一、双龙接骨丸含药血清促进成骨细胞的增殖及其分子机制的研究（论文文献综述）
朱俊朗[1]（2020）在《杯苋甾酮促进骨折愈合的实验研究》文中研究说明骨折是最常见的因意外损伤而引起的骨科疾病。随着社会迅速发展,严重骨折发生率明显增加。骨修复失败的风险在慢性炎症、糖尿病、维生素缺乏、老年和多发性损伤中升高,治疗时间延长,病人伤残率增加。因此研究促进骨修复的机制、骨折愈合时间的方法显得尤为必要。间充质干细胞参与了骨折愈合过程的几个阶段。骨折损伤部位骨髓间充质干细胞募集在骨修复过程中发挥重要作用,骨折端募集足够数量的骨髓间充质干细胞是骨折愈合的前提条件和细胞学基础。牛膝具有逐瘀通经、补肝肾、强筋骨之功效,中医骨伤科临床上长期用其治疗骨折,本课题组前期研究发现杯苋甾酮通过靶向调控细胞趋化因子受体4促进骨髓间充质干细胞体外迁移。然而,牛膝杯苋甾酮促进干细胞体外迁移的机制,及是否促进干细胞成骨分化和骨折愈合,仍未可知。本文将通过细胞实验和动物实验,揭示杯苋甾酮促进骨折愈合的作用机制。目的:研究牛膝杯苋甾酮促进骨髓间充质干细胞迁移、成骨分化,及骨折愈合的作用机制。方法:1.采用全骨髓灌注法培养SD大鼠原代骨髓间充质干细胞,由于干细胞属于贴壁细胞,因此利用骨髓间充质干细胞贴壁培养法不断去除其他细胞,取生长状态佳、形态正常的P3细胞行骨髓间充质干细胞表面抗原流式细胞术实验检测。2.Cell Counting kit-8（CCK-8试剂盒）检测杯苋甾酮能否促进骨髓间充质干细胞增值。3.细胞体外迁移实验（Transwell）检测杯苋甾酮对骨髓间充质干细胞体外迁移的影响作用。4.细胞免疫荧光实验检测杯苋甾酮对骨髓间充质干细胞肌动蛋白纤维的影响。5.茜素红染色检测杯苋甾酮对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响作用。6.实时荧光定量PCR实验（RT-qPCR）检测杯苋甾酮在骨髓间充质干细胞成骨分化方面相关的mRNA的表达。7.建立SD大鼠单侧股骨干中段骨折模型,使用杯苋甾酮向骨折端局部注射。酶联免疫吸附测定（ELISA法）检测给药不同时期的骨折动物模型血清中SDF-1α的浓度。8.使用生理盐水或杯苋甾酮向实验动物骨折端局部注射,给药六周后提取标本并对骨折部位进行Micro-CT影像学观察。结果:1.流式细胞术细胞鉴定结果:检测细胞表面抗原干细胞阳性标志物结果显示,CD29、CD44、CD73阳性率分别为94.84%、93.71%、93.88%,阳性率均大于90%。表达造血细胞的标志物CD11、CD34、CD45阳性率分别为0.88%、0.88%、0.69%阳性率均小于1%。由流式细胞术结果证实,本实验所使用的细胞均为骨髓间充质干细胞。2.Cell Counting kit-8（CCK-8试剂盒）检测细胞增殖结果:在杯苋甾酮各梯度浓度干预下,与对照组相比,杯苋甾酮各浓度组在不同干预时间（24h、48h、72h）均可促进骨髓间充质干细胞增殖。最佳干预时间为48h,最佳浓度为2.5、5、10μg/mL,且有统计学意义（P<0.0001）。可见,杯苋甾酮可促进骨髓间充质干细胞增殖,且其用于细胞实验的最佳浓度为2.5、5、10μg/mL。本研究采用5、10μg/mL进行后续实验。3.Transwell细胞体外迁移实验结果:在8小时的杯苋甾酮5、10μg/mL浓度干预下,与对照组相比,各组骨髓间充质干细胞呈现不同程度的细胞迁移。其中,10μg/mL浓度杯苋甾酮干预下,骨髓间充质干细胞穿过下室细胞数量显着增多,与空白组比较,差异具有显着的统计学意义（P<0.01）。可见,杯苋甾酮对骨髓间充质干细胞迁移具有积极促进作用。4.细胞免疫荧光实验结果显示:与对照组相比,在杯苋甾酮不同浓度梯度干预下,可不同程度提高骨髓间充质干细胞肌动蛋白纤维收缩,肌丝清晰可见。因此在杯苋甾酮干预下,骨髓间充质干细胞肌动蛋白纤维收缩能力有显着提高。5.杯苋甾酮+骨髓间充质干细胞成骨诱导液干预下,茜素红染色结果:扫描仪及显微镜下观察发现,与单纯成骨诱导组（OIM）比较,杯苋甾酮+成骨诱导组对矿化结节的形成具有显着促进作用。可见,杯苋甾酮促进骨髓间充质干细胞成骨分化。此外实时荧光定量PCR的结果显示,与成骨诱导组（OIM）比较,杯苋甾酮+成骨诱导组ALP、0PN的mRNA较升高,差异有统计学意义（P<0.05）,且BMP-2的mRNA显着升高,差异有统计学意义（P<0.01）。6.SD大鼠骨折模型动物实验,给药一周后杯苋甾酮低剂量及高剂量治疗组的大鼠血清中SDF-1a含量开始升高,而模型组大鼠血清中SDF-1a含量呈下降趋势。给药两周后牛膝杯苋甾酮低剂量组及高剂量组的大鼠血清中SDF-1a含量均显着高于模型组（P<0.01）。7.Micro-CT重建结果显示杯苋甾酮低浓度组及高浓度组的骨折部位接近愈合,而模型组（PBS组）骨折部位仍有较大骨折线。总骨体积分数统计图、新生骨体积分数统计图、原始固有骨体积分数统计图分析结果显示:杯苋甾酮低剂量组及高剂量组的新生骨骨体积分数均高于模型组,其中低剂量治疗组升高最为显着（P＜0.01）。结论:杯苋甾酮具有促进体外骨髓间充质干细胞增殖、迁移及成骨分化的作用;同时,杯苋甾酮促进骨折模型大鼠的损伤修复。因此,中药牛膝的有效提取物——杯苋甾酮可作为促进骨折修复的一种新型药物,为中医药加快骨折愈合开辟新的治疗思路,为新药开发奠定基础。
安小宁[2]（2019）在《PNS介导BMP-Smad信号通路调控BMSCs成骨分化的机制研究》文中进行了进一步梳理目的:1.体外分离、培养兔骨髓间充质干细胞（Bone mesenchymal stem cells,BMSCs）,鉴定后建立稳定的兔BMSCs体外培养体系,并探讨其成骨分化及骨形态发生蛋白2（Bone morphogenetic protein 2,BMP2）的蛋白表达受传统中药三七总皂苷（Panax notoginseng saponin,PNS）的影响。2.研究PNS对BMP-Smad经典信号通路的影响,并在此基础上探讨PNS促进BMSCs成骨分化的作用机制。方法:1.BMSCs体外分离培养、鉴定及成骨能力检测的研究:严格无菌操作下,剥离获取新生新西兰大白兔四肢长骨,然后用含胎牛血清（Fetal Bovine Serum,FBS）和双抗的DMEM冲洗骨髓腔,通过密度梯度离心法、全骨髓贴壁法获取BMSCs后:（1）通过倒置显微镜下观察BMSCs的形态学特点;（2）通过流式细胞术检测BMSCs的表面标志抗原;（3）通过茜素红染色检测细胞内钙结节的形成情况,鉴定兔BMSCs的成骨分化能力。2.PNS对兔BMSCs成骨分化及BMP2蛋白表达的影响:在课题组前期研究的基础上,选用最适浓度（100mg/l）的PNS含药培养基培养兔BMSCs后,采用茜素红染色法检测成骨指标钙结节的形成情况;用免疫细胞化学法分别检测经普通培养基、PNS培养基和成骨诱导培养基培养1周后BMP2蛋白的表达。3.选用最适浓度PNS培养基培养兔BMSCs 3天,6天,12天,设置成骨诱导液组为阳性对照组,普通培养基组为阴性对照组。用免疫荧光法定性检测BMSCs中BMP2、BMPRII,Smad1以及RunX2的定位与表达,通过WB法和qRT-PCR法检测三个不同组诱导3天,6天,12天后BMP2、BMPRII,Smad1以及RunX2蛋白表达与相应mRNA的表达。结果:1.BMSCs体外分离培养、鉴定及成骨能力检测结果:（1）密度梯度离心法分离培养出的兔BMSCs的原代细胞更纯,其种瓶6小时后可见贴壁,呈纤维状集落式生长,48小时后首次换液,7-9天后可见细胞集落扩大并相互融合,达瓶底面积的80%-90%,即可传代,传代后细胞保持着典型的生长方式与形态,镜下见BMSCs的典型形态为长梭形细胞,贴壁生长,整体呈旋涡状排列,形态均一。（2）流式细胞仪检测细胞表面标志物CD90、CD105（粘附分子）的阳性率分别为83.21%与89.48%,而HLA-DR（成纤维细胞表面标记）的阳性率为5.76%。（3）在成骨诱导基培养下,兔BMSCs可成功向成骨方向诱导,茜素红染色可见阳性钙结节染色。2.在最适浓度的PNS培养基的培养下,兔BMSCs亦可向成骨方向诱导,茜素红染色结果显示PNS组可见钙结节阳性染色,其阳性结果明显强于阴性对照组（P<0.05）,但弱于阳性对照组（P<0.05）;免疫细胞化学结果显示:在PNS培养液与成骨诱导液培养下,BMP2的染色结果均为强阳性,而普通培养基组的染色结果为阴性。3.免疫荧光显示:BMSCs在细胞质内表达BMP2,在细胞膜上表达BMPRII,在细胞质及细胞核内表达Smad1与RunX2。BMP2、BMPRII、Smad1与RunX2的qRT-PCR结果基本一致,结果显示:3天,6天,12天普通培养基组这四项指标的mRNA表达均无明显变化（P>0.05）,而PNS培养基组与成骨诱导组mRNA的表达随着时间逐渐上升（P<0.05）,在6天和12天时PNS培养基组与成骨诱导组中该四项指标mRNA的表达均明显高于普通培养基组（P<0.05）,在不同的时间点PNS培养基组中这四项指标的mRNA的表达均低于成骨诱导组（P<0.05）。BMP2、BMPRII、Smad1与RunX2的WB检测结果与其qRT-PCR检测结果基本一致。结论:1.PNS可促进兔BMSCs的成骨分化及BMP2的蛋白表达。2.PNS可能通过促进信号因子BMP2的表达、BMP2相应受体的表达以及BMP-Smad经典信号通路的激活,来实现其促成骨作用。
王运林[3]（2017）在《恒古骨伤愈合剂对大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的影响》文中研究指明目的:探究恒古骨伤愈合剂调控大鼠BMSCs成脂肪细胞分化的能力及其对防治骨质疏松症的作用机制。方法:以大鼠BMSCs为研究对象,采用全骨髓贴壁培养法,从幼年SD大鼠股骨和胫骨骨髓中分离培养BMSCs;免疫组织细胞化学染色检测BMSCs细胞纯度;恒古骨伤愈合剂分别稀释500倍、1000倍、2000倍、4000倍,相对应分5组（control组、2×10-3组、1×10-3组、0.5×10-3组、0.25×10-3组）,其中control组加入溶媒;MTT法检测各浓度恒古骨伤愈合剂对BMSCs细胞毒性;BMSCs在不同浓度恒古骨伤愈合剂干预下分别向脂肪细胞方向诱导分化;在恒古骨伤愈合剂干预后的第21天,Oil Red O染色后显微镜下观察及酶标仪定量检测成脂肪细胞分化情况;在恒古骨伤愈合剂干预后的第7天、14天、21天,Realtime-PCR定量检测成脂肪细胞分化特异性转录因子过氧化物酶体增值物激活受体（PPAR）γ、CCAAT/增强子结合蛋白（C/EBP）α的mRNA相对表达量。结果:?采用细胞贴壁生长法获得大鼠（乳鼠）BMSCs;?免疫组织细胞化学染色后荧光倒置显微镜下观察发现BMSCs特异性表面抗原CD44阳性,阳性率为95.47%,而CD19阴性,提示培养的细胞为骨髓间充质干细胞且纯度高;?MTT法检测结果示:在恒古骨伤愈合剂干预BMSCs后的0.5天、1天、4天、21天,各组与control组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。提示各浓度恒古骨伤愈合剂不论是早期还是晚期,对BMSCs的增殖及细胞活性均无毒性作用;?在恒古骨伤愈合剂干预BMSCs诱导成脂肪细胞分化的第21天,Oil Red O染色后显微镜下观察发现各浓度药物均对BMSCs成脂肪细胞分化有抑制作用。成浓度依赖性,且浓度越高抑制作用越强。酶标仪定量检测OD值分别为（1.104±0.414、0.785±0.085、0.836±0.138、1.008±0.369、1.000±0.291）,2×10-3组、1×10-3组与control组比较,差异有统计学意义（P<0.05）,与染色观察结果一致;（5）恒古骨伤愈合剂能抑制脂肪细胞生成,下调脂肪细胞特异性转录因子的表达。在恒古骨伤愈合剂干预的第7天、14天、21天,Realtime-PCR定量检测结果提示PPARγ、C/EBPα基因表达量与control组比较下调且差异有统计学意义（P<0.05）。结论:恒古骨伤愈合剂可通过下调PPARγ、C/EBPα的表达而抑制大鼠BMSCs成脂肪细胞分化。抑制BMSCs成脂肪细胞分化是恒古骨伤愈合剂防治骨质疏松症的另一作用途径。
熊云谱[4]（2017）在《补肾活血汤促进肱骨干骨折愈合及BMSCs迁移的实验研究》文中提出目的:运用补肾活血汤治疗肱骨干骨折,测定相关临床指标衡量其临床疗效,为临床应用提供理论依据。以SD大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal cells,BMSCs）为研究对象,探讨补肾活血汤含药血清是否能促进大鼠BMSCs的增殖、迁移以及可能的相关分子机制,初步探索补肾活血汤治疗骨折的生物机制,努力实现中医药干预骨折的精准治疗。方法:临床观察:选取广州中医药大学第三附属医院住院部肾虚血瘀型的肱骨干骨折（均采用手术治疗）患者40例,随机分为治疗组和对照组,其中治疗组术后给予口服中药,对照组不予中药,余治疗相同。通过骨折临床愈合时间和骨折端的骨痂评分来评价其最终疗效。实验研究:取SD大鼠BMSCs进行体外分离、培养、扩增、分化及鉴定。制备大鼠骨折模型并灌胃后提取含药血清,MTT法检测补肾活血汤含药血清对大鼠BMSCs增殖的影响,Transwell检测其对大鼠BMSCs体外迁移能力的影响,Western blot检测其对基质细胞衍生因子1（SDF-1）受体CXCR4蛋白表达的影响。成果:临床观察:在骨折临床愈合时间方面,治疗组比对照组骨折愈合时间显着缩短,且差异具有统计学意义;在骨折端骨痂生长情况方面,对照组患者骨折端骨痂生长量明显少于治疗组,差异也具有统计学意义。实验研究:MTT结果发现,补肾活血汤中、高剂量组均能促进大鼠BMSCs的增殖,其中高剂量组促进增殖作用最明显,差异均具有统计学意义。Transwell结果显示,补肾活血汤含药血清能促进大鼠BMSCs的体外迁移,其中高剂量组效果最明显,差异具有统计学意义。Western blot结果表明,补肾活血汤含药血清能显着上调BMSCs细胞膜上CXCR4蛋白的表达,且呈浓度梯度性,差异具有统计学意义。结论:补肾活血汤能促进肾虚血瘀型的肱骨干骨折愈合。补肾活血汤含药血清能促进BMSCs的增殖、迁移能力,为骨折愈合创造组织条件,其相关机制可能与上调CXCR4蛋白的表达有关。
张永青[5]（2014）在《黄芪甲苷对体外培养成骨细胞增殖与分化影响的实验研究》文中指出目的：对成骨细胞用一定方法进行体外培养，通过观察和相应的实验研究，进一步说明黄芪的有效成分黄芪甲苷对成骨细胞的增殖和分化的影响，初步探讨黄芪甲苷在促进骨缺损修复中可能的细胞学机制。方法：本实验拟运用成骨细胞的体外培养技术，通过倒置相差显微镜、碱性磷酸酶（ALP）染色、茜素红染色等方法和手段对成骨细胞进行观察和鉴定；将传代的细胞制成相应的细胞悬液，接种于24孔培养板中，用不同浓度的黄芪甲苷培养液进行培养，测定培养液中碱性磷酸酶的含量；采用相同的方法，将传代的细胞制成相应的细胞悬液并接种于96孔培养板中，用不同浓度的黄芪甲苷培养液对其进行培养，用细胞增值功能测定法对我们所培养的成骨细胞的增殖能力进行测定。结果：浓度为1u g/m l、10u g/m l和100u g/m l的黄芪甲苷溶液有促进成骨细胞增殖的作用；浓度为10u g/m l和100u g/m l的黄芪甲苷溶液有促进成骨细胞碱性磷酸酶分泌的作用。结论：不同浓度的黄芪甲苷在一定的浓度范围内对成骨细胞有一定的促进增殖和分化的作用，产生的这种促进作用可能是黄芪甲苷促进骨缺损的修复的一种细胞学的机制。
陈述祥,康乐[6]（2012）在《中药促成骨细胞增殖和分化的机制与作用》文中研究说明背景:中药促进成骨细胞增殖和分化的效果已经得到肯定,其在细胞分子水平的药理机制研究取得了很大进展。目的:对国内外应用中药诱导成骨细胞增殖和分化的药理机制研究进展作一综述。方法:应用计算机检索CNKI,Pubmed和sciencedirect数据库中2001-01/2010-12关于中药促进成骨细胞增殖和分化机制研究的文章,在标题和摘要中以"中药,成骨细胞,增殖,分化,机制"或"Chinese herbs,osteoblast,proliferation,differentiation,mechanism"为检索词进行检索。初检得到176篇文献,最终选择30篇文献进行综述。结果与结论:中药通过对成骨细胞基因、信号通路、细胞因子和OPG/RANK/RANKL系统的调控,以及类雌激素样作用促进成骨细胞增殖和分化,其作用机制明确,将中药引入骨组织工程领域具有良好的发展前景。
马莎,李玛琳[7]（2011）在《中药促进骨折愈合及其机制的研究进展》文中认为中药对于骨伤科疾病的治疗历史悠久,疗效显着。本文将从以下几个方面对中药促进骨折愈合机制的研究进展进行综述:对骨生长因子的调控、改善血液循环、促进骨折部位骨基质钙盐沉积及胶原的合成、提高成骨细胞活性、提高骨痂质量等,旨在为研究和开发利用更为有效的促进骨折愈合的单方或复方中药提供新的思路。
黄进[8]（2010）在《补肾益精法对骨髓间充质干细胞增殖的影响及机理研究》文中认为研究目的在“干细胞具先天之精的属性,是先天之精在细胞层次的存在形式”、“精血同源”等理论的指导下,本研究运用补精生血法、补精滋阴法、补精壮阳法、补气化髓生血法来探讨补肾益精法对骨髓间充质干细胞（MSCs）增殖的影响。把中医药与干细胞研究相结合,为体外培养、扩增MSCs提供新的思路,为中医药干预临床干细胞移植治疗疾病提供有力的实验依据。在药物筛选的基础上,观察对MSCs增殖确有促进作用的中药单体、有效成分及含药血清对细胞因子表达的影响,分析它们可能的作用途径,为阐释其促进MSCs增殖的作用机理提供实验依据,将补肾益精法对MSCs增殖影响的研究深入到分子水平,也为“精”的干细胞学说提供了更充分的科学依据。研究方法1.运用全骨髓贴壁法分离、培养MSCs;通过形态学、流式细胞仪检测表面标志物鉴定MSCs。2.运用MTT法筛选对MSCs增殖具有促进作用的益精中药的单体、有效成分及含药血清,并研究其最佳促增殖时间、浓度。3.用黄芪多糖（APS）及其含药血清、二苯乙烯苷（THSG）及何首乌含药血清诱导培养MSCs 72h后,RT-PCR检测不同细胞因子mRNA表达；Real-time PCR检测SCF mRNA表达；western blot检测SCF蛋白表达；ELISA法检测培养上清液SCF含量。4.用黄精含药血清诱导培养MSCs 72h后,RT-PCR检测不同细胞因子mRNA表达：Real-time PCR检测G-CSF mRNA表达；western blot检测G-CSF蛋白表达。5.用菟丝子含药血清诱导培养MSCs 72h后,RT-PCR检测不同细胞因子mRNA表达；Real-time PCR检测BMP-2 mRNA表达；western blot检测BMP-2蛋白表达。6.用巴戟天多糖诱导培养MSCs 72h后,RT-PCR检测不同细胞因子mRNA表达；Real-time PCR检测LIF. GM-CSF mRNA表达：western blot检测LIF、GM-CSF蛋白表达。7.用3月龄SD雌性大鼠双侧卵巢切除增龄3月法复制肾虚模型；选用补肾益精代表方左归丸对模型大鼠灌胃。8.观察证常组、模型组、左归丸组大鼠MSCs细胞形态、细胞表面标志物测定、生长曲线、β-半乳糖苷酶衰老细胞染色结果,比较各组大鼠MSCs增殖能力。运用RT-PCR检测正常组、模型组、左归丸组MSCs增殖过程中不同细胞因子mRNA表达。9.通过观察正常组、模型组、左归丸组大鼠MSCs在成骨细胞分化过程中ALP活性的表达、ALP染色阳性细胞率,比较各组大鼠MSCs的成骨细胞分化能力。10.通过观察正常组、模型组、左归丸组大鼠MSCs在成脂细胞分化过程中TG的表达、油红O染色阳性细胞率,比较各组大鼠MSCs的成脂细胞分化能力。结果1.建立了比较成熟的SD大鼠MSCs的分离、纯化、扩增技术平台,免疫荧光染色法和流式细胞仪检测大鼠MSCs表面标志抗原CD44、CD29表达阳性,CD45、CD34表达阴性。2.10-1mol/L THSG、10%何首乌含药血清诱导培养MSCs72h后,可促进MSCs增殖,在此过程中,均明显促进细胞SCF mRNA表达,与空白组、空白血清组相比有显着性差异。10mol/LTHSG明显促进膜结合型与可溶性两种SCF蛋白表达,10%何首乌含药血清明显促进可溶性SCF蛋白的分泌,与空白组、空白血清组相比有显着性差异。3.10%黄精含药血清诱导培养MSCs 72h后,可促进MSCs增殖,在此过程中,明显促进细胞G-CSF mRNA及G-CSF蛋白表达,与空白血清组相比有显着性差异。4. lmg/mL巴戟天多糖、10%菟丝子含药血清诱导培养MSCs 72h后,可促进MSCs增殖。在此过程中,lmg/mL巴戟天多糖明显促进细胞LIF、GM-CSF mRNA及LIF蛋白表达,10%菟丝子含药血清明显促进细胞BMP-2 mRNA表达,与空白组、空白血清组相比有显着性差异。5. lmg/mL APS、10%APS含药血清诱导培养MSCs 72h后,可促进MSCs增殖,在此过程中,均明显促进细胞SCF mRNA表达,与空白组、空白血清组相比有显着性差异。lmg/mL APS明显促进膜结合型与可溶性两种SCF蛋白表达,10%APS含药血清明显促进可溶性SCF蛋白的分泌,与空白组、空白血清组相比有显着性差异。6.正常组、模型组、左归丸组大鼠MSCs表面标志物测定的结果显示,单位体积内的原代骨髓单个核细胞中,模型组CD34阴性细胞比率明显高于正常组,有显着性差异：且CD105阳性细胞比率有低于正常组的趋势。从P3、P5代MSCs生长曲线图均可发现,模型组大鼠MSCs增殖能力较正常组、左归丸组明显降低,有显着性差异。β-半乳糖苷酶染色结果显示,模型组衰老细胞阳性率最高,明显高于正常组,有显着性差异。7.与正常组相比,模型组MSCs在增殖过程中,GM-CSF、LIF、CSF、BMP-2 mRNA表达明显降低,有显着性差异。8.骨向诱导18、21d时,模型组、左归丸组MSCs ALP表达量明显低于正常组,有显着性差异。14d开始,模型组、左归丸组大鼠MSCs的ALP染色阳性率明显低于正常组,有统计学意义。脂向诱导14d开始,模型组、左归丸组大鼠MSCs的脂肪细胞阳性率明显高于正常组,有显着性差异。结论1.采用全骨髓贴壁法可获得稳定、均质性良好的大鼠MSCs。2.10-1mol/L THSG可促进MSCs增殖,可能与其促进细胞SCF mRNA、膜结合型与可溶性两种SCF蛋白表达有关。10%何首乌含药血清可促进MSCs增殖,可能与其促进细胞SCF mRNA及可溶性SCF蛋白表达有关。3.10%黄精含药血清促进MSCs增殖的作用,可能与其促进细胞G-CSF mRNA及G-CSF蛋白表达有关。4.10%菟丝子含药血清促进MSCs增殖的作用,可能与其促进细胞BMP-2 mRNA表达有关。lmg/mL巴戟天多糖促进MSCs增殖的作用,可能与其促进细胞LIF、GM-CSF mRNA及LIF蛋白表达有关。5. lmg/mL APS可促进MSCs增殖,可能与其促进细胞SCF mRNA、膜结合型与可溶性两种SCF蛋白表达有关。10%APS含药血清可促进MSCs增殖,可能与其促进细胞SCFmRNA及可溶性SCF蛋白表达有关。6.去卵巢大鼠MSCs增殖能力减弱,可能与其表达GM-CSF、LIF、CSF、BMP-2 mRNA表达减少有关。补肾益精代表方左归丸对肾虚大鼠MSCs增殖能力的改善有一定的作用。7.去卵巢大鼠MSCs骨向分化能力降低,脂向分化能力增强。
董群伟,陈志峰,孙奋勇[9]（2010）在《牛膝脱皮甾酮促进去卵巢大鼠间充质干细胞的增殖》文中进行了进一步梳理目的研究牛膝脱皮甾酮（achyranthes bidentata ecdysterone,ABE）对原代培养绝经后骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞的作用。方法原代培养去卵巢大鼠骨髓间充质干细胞,ABE处理后MTT法检测细胞的增殖状态,定量RT-PCR检测成骨相关基因Runx2、Dlx5、Osx、Msx2与PKAR Iβ的表达。结果细胞增殖速度明显增加,并伴随PKR Iβ与Msx2的表达增加,干扰PKAR Iβ的表达能够抑制细胞增殖。结论ABE处理能够明显促进原代培养去卵巢大鼠骨髓间充质干细胞的增殖,此过程由PKR Iβ与Msx2介导。
董群伟,陈志峰,陈少青,孙奋勇,胡伶平,洪曼杰,梁超[10]（2009）在《牛膝脱皮甾酮对去卵巢大鼠骨质疏松的治疗作用》文中提出目的探讨牛膝脱皮甾酮（achyranthes bidentata ecdysterone,ABE）对去卵巢大鼠骨质疏松的治疗作用。方法选用8月龄SD雌性大鼠随机分5组:假手术组、去卵巢组、低剂量牛膝脱皮甾酮处理组ABEⅠ、中剂量牛膝脱皮甾酮处理组ABEⅡ、高剂量牛膝脱皮甾酮处理组ABEⅢ,以及α-D3处理组,药物灌胃,治疗3个月后处死大鼠,进行相关的检测。结果高剂量与中剂量ABE能够明显改善去卵巢后大鼠的骨密度与各项生物力学及骨形态计量学指标,低剂量处理组也有一定的治疗作用。结论牛膝脱皮甾酮对去卵巢大鼠骨质疏松具有防治作用,并呈剂量依赖性。
二、双龙接骨丸含药血清促进成骨细胞的增殖及其分子机制的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、双龙接骨丸含药血清促进成骨细胞的增殖及其分子机制的研究（论文提纲范文）
（1）杯苋甾酮促进骨折愈合的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 骨髓间充质干细胞治疗骨折的研究进展 |
| 一、促进BMSCs成骨分化在骨折治疗的研究进展 |
| 二、促进BMSCs归巢在骨折治疗的研究进展 |
| 第二节 中药有效成分在骨髄间充质干细胞的应用 |
| 第三节 本课题组前期研究进展 |
| 第四节 牛膝杯苋甾酮在骨伤科中的研究进展 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一节 研究思路 |
| 一、BMSCs的培养及流式细胞术鉴定 |
| 二、杯苋甾酮对BMSCs增殖影响的研究 |
| 三、杯苋甾酮对BMSCs体外迁移影响的研究 |
| 四、杯苋甾酮对BMSCs成骨分化影响的研究 |
| 五、杯苋甾酮对大鼠骨折愈合影响的研究 |
| 第二节 SD大鼠骨髓间充质干细胞取材、原代培养及鉴定 |
| 一、实验材料 |
| (一) 实验动物 |
| (二) 实验试剂 |
| (三) 实验耗材 |
| (四) 实验仪器 |
| (五) 实验试剂的配制 |
| 二、实验方法 |
| (一) 骨髓间充质干细胞取材 |
| (二) 骨髓间充质干细胞的传代培养 |
| (三) 骨髓间充质干细胞的计数 |
| (四) 骨髓间充质干细胞的流式细胞仪鉴定 |
| 三、实验结果 |
| (一) 骨髓间充质干细胞的流式细胞鉴定 |
| 第三节 杯苋甾酮对骨髓间充质干细胞增殖的影响 |
| 一、实验材料 |
| (一) 实验细胞 |
| (二) 实验药物单体 |
| (三) 实验试剂 |
| (四) 实验耗材 |
| (五) 实验仪器 |
| (六) 实验试剂的配制 |
| 二、实验方法 |
| (一) 种板 |
| (二) 药物干预 |
| (三) CCK-8试剂盒检测杯苋甾酮对BMSCs增殖的影响 |
| (四) 统计学处理 |
| 三、实验结果 |
| 第四节 杯苋甾酮对骨髓间充质干细胞迁移的影响 |
| 一、实验材料 |
| (一) 实验细胞 |
| (二) 实验药物单体 |
| (三) 实验试剂 |
| (五) 实验耗材 |
| (六) 实验仪器 |
| (七) 实验试剂的配制 |
| 二、实验方法 |
| (一) Transwell细胞迁移实验 |
| (二) 肌动蛋白(F-actin)细胞免疫荧光实验 |
| (三) 统计学处理 |
| 三、实验结果 |
| (一) 骨髓间充质干细胞Transwell迁移实验的结果 |
| (二) 杯苋甾酮对骨髓间充质干细胞肌动蛋白纤维的影响结果 |
| 第五节 杯苋甾酮对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响 |
| 一、实验材料 |
| (一) 实验细胞 |
| (二) 实验药物单体 |
| (三) 实验引物 |
| (四) 实验试剂 |
| (五) 实验耗材 |
| (六) 实验仪器 |
| (七) 实验试剂的配制 |
| 二、实验方法 |
| (一) 诱导骨髓间充质干细胞成骨分化 |
| (二) 提取干预后骨髓间充质干细胞RNA |
| (三) RNA逆转录及RT-PCR测定骨髓间充质干细胞成骨相关标志物的mRNA表达 |
| (四) 统计学处理 |
| 三、实验结果 |
| (一) 杯苋甾酮对骨髓间充质干细胞成骨分化影响结果 |
| (二) 杯苋甾酮对骨髓间充质干细胞成骨分化相关mRNA表达量的影响结果 |
| 第六节 杯苋甾酮对大鼠骨折愈合影响的研究 |
| 一、实验材料 |
| (一) 实验动物 |
| (二) 实验药物单体 |
| (三) 实验试剂 |
| (五) 实验耗材 |
| (六) 实验仪器 |
| (七) 实验试剂的配制 |
| 二、实验方法 |
| (一) SD大鼠股骨干骨折的造模 |
| (二) SD大鼠基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)的浓度测定 |
| (三) SD大鼠股骨干骨折端Micro-CT扫描分析 |
| (四) 统计学处理 |
| 三、实验结果 |
| (一) 杯苋甾酮对骨折大鼠基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)的影响结果 |
| (二) 杯苋甾酮对大鼠骨折愈合的影响结果 |
| 第三章 实验讨论 |
| 一、牛膝杯苋甾酮作用于骨髓间充质干细胞的实验基础 |
| 二、牛膝杯苋甾酮促进骨髓间充质干细胞迁移 |
| 三、牛膝杯苋甾酮促进骨髓间充质干细胞成骨分化 |
| 四、牛膝杯苋甾酮促进骨折模型大鼠的损伤修复 |
| (一) 现今骨折疾病的概况 |
| (二) 中药川牛膝治疗骨伤科疾病的优势 |
| (三) 杯苋甾酮的对骨折的愈合的作用及机理 |
| 1. 杯苋甾酮促进BMSCs迁移影响骨折愈合 |
| 2. 杯苋甾酮促进BMSCs成骨分化影响骨折愈合 |
| 结语 |
| 一、研究结论 |
| 1. 牛膝杯苋甾酮促进骨髓间充质干细胞的增殖、迁移、成骨分化 |
| 2. 牛膝杯苋甾酮促进骨折的损伤修复,其机制可能是促进BMSCs的迁移、成骨分化 |
| 二、意义和创新点 |
| 三、存在的问题 |
| 四、研究前景 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录1: 英文缩写附录 |
| 在校期间发表论文及获奖情况 |
| 发表论文 |
| 国家实用新型专利 |
| 参与课题 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
（2）PNS介导BMP-Smad信号通路调控BMSCs成骨分化的机制研究（论文提纲范文）
| 英文缩略语名词对照 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 兔BMSCS体外分离培养、鉴定和PNS对其成骨分化及BMP2 蛋白表达的影响的研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 PNS促进BMSCS成骨分化的作用机制中与BMP-SMAD信号通路的关联 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 统计学方法 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
（3）恒古骨伤愈合剂对大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 略缩词表 |
| 0 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简历 |
| 致谢 |
| 学位论文数据集 |
（4）补肾活血汤促进肱骨干骨折愈合及BMSCs迁移的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 肱骨干骨折 |
| 一、定义及概况 |
| 二、应用解剖 |
| 三、骨折分型 |
| 四、治疗进展 |
| 五、主要并发症 |
| 第二节 BMSCs与骨修复重建 |
| 一、概述 |
| 二、BMSCs增殖、分化与骨愈合 |
| 三、BMSCs迁移与骨愈合 |
| 四、BMSCs迁移的相关信号通路 |
| 五、诱导MSCs迁移的相关因子 |
| 第三节 补肾活血汤与BMSCs |
| 一、补肾、活血中药促进BMSCs的增殖和成骨分化 |
| 二、补肾、活血中药促进BMSC的迁移并加快骨愈合 |
| 第二章 临床观察 |
| 第一节 临床资料 |
| 一、研究对象 |
| 二、治疗方案 |
| 三、观测指标 |
| 四、技术控制 |
| 五、统计学处理 |
| 第二节 结果 |
| 一、一般资料 |
| 二、观测指标 |
| 第三节 讨论 |
| 第三章 实验研究 |
| 第一节 大鼠BMSCs的体外分离、培养、扩增、纯化及生物学鉴定 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 第二节 补肾活血汤含药血清对大鼠BMSCs增殖、迁移的影响及分子机制研究 |
| 一、方法 |
| 二、结果 |
| 第三节 讨论 |
| 结语 |
| 第一节 结论 |
| 第二节 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文及参与课题情况 |
| 统计学审核证明 |
| 致谢 |
（5）黄芪甲苷对体外培养成骨细胞增殖与分化影响的实验研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 主要设备及仪器 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 实验动物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 培养液的配制 |
| 2.2 成骨细胞的原代培养 |
| 2.3 成骨细胞的传代培养 |
| 2.4 细胞的观察及鉴定 |
| 2.5 黄芪甲苷对成骨细胞的影响 |
| 2.6 统计学方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 倒置相差显微镜观察结果 |
| 3.2 碱性磷酸酶染色结果 |
| 3.3 茜素红染色结果 |
| 3.4 A L P 定量测定结果 |
| 3.5 细胞增殖功能测定结果 |
| 4 结论 |
| 讨论 |
| 1 成骨细胞 |
| 1.1 成骨细胞概念 |
| 1.2 成骨细胞组织来源的选择 |
| 1.3 中药对骨细胞的作用 |
| 2 黄芪的功效及黄芪甲苷的现代药理研究 |
| 3 中医对骨损伤及骨质疏松的认识 |
| 3.1 中医药对骨损伤的认识 |
| 3.2 中医药对骨质疏松的认识 |
| 4 不同浓度的黄芪甲苷对成骨细胞增殖和分化的影响 |
| 4.1 黄芪甲苷对成骨细胞 A L P 的影响 |
| 4.2 黄芪甲苷对成骨细胞增殖能力的影响 |
| 4.3 黄芪甲苷在中医临证中的应用 |
| 5 未来研究发展方向 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 详细摘要 |
（6）中药促成骨细胞增殖和分化的机制与作用（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 资料和方法 |
| 1.1资料来源 |
| 1.2入选标准 |
| 1.3质量评估 |
| 2 结果 |
| 2.1 中药对成骨细胞基因的调控作用 |
| 2.2 中药对成骨细胞信号通路的调控作用 |
| 2.3 中药对细胞因子的调控作用 |
| 2.4 中药对生长因子的调控 |
| 2.5 中药的雌激素样作用和对OPG/RANK/RANKL系统的调控 |
| 3 小结 |
（7）中药促进骨折愈合及其机制的研究进展（论文提纲范文）
| 1 现代医学对骨折愈合的主要过程及机理的研究进展 |
| 2 中药促进骨折愈合的机理 |
| 2.1 对骨生长因子的调控 |
| 2.1.1 中药促进骨形态发生蛋白-2 (BMP-2) 的表达 |
| 2.1.2 中药促进血管内皮生长因子 (VEGF) 的表达 |
| 2.1.3 中药促进转化生长因子-β1 (TGF-β1) 的表达 |
| 2.1.4 其它 |
| 2.2 改善血液循环, 促进血肿机化吸收 |
| 2.3 促进骨折部位骨基质钙盐沉积及胶原的合成 |
| 2.4 提高成骨细胞活性 |
| 2.5 提高骨痂质量和生物力学性能 |
| 2.6 其它 |
| 2.6.1 提高微量元素的含量 |
| 2.6.2 促进生长激素分泌 |
| 3 结语 |
（8）补肾益精法对骨髓间充质干细胞增殖的影响及机理研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 文献研究 |
| 一、干细胞的研究进展 |
| 1 ESCs的研究进展 |
| 2 ASCs的研究进展 |
| 参考文献 |
| 二、MSCs的研究进展 |
| 1 MSCs的生物学特性 |
| 2 MSCs的多分化潜能 |
| 3 MSCs的应用研究 |
| 参考文献 |
| 三、中医药与MSCs关系的研究进展 |
| 1 干细胞的中医理论研究 |
| 2 肾精学说与MSCs的关系 |
| 3 中医药干预MSCs分化的研究 |
| 参考文献 |
| 四、MSCs增殖的研究进展 |
| 1 影响MSCs增殖的因素及信号传导途径 |
| 2 中医药对MSCs体外增殖的影响 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 一、MSCs的分离、培养、纯化和鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 二、补精生血法对MSCs增殖的影响及机理研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 三、补精滋阴法对MSCs增殖的影响及机理研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 四、补精壮阳法对MSCs增殖的影响及机理研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 五、补气化髓生血法对MSCs增殖的影响及机理研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 六、补肾益精法对去卵巢大鼠MSCs增殖、分化的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 结语 |
| 一、研究内容 |
| 二、创新点 |
| 三、存在的问题 |
| 四、研究展望 |
| 附录A 附图 |
| 附录B 主要缩略语中英文对照表 |
| 附录C 研究经费资助 |
| 附录D 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
四、双龙接骨丸含药血清促进成骨细胞的增殖及其分子机制的研究（论文参考文献）
- [1]杯苋甾酮促进骨折愈合的实验研究[D]. 朱俊朗. 广州中医药大学, 2020(06)
- [2]PNS介导BMP-Smad信号通路调控BMSCs成骨分化的机制研究[D]. 安小宁. 广西医科大学, 2019(08)
- [3]恒古骨伤愈合剂对大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的影响[D]. 王运林. 贵州医科大学, 2017(01)
- [4]补肾活血汤促进肱骨干骨折愈合及BMSCs迁移的实验研究[D]. 熊云谱. 广州中医药大学, 2017(01)
- [5]黄芪甲苷对体外培养成骨细胞增殖与分化影响的实验研究[D]. 张永青. 山东中医药大学, 2014(03)
- [6]中药促成骨细胞增殖和分化的机制与作用[J]. 陈述祥,康乐. 中国组织工程研究, 2012(07)
- [7]中药促进骨折愈合及其机制的研究进展[J]. 马莎,李玛琳. 西部医学, 2011(08)
- [8]补肾益精法对骨髓间充质干细胞增殖的影响及机理研究[D]. 黄进. 广州中医药大学, 2010(09)
- [9]牛膝脱皮甾酮促进去卵巢大鼠间充质干细胞的增殖[J]. 董群伟,陈志峰,孙奋勇. 广东医学, 2010(01)
- [10]牛膝脱皮甾酮对去卵巢大鼠骨质疏松的治疗作用[J]. 董群伟,陈志峰,陈少青,孙奋勇,胡伶平,洪曼杰,梁超. 广东药学院学报, 2009(05)