论文摘要
目的利用慢病毒载体建立fractalkine（FKN）基因敲低的HK-2稳定细胞株,为探讨FKN基因在肾脏组织肾小管上皮细胞转分化（EMT）重构中的作用奠定实验基础。方法通过双酶切将FKN目的基因连接到GV248载体（hU6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin）,经扩增、转化、验证、测序、质粒抽提,将携带目的基因的工具GV248载体质粒及病毒包装辅助质粒Helper1.0、Helper2.0转染293T细胞,完成慢病毒包装及质量检测后获取慢病毒工具载体LV-FKN-RNAi,病毒感染HK-2细胞72h后筛选稳定表达的细胞株HK-2/LV-FKN-RNAi,采用Western blot测定FKN的表达水平,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果经对比,构建LV-FKN-RNAi阳性克隆序列与目的基因FKN相符;HK-2细胞达到80%感染效率的最佳感染条件为:在Enhanced Infection Solution （ENi.S）培养基中进行感染,设定感染复数（MOI）为10,感染时间为72h。Western Blot结果显示,经筛选的HK-2/LV-FKN-RNAi细胞中FKN基因表达水平降低;细胞形态成梭形,多有伪足出现。CCK-8检测显示,FKN基因敲低组细胞活力降低;流式细胞术检测显示,FKN基因敲低组细胞凋亡率增加。结论本研究成功构建一种低表达FKN基因的慢病毒载体;LV-FKN-RNAi感染HK-2细胞后可实现目的基因的低表达,并且FKN基因敲低后HK-2细胞活力下降,凋亡率增加。经筛选的HK-2/LV-FKN-RNAi细胞株可用于后续实验研究。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 尤燕舞,付冬冬,王俊杰,Soulixay Senouthai
关键词: 基因敲低,慢病毒载体,细胞
来源: 中国组织化学与细胞化学杂志 2019年03期
年度: 2019
分类: 基础科学
专业: 生物学
单位: 右江民族医学院附属医院肾内科
基金: 国家自然科学基金(81560271),广西自然科学基金(2014GXNSFAA118253),广西研究生教育创新计划创项目(YCSW2018214)
分类号: Q78
DOI: 10.16705/j.cnki.1004-1850.2019.03.011
页码: 257-265
总页数: 9
文件大小: 2035K
下载量: 239
相关论文文献
- [1].内皮抑素过表达慢病毒载体的构建及其鉴定[J]. 中国生物制品学杂志 2016(08)
- [2].lncRNA BC002811慢病毒载体构建及对胃癌细胞增殖的影响[J]. 安徽医科大学学报 2020(01)
- [3].生长激素抑制素基因过表达慢病毒载体的构建及鉴定[J]. 华北理工大学学报(医学版) 2017(05)
- [4].人hnRNPA2/B1shRNA慢病毒载体的构建[J]. 贵州医科大学学报 2016(06)
- [5].人肝细胞生长因子基因重组慢病毒载体的构建及其在成肌干细胞中的表达[J]. 听力学及言语疾病杂志 2015(01)
- [6].新型慢病毒载体的构建及其在人骨髓间充质干细胞基因转导中的应用[J]. 中国组织工程研究与临床康复 2011(23)
- [7].慢病毒载体及应用研究进展[J]. 包头医学院学报 2011(05)
- [8].HIF-1α基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定[J]. 中国实用医药 2010(04)
- [9].慢病毒载体法制备转基因动物研究进展[J]. 动物医学进展 2008(02)
- [10].VEGF基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定[J]. 苏州大学学报(医学版) 2008(01)
- [11].中试制备临床级别第三代慢病毒[J]. 生物工程学报 2019(07)
- [12].慢病毒载体转录“通读”改进研究进展[J]. 生物工程学报 2011(11)
- [13].自身失活型慢病毒载体感染脐带血CD34~+细胞的方法及效率[J]. 热带医学杂志 2016(01)
- [14].慢病毒载体的改进为基因治疗带来了新的希望[J]. 中国实验血液学杂志 2013(05)
- [15].PCDH-His-LprA-FLAG慢病毒载体在293T细胞中的过表达分析[J]. 药物生物技术 2019(06)
- [16].慢病毒载体感染小鼠曲细精管的研究[J]. 实验动物科学 2010(01)
- [17].小窝蛋白-1重组慢病毒载体的构建及鉴定[J]. 浙江医学 2019(14)
- [18].人釉原蛋白基因重组慢病毒载体的构建及在293T细胞中的表达[J]. 上海口腔医学 2008(01)
- [19].人肝细胞生长因子融合基因慢病毒载体的构建及鉴定[J]. 慢性病学杂志 2020(06)
- [20].核受体相关蛋白1基因慢病毒载体的构建[J]. 昆明医科大学学报 2018(11)
- [21].膀胱平滑肌细胞乙酰胆碱M_3受体干扰RNA慢病毒载体的构建[J]. 首都医科大学学报 2018(03)
- [22].慢病毒载体PLK O.1-shHIF-2α的构建及鉴定[J]. 山东医药 2014(14)
- [23].Survivin-pPRIME-IGF1R-miR30慢病毒载体的构建及其对肝癌细胞生长的抑制[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志 2010(03)
- [24].肾上腺脑白质营养不良蛋白慢病毒载体的构建和表达[J]. 第二军医大学学报 2014(08)
- [25].慢病毒载体构建策略及生物安全性研究进展[J]. 动物医学进展 2008(02)
- [26].表达β-珠蛋白基因的安全性慢病毒载体的优化[J]. 中国生物工程杂志 2018(07)
- [27].长链非编码RNA ENSMUST00000127391重组慢病毒载体的构建与鉴定[J]. 解放军预防医学杂志 2016(S2)
- [28].人肝细胞核因子4α重组慢病毒载体的构建与鉴定[J]. 岭南现代临床外科 2014(05)
- [29].Hsa-miRNA-9-5p过表达慢病毒载体的构建[J]. 内蒙古医学杂志 2014(09)
- [30].人胆固醇酯水解酶基因慢病毒载体构建及鉴定[J]. 军医进修学院学报 2012(12)