基于密码子优化的FAD依赖葡萄糖脱氢酶在毕赤酵母中的高效表达及酶学性质

论文摘要

旨在获得表达量高的FAD依赖的葡萄糖脱氢酶。通过FAD依赖的葡萄糖脱氢酶密码子优化,人工合成基因片段,构建重组表达载体pMD-GDH,转化毕赤酵母X33菌株后利用甲醇诱导培养实现分泌表达。结果显示,经试管水平筛选阳性转化子获得一株酶活高且稳定的重组菌株,在10 L发酵罐培养时经过136 h诱导培养,酶活达到257 600 U/L。酶学性质分析表明,以葡萄糖为底物时最适温度和pH分别为55℃和7.0,在50℃下处理150 min仍有70%的活性,在pH 4-7范围内,37℃保温4 h,FAD-GDH仍能保持50%以上的活性。金属离子Cu2+对酶活抑制作用比较大。FAD-GDH的底物专一性较好,以葡萄糖为最适底物。经毕赤酵母密码子偏好性优化实现了FAD依赖的葡萄糖脱氢酶在毕赤酵母中的高效表达,为应用于血糖检测提供理论依据。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株和质粒
•     1.1.2 酶和主要试剂
•     1.1.3 培养基
•   1.2 方法
•     1.2.1 葡萄糖脱氢酶密码子优化及人工合成
•     1.2.2 重组表达载体的构建
•     1.2.3 阳性转化子的获得
•     1.2.4 重组蛋白的诱导表达
•     1.2.5 FAD依赖葡萄糖脱氢酶的酶活测定
•     1.2.6 FAD依赖葡萄糖脱氢酶酶学性质分析
•     1.2.7 10 L发酵罐放大表达FAD-GDH
• 2 结果
•   2.1 FAD依赖葡萄糖脱氢酶密码子优化
•   2.2 酵母表达载体pMD-GDH的构建
•   2.3 阳性转化子的获得
•   2.4 SDS-PAGE电泳分析
•   2.5 FAD依赖的葡萄糖脱氢酶酶学性质分析
•   2.6 10 L发酵罐扩大培养
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 董聪,高庆华,王玥,罗同阳

关键词: 依赖的葡萄糖脱氢酶,密码子优化,重组毕赤酵母,酶学性质

来源: 生物技术通报 2019年07期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学

单位: 河北省科学院微生物研究所

基金: 河北省科学院科技计划项目(17202)

分类号: Q55

DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0941

页码: 114-120

总页数: 7

文件大小: 4824K

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