牛源流行性出血病病毒(EHDV)血清10型毒株在我国的分离鉴定

牛源流行性出血病病毒(EHDV)血清10型毒株在我国的分离鉴定

论文摘要

我国存在多种血清型流行性出血热病毒(Epizootic haemorrhagic disease virus,EHDV)的流行,但尚未有关于EHDV-10型毒株的分离报道。为了解云南省EHDV的流行情况,2012~2015年,本研究在云南省设立江城、师宗、芒市三个监控点,定期采集监控动物血液,接种幼仓鼠肾细胞(Baby hamster kidney cell,BHK-21)进行病毒分离;通过PCR检测、血清中和试验、琼脂糖凝胶电泳和电镜观察等方法对分离病毒进行鉴定;对分离毒株的Seg-2/VP2与Seg-3/VP3基因节段进行克隆、测序与序列分析。2013年在云南省师宗县的哨兵牛上分离出一株EHDV毒株(YNSZ-V277-2013),病毒可引起BHK-21细胞出现圆缩、裂解的细胞病变(Cytopathic effect,CPE);电镜下病毒粒子呈球形,无囊膜,表面有大量纤维突,直径在70~80nm之间;病毒基因组dsRNA的琼脂糖凝胶电泳显示分离毒株与其他血清型EHDV一致,呈现"3-3-3"的电泳带型;序列分析显示YNSZ-V277-2013毒株的Seg-2/VP2与Seg-3/VP3序列与日本EHDV-10型毒株(ON-4/N/98)相似度最高,分别为97.5%/98.5%与98.1%/99.8%,证实分离毒株为EHDV-10型;系统发育分析显示YNSZ-V277-2013毒株的Seg-2与日本EHDV-10型毒株(ON-4/N/98)的亲缘关系最近,Seg-3与分离至日本和澳大利亚的EHDV毒株同属Eastern型。本研究首次报道了EHDV-10型毒株在我国的分离以及分离毒株的Seg-2与Seg-3基因序列特征,为进一步开展中国EHDV-10型的流行病学调查与致病性研究提供了基础。

论文目录

  • 材料与方法
  •   1主要试剂
  •   2细胞株、毒株与阳性血清
  •   3血样的采集与病毒分离
  •   4分离病毒的qRT-PCR与RT-PCR鉴定
  •   5血清中和试验
  •   6病毒的纯化与电镜观察
  •   7病毒基因组的琼脂糖凝胶电泳
  •   8病毒Seg-2与Seg-3的克隆测序与序列分析
  •   9序列分析与系统发生树构建
  • 结果
  •   1 EHDV的分离与初步鉴定
  •   2 YNSZ-V277-2013毒株的血清型鉴定
  •   3病毒的电镜观察与基因组电泳特征
  •   4YNSZ-V277-2013毒株的Seg-2与Seg-3序列分析
  • 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 李占鸿,肖雷,杨振兴,孟锦昕,廖德芳,高林,李华春,杨恒

    关键词: 流行性出血热病毒,分离,鉴定,序列分析

    来源: 病毒学报 2019年01期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,医药卫生科技,农业科技

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 云南省畜牧兽医科学院热带亚热带动物病毒重点实验室

    基金: 国家重点研发计划(项目号:2016YFD0500908),题目:牛羊虫媒病毒病诊断与检测新技术研究,公益性行业(农业)科研专项(项目号:201303035),题目:重要牛羊虫媒病毒病防控关键技术研究与应用,云南省中青年学术和技术带头人后备人才培养项目(项目号:2017HB055)~~

    分类号: S852.65

    DOI: 10.13242/j.cnki.bingduxuebao.003500

    页码: 112-120

    总页数: 9

    文件大小: 1803K

    下载量: 80

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