基因在未阻滞克隆胚胎中高表达;Zscan4c、Id1、Pou6f1、Cited1、Nanog、Dppa2、Fgf4、Med17、Cnot1、Kdm4b、Kdm3a、Kdm7a、Kat8、Elp6、Eid1、Gadd45a、Tet1、Tet2等基因在不同命运克隆胚胎2-cell和4-cell与正常胚胎相比均存在差异,属于克隆胚胎持续未正常激活的分子标记,其中小部分基因已有研究报道,这些分子差异也许能解释SCNT胚胎发育阻滞的现象。此外,我们还对比分析了组蛋白去甲基化酶Kdm4b/4d以及Kdm5b能够克服核移植胚胎发育阻滞、提高克隆胚胎发育潜能的潜在分子机制,发现关键性的通路及核心基因簇的激活发挥了重要作用。Kdm4b/4d可以在2-cell促进维持端粒的关键调控因子Zscan4c和Zscan4d的表达。此外,我们还发现Kdm4d在2-cell阶段可以特异性激活Kdm5b、Tet1和Id1,鉴定出Kdm4d显着提高SCNT胚胎细胞囊胚率分子标记。另外,我们发现Kdm5b在4-cell可以激活干细胞维持和DNA修复等通路以及关键因子Ubtfl1、Nr5a2、Prdm14、Thoc5、Dppa3和Klf5的表达,这些关键基因的激活可能是组蛋白去甲基化酶可以克服SCNT胚胎阻滞的重要因素之一。我们的研究发现为探索调控SCNT介导的体细胞重编程的潜在分子机制和关键因子提供了重要理论依据,为深入阐明细胞重编程的分子调控机制提供一定帮助。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
单细胞克隆论文参考文献
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