摘要：目的探讨应用流式细胞仪检测网织血小板的临床应用价值。方法 2012 年7 月至2016 年12 月，本研究选取本院64 例门诊和血液科住院患者的外周血标本，利用流式细胞仪测定外周血RP(%)，利用全自动血液分析仪测定血小板计数。结果 健康体检组经检测后RP(%)值为（7.33±2.17），ITP 患者组RP(%)值为（21.13±6.27），明显高于健康体检组（P＜0.01）。CAA 患者组RP(%)值为（5.82±1.26），明显低于健康体检组（P＜0.05）。AML 患者组和MDS 患者组RP(%)值分别为（8.26±2.45）、（8.12±2.59），与健康体检组相比差异无统计学意义(P＞0.05)。结论利用流式细胞仪检测网织血小板的方法，为网织血小板应用于各类血小板减少性疾病的准确诊断提供了条件，网织血小板在血液病中的检测具有重要的应用价值。
关键词：流式细胞仪；网织血小板；检测；临床应用价值
0 引言
网织血小板(reticdated platelet，RP)是来源于巨核细胞的细胞颗粒，这种细胞颗粒中无核或DNA 成分，但有一定的RNA 含量，而且有能力合成少量的蛋白质，人们把这种RNA含量较高的年轻的血小板称之为网织血小板。其为骨髓新释放进入血液循环的血小板，它能够将骨髓血小板生成情况比较准确地反映出来[1]。本次研究以流式细胞仪对网织血小板实施检测，探索网织血小板变化的规律，为网织血小板应用于各类血小板减少性疾病的准确诊断创造条件。
1 资料与方法
1.1 一般资料
2012 年7 月 至2016 年12 月，本 研 究 选 取 本 院 患 者的外周血标本64 例，64 例患者中32 例为原发性血小板减 少 性 紫 癜(idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP) 患者，15 例为慢性再生障碍性贫血(chronic aplastic anemia，CAA) 患者，10 例为急性非淋巴细胞白血病(acute nonlymphocytic leukemia，AML)患者，7 例为骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome，MDS)患者，选取同期本院体检中心接收的40 例健康体检者作为对照组，血小板检测结果在(100-300)×109／L，肝肾功能正常，将患有心血管疾病、高脂血症、糖尿病和其他内分泌疾病者排除[2]。
（1）管理体制机制不完善。受现行管理体制制约，库区航运管理涉及多个部门。从广西来看，天生桥库区管航运部门有百色海事局，具体由其派出机构隆林办事处监管，营运方面由县交通局下属港航管理处监管。贵州由黔西南州地方海事局兴义海事处具体管理，处下设巴结海事所，白云海事所。云南则由曲靖市交通局罗平海事处具体管理，各省（区）乡镇政府对渡口船舶也有监管责任。
1.2 仪器与试剂
本研究实验仪器为美国BD 公司的FACS Calibur 型流式细胞仪，流式细胞仪所用试剂也为该公司产品。CD41-PE 及TO 染液(贮存液为1 mg／ml 溶解于乙醇，使用前无钙无镁PBS 稀释，均购自上海优蒙生物科技有限公司)，工作浓度为1%(质量／体积)的甲醛。
实验方法：首先对患者的正常全血和待测全血进行提取，分别加入5μ1 全血+5μ1 抗体+50μ1／ml TO 工作液，在室内避光处进行15min 的孵育；将甲醛工作液1ml 加入其中，45min 内上机分析；正常全血染色管先上，对电压进行调节，控制血小板阳性率在1%左右，之后对样品管进行检测读出经荧光染料噻唑橙(thiarole orange，TO)染色的荧光强度，用(%)表示结果，即网织血小板百分比。
1.3 统计学方法
研究得到的数据选择SPSS 统计学软件实施分析，对全血和血浆结果的比较采用成对样本的t 检验，使用（±s）表示，P＜0.05 表示差异有统计学意义。
2 结果
近年来，用流式细胞术检测网织血小板的方法正在研究探讨中，其原理是TO 透过血小板膜和血小板细胞质内RNA特异结合[4]，其结合RNA 后，能够增大发射荧光强度的能力，达3000 倍，血小板RNA 含量和染色后荧光强度呈现出线性关系；含有RNA。可以被TO 染色的网织血小板能够发出荧光，从而可以计数网织血小板在总血小板中所占的比例。
表1 两组检测后数据统计学结果对比
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3 讨论
ITP 为机体免疫系统故障，产生抗血小板自身抗体过度破坏而形成的一种血小板减少性疾病。其特点为血小板寿命变短，骨髓巨核细胞增多，80%-90%的患者能够检测出血小板IgG 抗体。血小板相关抗体和血小板结合，增强对血小板的破坏，缩短其寿命，导致血小板变少[5-7]。而外周血血小板受到的破坏增加，随之带来骨髓中巨核细胞产生血小板的能力增强，显著提升血小板的更新速度，增加外周血中新生血小板数量，因此RPs(%)显著增加。本次研究选择ITP 患者32 例，检测网织血小板，结果RP(%)值为（21.13±6.27），明显高于健康体检组（P＜0.01），差异有统计学意义。
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两组分别进行检测后进行统计学分析比较，结果显示，健康体检组经检测后RP(%)值为（7.33±2.17），ITP 患者组RP(%)值为（21.13±6.27），明显高于健康体检组（P＜0.01）。CAA 患者组RP(% ) 值为（5.82±1.26），明显低于健康体检组（P＜0.05）。AML 患者组和MDS 患者组RP(% ) 值分别为（8.26±2.45）、（8.12±2.59），相比于健康体检组，无明显统计学差异(P＞0.05)。见表1。
血小板减少性疾病临床上比较多见，其主要原因包括：①血小板生成减少；②血小板破坏增多；③血小板分布异常[3]。在一些兔疫性血小板减少的疾病中，由于血小板破坏增多，网织血小板代偿性增加，即RP 的值相对增高。因此。检测网织血小板可以反映出血小板减少的原因，对临床治疗起着一定的指导作用。
CAA 是一组因造血微环境缺陷而导致骨髓造血功能衰竭的疾病，血小板生成受到阻碍，骨髓中巨核细胞减少，新生血小板减少[8]。本研究中选取了15 例CAA 患者作为研究对象，统计学分析结果显示其RP(% ) 值明显低于健康体检组（P＜0.05），这与临床诊断基本相似。统计学分析结果也显示，AML 组及MDS 患者组结果变化不明显，与健康体检组相比差异均无统计学意义(P＞0.05)，分析原因可能与患者本身巨核细胞生成状态有关。
一是围绕新时期可持续发展治水思路，研究解决水利改革发展的战略性、全局性、基础性和前瞻性科学问题。10年来，充分发挥以院士为核心的国家智囊作用，积极参加国家及重点地区水战略的制定，参与全国和地方水利改革与发展的顶层设计；充分发挥科学技术的支撑和引领作用，为洪水风险管理、节水型社会建设、实施最严格水资源管理制度、水功能区划与管理、水生态系统保护与修复、智能水网工程以及重大生态友好型水工程建设等提供有效的科技服务和支持。
总之，利用流式细胞仪检测网织血小板的方法，为网织血小板应用于各类血小板减少性疾病的准确诊断提供了条件，以发现网织血小板的变化规律，网织血小板在血液病中的检测具有重要的应用价值，尤其在原发性血小板减少性紫癜患者，慢性再生障碍性贫血患者血小板减少原因分析上意义显著。
参考文献
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中图分类号：R446.1
文献标识码：B
DOI:10.19613/j.cnki.1671-3141.2019.85.139
本文引用格式：柴雪芳，斯南卓玛.利用流式细胞仪检测网织血小板的临床应用价值[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(85)：214,216.
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