导读:本文包含了外源基因论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基因,转基因,水稻,密码子,腮腺,核糖,转录。
外源基因论文文献综述
阚贵珍,黄方,喻德跃[1]（2019）在《转基因生物的生态风险——外源基因的“冒险旅行”》一文中研究指出伴随生物技术的迅速发展,转基因生物的生态风险受到全世界的关注。因此,从外源基因在转基因生物体内的"探索"到转基因生物体外的"冒险旅行"进行介绍,尤其是在适合度研究方面进行详细阐述,以期对转基因生物的生态风险进行客观评价。(本文来源于《大豆科技》期刊2019年05期）
靳伟,代敏敏,李德娟,樊宝良[2]（2019）在《CRISPR/Cas9介导的外源基因在猪PSP位点的定点整合》一文中研究指出唾液腺生物反应器作为一种新型生物反应器,是利用唾液分泌蛋白的调控区特异性表达各种外源蛋白,常用的唾液分泌蛋白为腮腺分泌蛋白(parotid secretory protein, PSP)。本研究旨在建立利用CRISPR/Cas9系统对猪(Sus scrofa) PSP基因定点整合的方法体系,并分析CRISPR/Cas9对PSP基因整合的脱靶效应,筛选获得能够实现上述目标的有效的基于CRISPR/Cas9系统的sgRNA。实验首先根据PSP基因序列在线设计单链引导RNA (single guiding RNA, sgRNA),选出5条sgRNA序列;然后利用sgRNA体外转录试剂盒和Cas9体外酶切试剂盒,筛选出靶向PSP基因体外酶切活性较高的sg RNA序列,构建sgRNA和Cas9共表达载体pCas9-sgRNA,同时构建携带新霉素抗性基因(neomycin resistance gene, NeoR)表达结构的打靶载体pMD19-5'arm-NeoR-3'arm;最后将sgRNA和Cas9共表达载体和打靶载体共转染猪肾细胞(PK-15细胞),利用新霉素进行筛选,分离单细胞克隆。通过PCR及测序鉴定NeoR定点敲入阳性单克隆细胞并进行脱靶效应分析。体外酶切结果表明,sgRNA1、sgRNA3、sgRNA4和sgRNA5均有较高的体外酶切活性;测序结果显示,4个sgRNA均成功针对猪PSP基因实现了定点敲入,sg RNA1、sgRNA5敲入效率分别为22.7%(5/22)和26.1%(6/23),且均存在1个潜在脱靶位点发生了脱靶效应;sgRNA3、sgRNA4敲入效率分别为50.0%(12/24)和42.1%(8/19),5个潜在脱靶位点均未发生脱靶效应。本研究成功建立了针对猪PSP基因进行基因编辑的方法体系,筛选出高效引导外源基因定点敲入猪PSP基因的sgRNA,为深入研究转基因猪提供了基础资料。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年09期）
缪胜男,杨婷尧,崔文璟,周哲敏[3]（2019）在《茶碱激活型RNA分子开关的构建及在枯草芽胞杆菌中调节外源基因表达的性能》一文中研究指出枯草芽胞杆菌Bacillussubtilis在工业生物技术以及合成生物学领域作为一种重要的微生物可广泛用作代谢工程、重组蛋白表达以及新型基因电路的底盘。在B. subtilis中构建基于非编码RNA的高精准调节元件,能够实现不依赖蛋白质因子的基因表达调控,丰富B.subtilis基因表达通用工具。通过基因工程手段,设计了基于茶碱适体域的核糖开关E和适体核酶AZ调节元件,并与不同的B.subtilis内源组成型启动子适配,构建出茶碱激活型基因表达控制元件。测定这两种调节元件与6种组成型启动子组合匹配下报告基因GFP的荧光强度,鉴定并分析各调控元件的工作性能。并进一步以红色荧光蛋白mCherry和普鲁兰酶两种不同的异源蛋白验证核糖开关或适体核酶与启动子的最优组合。结果表明,同一种RNA调节元件与不同启动子组合呈现不同水平的调控效率。在核糖开关与启动子的组合中,启动子PsigW和核糖开关E组合(sigWE)对GFP表达的诱导率最高,达到16.8。在适体核酶与启动子的组合中,AZ与启动子P43、PrpoB组合(P43AZ和rpoBAZ)的诱导率最高,分别达到了6.1和6.2。进一步验证结果显示,sigWE调控mCherry的诱导率最高(9.2),而P43E调控普鲁兰酶的诱导率最高(32.8),产酶水平达到了81U/mL。核糖开关和适体核酶对GFP、mCherry、普鲁兰酶均能实现调控,但是不同元件组合的调控性能有所差异,对不同基因的调控效果也不尽相同。(本文来源于《生物工程学报》期刊2019年08期）
张瑞奇,姚若男,范亚丽,穆换清,熊传曦[4]（2019）在《小麦SNP芯片标记在外源基因发掘中的应用》一文中研究指出遗传基础日趋狭窄限制了小麦品种遗传改良突破性进展。小麦亲缘属种基因组中存在许多优良的等位变异基因,将这些优异基因转入小麦背景,是拓宽小麦遗传基础的重要途径。尽管通过远缘杂交和染色体工程技术,获得了众多小麦-外源染色体渐渗系,但利用到育种改良中的易位系仅少数几个。一方面是因为外源染色体区段携带优异基因的同时还可能携带不利基因。另一方面也与外源染色体区段对替换的小麦染色体区段补偿性较差有关。因此,明确外源染色体与小麦染色体相应的共线性关系对发掘和利用外源优良基因十分重要。小麦高通量SNP芯片标记可在全基因组、单条染色体、染色体臂及小片段渐渗水平上揭示外源染色体与小麦染色体的共线性关系、明确易位系的育种利用价值以及定位外源优异基因。以簇毛麦(Dasypyrum villosum,2n=14,VV)为例,我们利用小麦55K SNP芯片构建了V基因组遗传连锁图谱,明确了簇毛麦IV-7V染色体与小麦1-7群各染色体的共线性关系;利用660K SNP芯片分析了小麦-簇毛麦整臂易位系,明确了外源染色体臂对替换的小麦染色体臂的补偿性及其育种利用价值,还获得了外源染色体特异分子标记;利用55K SNP芯片分析了小麦-簇毛麦小片段渐渗系,并对外源基因进行了物理定位;利用660K SNP芯片分析了不同来源T5VS.5DL易位系,获得了不同来源5VS染色体臂间多态性标记,利用遗传群体对5VS上的抗病基因Pm55、Pm5V和Yr5V进行了遗传定位。由此可见,小麦SNP芯片技术有效推动了外源优良基因的育种利用研究。(本文来源于《第十届全国小麦基因组学及分子育种大会摘要集》期刊2019-08-11）
杜京尧,尚飞,王高华,梁卫红[5]（2019）在《OsRhoGDI2过表达转基因水稻的筛选鉴定及外源基因拷贝数的初步分析》一文中研究指出水稻Rho GDP解离抑制基因OsRhoGDI2是从幼穗中分离出的功能未知基因。为鉴定该基因的功能,笔者所在实验室前期构建了植物过表达载体pCAMBIA1302-OsRhoGDI2-GFP,并对水稻进行了遗传转化。对OsRhoGDI2过表达转基因水稻T_2代进行筛选和鉴定,采用PCR技术鉴定转基因植株,采用半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR检测OsRhoGDI2在转基因水稻中的表达水平,结果显示,其中6个株系为过表达转基因植株,OsRhoGDI2表达水平上调1.69～13.35倍。为检测外源基因在转基因水稻中的拷贝数,分别以蔗糖磷酸合成酶基因SPS和潮霉素抗性基因HYG为内参基因和标记基因,采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术结合内参基因和标记基因的标准曲线进行分析,结果显示在所检测的6个转基因株系中,外源基因的拷贝数均为1,提示已经获得稳定遗传的OsRhoGDI2过表达转基因水稻,为后续OsRhoGDI2基因的功能研究奠定基础。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2019年14期）
吕威,孙宇涵,张华新,杨庆山,李娟[6]（2019）在《转基因叁倍体毛白杨花粉活力及枯落物外源基因检测》一文中研究指出【目的】长期持续的开展转基因林木安全性评价研究,对林木遗传改良育种工作的开展和转基因林木的生物安全性评价具有重要意义。【方法】对田间种植11年和13年的转AhDREB1基因叁倍体毛白杨[(Populus tomentosa×P.bolleana)×P.tomentosa]花粉活力和杂交结实率进行检测。此外,对自然条件下转基因叁倍体毛白杨枯落物中外源基因进行检测,并从转基因叁倍体毛白杨林下根际土壤中筛选出44株卡那霉素抗性细菌,对其基因组DNA进行PCR检测。【结果】MTT和TTC染色检测结果表明转基因叁倍体毛白杨花粉没有活力,杂交试验结果再次表明转基因叁倍体毛白杨花粉不具备可授性和育性,其杂交结实率为0。转基因叁倍体毛白杨的枯落物(枝、茎和叶)无论是埋在土里,飘落在地表,飘落在草坪上,其外源基因在3个月后均未能检测到。种植13年的转基因叁倍体毛白杨枯落物中的外源基因暂未水平转移到根际土壤可培养细菌基因组中。【结论】未发现大田种植13年的转基因叁倍体毛白杨对周围生态环境造成显着影响。(本文来源于《北京林业大学学报》期刊2019年07期）
汤婷[7]（2019）在《食品加工中关键因子对转基因大豆和转基因水稻外源基因降解及其检测的研究》一文中研究指出当今社会,转基因作物被人们普遍关注,而关于转基因食品的安全性问题的争论也从未停止。但是,由于食品加工品经历了一系列加工工艺的处理,其DNA发生不同程度的降解,而目前转基因成分检测主要是基于DNA的PCR技术,从而给食品加工品中转基因成分的检测带来了一定的困难,极易造成假阴性的检测结果。本文主要研究内容及结果如下:1.小片段DNA的回收本实验中比较了6种常用的提取DNA的方法,确定了QIAEX II Gel Extraction Kit试剂盒中硅珠回收小片段DNA效果最佳,然后进一步对硅珠回收小片段DNA的实验条件进行优化,最终确定了小片段DNA回收的最佳方法。最后将优化后的硅珠回收小片段DNA的方法与CTAB法分别对高温处理后的转基因大豆进行DNA提取。结果表明,这6种方法中硅珠法对小片段DNA回收的能力最强。2.不同温度及酸碱处理对转基因大豆检测的影响本实验分别探究了不同温度和酸碱处理,转基因大豆中NOS、CaMV35S、EPSPS、BT这4个常用筛查元件中不同片段大小的DNA检测情况,并与国家标准《NY/T 675-2003转基因植物及其产品检测大豆定性PCR方法》中的检测结果比较,实验结果表明,转基因大豆DNA对温度更加敏感,处理的温度越高,时间越长,DNA降解程度越大,并且,在转基因成分检测时,条带较小的目的片段更容易被检测到,而检测的目的条带较大时,极易造成假阴性的结果。3.基于数字PCR技术研究温度对转基因大豆DNA的降解规律实验进一步探究了温度处理后转基因大豆中基因降解规律。主要利用数字PCR技术探究了NOS、CaMV35S、EPSPS、BT基因的降解规律。结果表明,温度均能引起这4个筛查元件不同程度的降解,且处理的温度越高,降解程度越大。同时,在这4个元件中,CaMV35S基因对温度最为敏感,EPSPS基因对温度处理的敏感程度最低。4.不同PCR技术检测食品加工中转基因水稻TT51-1为了评估食品加工过程对转基因检测的影响,本实验利用PCR技术,定性和定量检测了食品加工品中转基因水稻TT51-1。在不同的处理阶段,利用标准或是已经验证过的引物和探针,通过传统的定性PCR、qPCR和dPCR技术检测米饼中TT51-1成分。对于传统的定性PCR技术,很难在烘烤、油炸和微波处理的样品中检测到相对较长的扩增目的片段,如Bt基因(301bp)和事件特异性基因(274bp)。而qPCR在水煮、干燥、烘烤和微波样品中均检测到扩增荧光信号,油炸样品中没有检测到荧光信号。而采用和qPCR引物相同的传统定性PCR检测所有样品中相应较短的目的片段,这些传统定性PCR结果与qPCR结果基本一致。结果表明,食品加工直接影响转基因成分的检测,建议选择相对较短的片段作为分析的扩增目标。在本实验中建立了qPCR和双重ddPCR体系去定量检测TT51-1。正交实验结果表明,TT51-1/PLD双重ddPCR的最佳条件为引物/探针500/250 nM,退火温度为58℃。两种方法都可以定量检测加工后样品中TT51-1的含量,而双重ddPCR由于其稳定性、准确性、PCR抑制剂的耐药性以及不需要参考材料等优点,成为检测加工食品中转基因成分更有吸引力的方法。综上所述,在常见的6种DNA回收方法中硅珠法提取和回收小片段DNA效果最好。在食品加工过程中,温度和pH值均能引起DNA降解,且温度影响更大,所以在检测时,应选用较短的目的片段,选用检测结果更稳定可靠的数字PCR。(本文来源于《阜阳师范学院》期刊2019-06-14）
侯倩倩[8]（2019）在《外源基因在产甘油假丝酵母中的表达策略及应用研究》一文中研究指出产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)作为甘油高效工业化生产菌株,拥有独特的耐高渗透压、耐高温高糖、耐有机酸等抗逆性强特点,是潜在的合成生物学底盘工业微生物。该菌株在遗传与分子生物学方面研究仍有许多空白,阻碍了对其工业应用潜力的开发。酵母作为外源基因表达的重要真核表达系统之一,影响基因表达的因素有很多。本研究从密码子偏好性、启动子、mRNA二级结构等对外源基因在该菌株中表达策略进行研究,旨在为工业抗逆酵母改造、生产高附加值产品提供基础,本论文研究具体如下:为从密码子偏好性优化外源基因表达,研究利用Codon-W分析C.glycerinogenes密码子使用情况,结果发现,C.glycerinogenes平均GC含量为40.3%,GC3s平均含量为37.2%,最优密码子有25个且多以A/U结尾;通过表达不同来源外源基因GFP、ldhA、xylB、xylD、kivD发现:GFP、ldhA密码子偏好与宿主相似,易于成功表达,而xylB、xylD、kivD的GC含量均大于65%,密码子多以G/C结尾,CAI值均约为0.2,ENc值都在40以上,基因只转录不表达,只有在密码子优化后才成功表达;结果表明,利用密码子同义突变优化外源基因,减小GC含量和ENc值,提高CAI值,能够调控基因在C.glycerinogenes中的表达效率。基于启动子表达策略,进一步研究不同启动子对GFP、xylB和ldhA表达影响,具体为:从C.glycerinogenes中选择5个组成型启动子PGAP、PPDC、PPGK1、PCS1和PLSC2表达GFP,PGAP启动强度最强,其次为PPDC和PPGK1;利用低pH诱导型启动子PGMT1、PGUK1和组成型启动子PGAP、PPDC、PPGK1表达xylB和ldhA,发现组成型启动子调控表达基因在pH 5.0和4.0时无明显变化,pH 3.0时明显下降,低pH诱导型启动子PGMT1表达的xylB和ldhA转录水平pH 2.5相比pH 5.5分别提高14.3倍和23.3倍,导致木糖酸和乳酸产量分别提高2.6倍和3.2倍;研究显示,C.glycerinogenes作为宿主可对不同外源基因采用不同启动子表达策略,可实现外源基因进行表达量控制。以GFP和密码子优化后xylB为研究对象,探索在C.glycerinogenes中翻译起始区附近二级结构最小自由能变化和拷贝数的表达策略,研究发现,GFP翻译起始区二级结构ΔG_0=-3.3 Kcal·mol~(-1)降至ΔG_(12)=-12.0 Kcal·mol~(-1)时荧光强度降低49.6%,而ΔG_4=-6.3Kcal·mol~(-1)的碱基配对概率相比ΔG_0减小,荧光强度提高31.1%;xylB翻译起始区二级结构ΔG_0=-6.2 Kcal·mol~(-1)升至ΔG_1=-2.4 Kcal·mol~(-1)时,减弱了mRNA二级结构稳定性,碱基处于配对的概率减小,表达的酶活提高40.4%;增加外源基因拷贝数使重组菌C.g-6GFP荧光强度是单拷贝的3.9倍,C.g-4xylB01酶活和xylB转录水平分别是单拷贝的1.5倍和2.8倍,木糖酸的产量达到24.5 g·L~(-1),而6个xylB拷贝数时酶活和转录水平相比4个时降低35.7%和36.5%;结果表明,通过改变外源基因翻译起始区二级结构的最小自由能和优化拷贝数在一定程度上可以控制外源基因在C.glycerinogenes中的表达量。(本文来源于《江南大学》期刊2019-06-01）
常志远,徐美玲,文婷婷,于源华,张晓[9]（2019）在《转基因食物中常见外源基因PCR检测方法的建立》一文中研究指出通过对CTAB法、胍-氯仿法和试剂盒法叁种植物基因组提取方法进行比较,筛选出回收率最大的CTAB法用于本实验样品基因组的提取。其次,以转基因作物中9种常见的外源基因序列为模板,设计出9对引物,拟扩增片段皆小于200bp以适用于深加工食品的检测,并进行了引物的特异性、灵敏度、适用性验证试验。最后,将所建立的普通PCR检测方法应用到了转基因样品的实际检测中。结果表明,所建立的针对转基因作物中9种常见外源基因的PCR检测方法特异性强、灵敏度高,相对检测限可达0.1%～0.5%,约18～90拷贝的基因组。因此,该方法可用于转基因食品及加工品中常见基因的筛选检测。(本文来源于《长春理工大学学报(自然科学版)》期刊2019年02期）
刘性坡[10]（2019）在《表达外源基因的重组鸭坦布苏病毒的构建与稳定性研究》一文中研究指出自2010年以来,新发鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu Virus,DTMUV)病在我国广泛流行,给我国的养鸭业造成了巨大的经济损失。本研究拟利用弱毒疫苗株(FX2010-180P)建立的反向遗传操作系统,探索在该致弱毒株基因组的不同位置插入报告基因,找到一处能够表达外源蛋白的插入位点,为以后新型疫苗的研发奠定基础。为了探究DTMUV是否能够稳定表达外源蛋白,利用融合PCR等方法,在DTMUV基因组的5’非编码区(UTR)与C基因、C基因与PrM基因、PrM基因与E基因、E基因与NS1基因之间分别插入绿色荧光蛋白基因(EGFP),并在基因之间插入表达口蹄疫2A蛋白的序列;在NS5基因与3’UTR之间插入内部核糖体引入位点(IRES)与EGFP,进而获得5’端含有启动子、外源基因序列的FX2010-180P株全长cDNA。然后以此为模板进行体外转录,得到具有感染性的RNA,将其转染至DF-1细胞4d后,只有NS5基因与3’UTR之间插入外源基因的转染孔出现了表达绿色荧光蛋白的重组DTMUV。将重组病毒连续传代,发现随着传代次数的增加荧光强度逐渐减弱,传至P5代荧光完全消失。测序结果显示,重组病毒不仅丢失了IRES 3’端506个核苷酸以及整个EGFP,而且还丢失了FX2010-180P株3’端紧挨着终止密码子的67个核苷酸。鉴于此,我们人为缺失这67个核苷酸,同时插入IRES与EGFP,同样方法进行重组病毒拯救,发现病毒能够增殖并且产生与亲代毒相似的细胞病变,传至第5代后荧光逐渐减弱,P7代后荧光完全消失,说明缺失这67个核苷酸的重组病毒依旧不能稳定表达外源蛋白。通过高通量测序发现,P2代重组病毒中至少含有12种不同长度序列缺失的病毒,缺失位置也不一致,每个位置丢失序列的长度也不尽相同。继续传代后发现细胞上清中重组病毒种类逐渐减少,最后以一种或者几种比较优势的状态存在。本研究证明在NS5基因与3’UTR之间虽然能够插入并表达外源基因,但是传代后不稳定;本研究获得一系列序列缺失病毒,为研究黄病毒基因稳定性的分子机制提供了素材,为构建稳定表达外源基因的病毒载体奠定了基础。(本文来源于《山东农业大学》期刊2019-03-27）
外源基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
唾液腺生物反应器作为一种新型生物反应器,是利用唾液分泌蛋白的调控区特异性表达各种外源蛋白,常用的唾液分泌蛋白为腮腺分泌蛋白(parotid secretory protein, PSP)。本研究旨在建立利用CRISPR/Cas9系统对猪(Sus scrofa) PSP基因定点整合的方法体系,并分析CRISPR/Cas9对PSP基因整合的脱靶效应,筛选获得能够实现上述目标的有效的基于CRISPR/Cas9系统的sgRNA。实验首先根据PSP基因序列在线设计单链引导RNA (single guiding RNA, sgRNA),选出5条sgRNA序列;然后利用sgRNA体外转录试剂盒和Cas9体外酶切试剂盒,筛选出靶向PSP基因体外酶切活性较高的sg RNA序列,构建sgRNA和Cas9共表达载体pCas9-sgRNA,同时构建携带新霉素抗性基因(neomycin resistance gene, NeoR)表达结构的打靶载体pMD19-5'arm-NeoR-3'arm;最后将sgRNA和Cas9共表达载体和打靶载体共转染猪肾细胞(PK-15细胞),利用新霉素进行筛选,分离单细胞克隆。通过PCR及测序鉴定NeoR定点敲入阳性单克隆细胞并进行脱靶效应分析。体外酶切结果表明,sgRNA1、sgRNA3、sgRNA4和sgRNA5均有较高的体外酶切活性;测序结果显示,4个sgRNA均成功针对猪PSP基因实现了定点敲入,sg RNA1、sgRNA5敲入效率分别为22.7%(5/22)和26.1%(6/23),且均存在1个潜在脱靶位点发生了脱靶效应;sgRNA3、sgRNA4敲入效率分别为50.0%(12/24)和42.1%(8/19),5个潜在脱靶位点均未发生脱靶效应。本研究成功建立了针对猪PSP基因进行基因编辑的方法体系,筛选出高效引导外源基因定点敲入猪PSP基因的sgRNA,为深入研究转基因猪提供了基础资料。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
外源基因论文参考文献
[1].阚贵珍,黄方,喻德跃.转基因生物的生态风险——外源基因的“冒险旅行”[J].大豆科技.2019
[2].靳伟,代敏敏,李德娟,樊宝良.CRISPR/Cas9介导的外源基因在猪PSP位点的定点整合[J].农业生物技术学报.2019
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[4].张瑞奇,姚若男,范亚丽,穆换清,熊传曦.小麦SNP芯片标记在外源基因发掘中的应用[C].第十届全国小麦基因组学及分子育种大会摘要集.2019
[5].杜京尧,尚飞,王高华,梁卫红.OsRhoGDI2过表达转基因水稻的筛选鉴定及外源基因拷贝数的初步分析[J].江苏农业科学.2019
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[7].汤婷.食品加工中关键因子对转基因大豆和转基因水稻外源基因降解及其检测的研究[D].阜阳师范学院.2019
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[9].常志远,徐美玲,文婷婷,于源华,张晓.转基因食物中常见外源基因PCR检测方法的建立[J].长春理工大学学报(自然科学版).2019
[10].刘性坡.表达外源基因的重组鸭坦布苏病毒的构建与稳定性研究[D].山东农业大学.2019
论文知识图
