过表达UGPase基因和BCSP31基因的重组流产布氏杆菌的构建与鉴定

论文摘要

为提高流产布氏杆菌S19疫苗株的免疫保护效果,分别扩增流产布氏杆菌UGPase基因和BCSP 31基因,将其插入含有双启动子pR/pL序列的广宿主穿梭质粒pBBR1MCS-PT中,电转至流产布氏杆菌S19感受态细胞并经抗性基因筛选,采用PCR法对重组菌株的遗传稳定性进行检测,利用蛋白分析手段对目的基因的表达情况进行分析。PCR检测结果显示,构建的重组流产布氏杆菌S19-UGPase株和S19-BCSP31株的遗传性状稳定。SDS-PAGE与Western-blot结果显示,在33和31 ku处可见明显条带,且与His标签抗体的反应位置一致,表明目的蛋白获得正确表达。结果表明,构建的过表达重组流产布氏杆菌S19-UGPase株和S19-BCSP31株能够稳定表达目的基因,为下一步开展S19-UGPase株和S19-BCSP31株免疫效果的评价奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株和质粒
•   1.2 主要试剂
•   1.3 引物的设计与合成
•   1.4 重组质粒pBBR1MCS-PT的构建与鉴定
•   1.5 重组表达质粒pBBR1MCS-PT-UGPase和pBBR1MCS-PT-BCSP31的构建与鉴定
•   1.6 重组布氏杆菌S19-UGPase株和S19-BCSP31株的构建与鉴定
•   1.7 目的蛋白的表达与鉴定
• 2 结果
•   2.1 重组质粒pBBR1MCS-PT的鉴定
•   2.2 重组表达质粒pBBR1MCS-PT-UGPase和pBBR1MCS-PT-BCSP31的鉴定
•   2.3 重组布氏杆菌S19-UGPase株和S19-BCSP31株的鉴定
•   2.4 目的蛋白的SDS-PAGE与Western-blot检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 梁佳茗,钱晶,卜昭阳,郎需龙,王莉,王秀然,杨艳玲,王晓旭,屈海龙,王兴龙

关键词: 流产布氏杆菌,基因,疫苗候选株

来源: 中国兽医科学 2019年01期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 吉林农业大学动物科技学院,军事医学科学院军事兽医研究所,江苏省农业科学院兽医研究所,中国农业科学院特产研究所

基金: 国家重点研发计划项目(2016YFD0501000,2018YFD0500900,2016YFD0500900),国家自然科学基金项目(31402183)

分类号: S852.614

DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0003

页码: 44-49

总页数: 6

文件大小: 1544K

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