基于核糖体跳跃的多顺反子共表达技术在拟南芥上的应用

论文摘要

2A肽的核糖体跳跃技术是一种新型技术。其2A肽是长度为18～22个氨基酸的顺式作用水解酶元件,具有结构短小、蛋白分割效率高的特点,因而被越来越多应用于多顺反子表达载体的构建中。该项技术目前主要集中于酵母（Saccharomyces cerevisiae）和哺乳动物细胞的研究中,在植物中的报道较少。为探索该技术在植物中的应用研究,本研究利用猪捷申病毒2A （Porcine teschovirus-1 2A, P2A）和东亚细亚病毒2A （Thosea asigna virus 2A, T2A）,首次将人工合成的转录因子XVE （X, the DNA-binding domain of the bacterial repressor LexA; V, the acidic transactivating domain of VP16; E, the regulatory region of the human estrogen receptor）、绿色荧光蛋白基因（green fluorescent protein, GFP）和抗除草剂基因（bialaphos resistance,Bar）3个基因的开放阅读框（open reading fragment, ORF）串联后受35S启动子调控,构建成多顺反子共表达载体pX6-2A,转化拟南芥（Arabidopsis thaliana）后经PCR鉴定获得了转基因阳性植株;Western blot结果显示XVE,GFP和Bar 3个目的蛋白全部被分割完成,说明P2A和T2A肽在植物材料中可以转录、表达和翻译,且在分割过程中不会互相干扰,是一种理想的多顺反子表达方式。本研究结果表明P2A和T2A在植物材料中能够完成高效分割,行使其"核糖体跳跃"的功能,适用于在植物材料中的应用研究,该研究结果对2A肽在转基因植物中的推广应用具有重要的理论和借鉴意义。

论文目录

• 1材料与方法
•   1.1实验材料
•   1.2多顺反子载体构建
•   1.3转基因拟南芥的获得及分子检测
•   1.4转基因拟南芥GFP荧光观察
•   1.5转基因拟南芥2A肽Western blot检测分割效果
• 2结果与分析
•   2.1多顺反子载体构建
•   2.2转基因拟南芥的获得和分子检测
•   2.3转基因拟南芥GFP荧光观察
• 3讨论
• 4结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 吴立柱,安叶芝,张洁,孙天杰,王冬梅

关键词: 核糖体跳跃,猪捷申病毒,东亚细亚病毒,多顺反子

来源: 农业生物技术学报 2019年07期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 河北农业大学生命科学学院

基金: 教育部2013国家植物科学与技术实验教学示范中心(教高司函2013-72),河北省教育厅2012专业综合改革试点项目(No.201202),河北省教育厅课题“生物技术”品牌特色专业建设研究(No.2012GJJG054),河北农业大学科研发展基金计划(No.1602001)

分类号: Q943.2

页码: 1141-1148

总页数: 8

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