OmpT在Tween-20胶束中折叠的单分子研究（英文）

论文摘要

本文用单分子探测研究了外膜蛋白OmpT在Tween-20与十二烷基-β-D-麦芽糖苷（DDM）胶束中的折叠。我们制备了单分散的OmpT,观察到OmpT在不同浓度尿素的Tween-20和DDM胶束中的折叠与去折叠。OmpT在Tween-20胶束中形成的折叠态与其在DDM中折叠形成的天然OmpT结构相似,但稳定性和酶活性均低于天然OmpT。与此相比,在Tween-20中OmpA只在低浓度尿素中折叠,OmpC不折叠。荧光相关光谱（FCS）结果表明折叠的外膜蛋白与去垢剂胶束形成复合体。在β桶折叠机器（BAM）复合体存在时,OmpT比OmpA和OmpC的折叠更加高效。三种外膜蛋白在Tween-20和BAM复合体存在下的折叠结果表明,OmpT比OmpA与OmpC更容易折叠。人们猜测不同性质的外膜蛋白与BAM复合体作用的方式不同,本文的研究结果为这种猜测提供了支持。由于Tween-20常被用于防止单分子实验中的非特异性吸附,本文的结果也提醒人们要注意蛋白与Tween-20相互作用对实验结果的影响。

论文目录

• 1 Introduction
• 2 Experimental
•   2.1 Determination of detergent micelles formation
•   2.2 Expression, purification and labeling of proteins
•   2.3 smFRET measurements
•   2.4 FCS measurements
•   2.5 SDS-PAGE assay of OMPs folding
•   2.6 Fluorescent assay on OmpT enzyme activity
•   2.7 OPMs folding assited by BAM complex
• 3 Results and discussion
•   3.1 Characterization of micelle formation
•   3.2 OmpT folds in Tween-20 and DDM micelles
•   3.3 Folded OmpT in detergent micelles
•   3.4 Enzymatic activity of folded Omp T
•   3.5 Folding of OmpT, tOmpA and OmpC in the presence of BAM complex
• 4 Conclusions

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 卜佩璇,何晨晖,赵新生

关键词: 单分子,荧光相关谱,折叠

来源: 物理化学学报 2019年05期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 北京大学化学与分子工程学院化学生物学系分子动态与稳态结构国家重点实验室北京分子科学国家研究中心,北京大学生物动态光学成像中心,北京大学生命科学学院

基金: supported by the National Natural Science Foundation of China(21521003,21233002),National Key Basic Research Special Foundation of China(2012CB917304)~~

分类号: Q51

页码: 546-554

总页数: 9

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