洛蒙德链霉菌S015中cutR/cutS双组分调控系统对洛蒙真菌素合成的调控

论文摘要

【背景】cutR/cutS双组分调控系统在链霉菌次级代谢过程中起重要作用。【目的】通过同源重组的方法在野生型S015菌株中分别敲除cutR和cutS,构建单基因缺失突变株,研究cutR/cutS双组分调控系统对洛蒙真菌素合成的调控。【方法】对突变株及野生型菌株的发酵产物进行高效液相色谱法(Highperformanceliquidchromatography,HPLC)分析,通过qPCR测定基因表达量的变化。【结果】HPLC产物分析发现,S015Δcut R和S015Δcut S中洛蒙真菌素产量分别达到了128.1±26.4 mg/L和61.8±4.5 mg/L,分别为野生型S015产量的11.5倍和5.5倍。qPCR检测发现,S015ΔcutR突变株中lomo14、lomo10、lphzB、lphzC、lphzE和lphzG的表达量分别达到野生型的1 151.7±88.8、110.5±5.8、129.3±7.7、380.2±34.6、348.2±42.1和299.8±38.2倍;S015ΔcutS突变株中lomo14、lomo10、lphzB、lphzC、lphzE和lphzG的表达量分别达到野生型的4.3±0.5、2.2±0.2、9.3±0.9、10.3±0.6、20.7±1.5和20.4±0.8倍。【结论】cutR/cutS双组分调控系统在洛蒙德链霉菌的洛蒙真菌素合成过程中对其合成途径核心基因和侧链修饰基因的表达有抑制作用,从而抑制其合成。

论文目录

• 1材料与方法
•   1.1材料
•     1.1.1菌株与质粒
•     1.1.2引物
•   1.2主要试剂及仪器
•   1.3实验方法
•     1.3.1菌株培养
•     1.3.2基因缺失菌株的构建及筛选验证
•       （1） 洛蒙德链霉菌S015全基因组DNA的提取
•       （2） 接合转移
•       （3） 双交换基因缺失突变菌株的筛选和验证
•     1.3.3生长曲线测定及产物分析
•       （1） 生长曲线测定
•       （2） HPLC分析
•       （3） qPCR分析
•       （4） 统计学分析方法
• 2结果与分析
•   2.1 S015ΔcutR和S015ΔcutS突变株的构建
•   2.2 cutR/cutS对洛蒙真菌素生物合成的影响
•   2.3 cutR和cutS对洛蒙真菌素合成基因的转录影响
• 3讨论与结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 严若冰,王威,张雪洪

关键词: 链霉菌,双组分调控系统,洛蒙真菌素

来源: 微生物学通报 2019年02期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点试验室

基金: 上海市科学技术委员会科研计划项目(16ZR1416700)~~

分类号: Q933

DOI: 10.13344/j.microbiol.china.180341

页码: 261-268

总页数: 8

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