论文摘要
【目的】筛选影响Ll.LtrB内含子编码蛋白(Intron encoded protein,IEP)反转录功能的关键催化位点,并获得无反转录活性的IEP突变体。【方法】首先,利用NCBI数据库,通过序列比对及同源建模方法筛选影响IEP反转录功能的关键氨基酸催化位点;然后,对筛选获得的关键催化位点进行定点突变,同时以Targetron载体为模板,构建无反转录功能的突变型Targetron打靶系统;最后,以大肠杆菌lacZ基因为例,体内验证IEP突变体的功能及其对Ⅱ型内含子"归巢"效率的影响。【结果】筛选到C164和G214两个位点是影响内含子编码蛋白反转录功能的关键氨基酸残基,并获得C164K和G214W两个突变体。体内功能分析表明,此两个位点突变完全失活了Ⅱ型内含子的"归巢"功能。【结论】筛选并获得了失活反转录功能的Ll.LtrB内含子编码蛋白突变体,为深入研究Ⅱ型内含子的结构和"归巢"机理奠定了基础。
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文章来源
类型: 期刊论文
作者: 陈相好,张峥嵘,刘芳,陈峥宏,洪伟,綦廷娜,谷俊莹,崔古贞
关键词: 型内含子,内含子编码蛋白,反转录
来源: 微生物学报 2019年12期
年度: 2019
分类: 基础科学
专业: 生物学
单位: 贵州医科大学基础医学院,贵州医科大学医学检验学院,贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室,贵州医科大学分子生物学重点实验室,贵州医科大学附属医院
基金: 国家自然科学基金(31760318,31500078,31560318,31601012),贵州省科技计划项目(黔科合基础[2018]1132,[2019]1441),贵州省教育厅自然科学研究项目(黔教合KY字[2014]216),贵州省研究生科研基金立项项目(11348)~~
分类号: Q78
DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20190048
页码: 2357-2366
总页数: 10
文件大小: 1106K
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