Fe（Ⅱ）/2-酮戊二酸依赖型双加氧酶重组大肠杆菌全细胞催化合成4-羟基异亮氨酸

论文摘要

以L-异亮氨酸（L-ILe）为底物,以异源表达Fe（Ⅱ）/2-酮戊二酸依赖型双加氧酶的重组大肠杆菌BL21/pET28a-ido全细胞作为催化剂,催化合成4-羟基异亮氨酸（4-HIL）.基于重组异亮氨酸双加氧酶（IDO）催化异亮氨酸羟基化的性质和条件,在摇瓶水平上对辅因子亚铁离子、α-酮戊二酸（α-KG）及底物浓度进行了单因素优化.获得的最佳反应条件为2 g/L FeSO4·7H2O,底物与α-KG摩尔比为1∶1,该条件下反应8 h可生成190 mmol/L 4-HIL.结合摇瓶水平的最优条件,在反应器水平上继续对搅拌速度、菌体浓度等进行优化,实现了对高底物浓度下催化反应的连续调控.在50 g/L湿菌体及400 r/min转速下可一次转化合成400mmol/L 4-HIL,建立了全细胞催化合成4-羟基异亮氨酸的工艺流程.

论文目录

• 1 实验部分
•   1.1 试剂与仪器
•   1.2 菌体的培养及收集
•   1.3 全细胞催化合成4-羟基异亮氨酸
•     1.3.1 摇瓶水平的反应
•     1.3.2 反应器水平的反应
•   1.4 产物和底物的分析
• 2 结果与讨论
•   2.1 FeSO4·7H2O浓度对转化4-HIL的影响
•   2.2 α-KG浓度对转化4-HIL的影响
•   2.3 L-ILe浓度对转化4-HIL的影响
•   2.4 菌体浓度对转化4-HIL的影响
•   2.5 转速对转化4-HIL的影响
•   2.6 细胞冷冻对转化4-HIL的影响
•   2.7 高底物浓度下的反应进程
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张文丽,聂尧,景晓冉,徐岩

关键词: 异亮氨酸,全细胞催化,羟基异亮氨酸,双加氧酶,过程调控

来源: 高等学校化学学报 2019年06期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 有机化工

单位: 江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室

基金: 国家自然科学基金(批准号:21336009,21676120),江苏省六大人才高峰计划项目(批准号:2015-NY-007),江苏高校优势学科建设工程项目资助~~

分类号: TQ460.6

页码: 1172-1177

总页数: 6

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