导读:本文包含了饲养层论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:干细胞,胚胎,细胞,生殖细胞,小鼠,霉素,纤维。
饲养层论文文献综述
周芳颖,刘玉琴[1]（2019）在《饲养层细胞作用机制研究进展》一文中研究指出饲养层细胞法被广泛应用于干细胞及其他哺乳动物细胞的体外培养,通过分泌生长因子和物理支持可以一定程度模拟细胞增殖的体内环境。根据培养目的的不同,可以有选择性的挑选饲养层细胞种类、处理方法,或通过基因编辑对饲养层细胞进行改良,从而达到最佳的培养效果。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2019年07期）
王亚丹,虎啸,丁雪粉,朱邯豫,赵玉玺[2]（2018）在《饲养层种类及密度对体外培养兔原始生殖细胞的影响》一文中研究指出该研究以14~18天胎兔为试验对象,体外分离培养扩增原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs),观察其形态变化及集落形成过程。用AKP染色(alkaline phosphatase staining)及分子生物学等方法鉴定兔PGCs,结果均为阳性,将兔PGCs分别接种于鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryo fibroblast,MEF)、兔胚胎成纤维细胞(rabbit embryo fibroblast,REF)制成的不同密度饲养层来确定种属跟密度对体外培养兔PGCs的影响。结果显示,兔PGCs接种于用同源胚胎成纤维细胞所制成的密度为6×104的饲养层上所得到的集落个数最多,集落形态最好,分化速度较慢。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2018年08期）
任亚辉[3]（2018）在《甲醇固定法制备饲养层细胞的应用和作用机制》一文中研究指出饲养层细胞在多能干细胞的体外培养中发挥重要的支持作用。传统饲养层细胞的制备方法主要是通过丝裂霉素C和伽玛射线照射处理小鼠胚胎成纤维细胞,使其失去分裂能力。饲养层细胞分泌的生长因子能够抑制多能干细胞的分化,促进自我更新。传统制备饲养层细胞的方法,制备过程复杂、需要饲养小鼠和获取早期胎儿、需要丝裂霉素C或射线照射设备等,这些要求极大制约了饲养层细胞制备方法的应用。本研究首次通过甲醇固定细胞的方法制备饲养层,简化了实验流程,提高了饲养层细胞的制备效率,便于广泛推广应用。实验结果如下:1.甲醇制备饲养层细胞方法的建立通过优化甲醇和丙酮的比例,发现丙酮比例高于70%,不利于饲养层细胞的制备。进一步通过比较甲醇不同浓度对饲养层细胞的影响发现,低浓度的甲醇对细胞的固定作用较弱。结合以上两个结果,最终确定100%的甲醇作为固定饲养层细胞的固定剂。通过比较甲醇温度和固定时间对饲养层细胞,以及多能干细胞生长的影响,确定甲醇的使用温度为4°C,固定时间为5 min。对饲养层细胞密度的优化结果显示甲醇固定的饲养层细胞密度不能低于2×10~4/cm~2。甲醇固定法不仅对小鼠原代成纤维细胞有效,建系的细胞和其他物种的细胞都可以通过甲醇固定法制备成饲养层细胞。2.甲醇固定法制备饲养层细胞用于多能干细胞培养小鼠多能干细胞,包括ES和iPS细胞,都可以在甲醇固定的饲养层细胞上稳定培养。与丝裂霉素C法制备的饲养层相比,小鼠多能干细胞在甲醇固定的饲养层上具有更快的增殖速度、更高的多能基因(Oct4、Nanog、Sox2)表达水平、更多的SSEA-1阳性克隆,并具备体内叁胚层分化潜能。人和猪iPS细胞也可以在甲醇固定的饲养层上稳定传代,有正常的克隆形态和稳定的多能基因表达。以上实验结果表明,甲醇固定法制备的饲养层细胞可以替代丝裂霉素C法制备的饲养层细胞,用于小鼠、人、猪等多能干细胞的体外培养。3.甲醇固定法制备饲养层细胞的其他应用饲养层细胞经过甲醇处理后能够牢固地固定在细胞培养皿表面,能够耐受抗性药物和低浓度胰蛋白酶的处理。实验结果表明,在甲醇固定法制备的饲养层细胞上可以快速地用药物处理筛选出稳转多能干细胞株,并且甲醇固定法制备的饲养层细胞在重复利用叁次后,小鼠多能干细胞SSEA-1的阳性率仍然高达90%以上。将甲醇固定法制备的饲养层细胞培养板放置在不同温度环境中保存不同时间后,还可以用于多能干细胞的培养。通过检测多能干细胞碱性磷酸酶活性和多能基因的表达,确定甲醇固定法制备的饲养层细胞培养板可以放在室温长期保存。4.甲醇固定法制备饲养层细胞的作用机制饲养层细胞经过甲醇固定后,细胞表面存在有四型胶原和纤维粘连蛋白。甲醇固定的饲养层细胞经过四型胶原酶处理一定时间后,细胞表面的四型胶原和纤维粘连蛋白被降解。小鼠多能干细胞在四型胶原和纤维粘连蛋白被降解的饲养层细胞上贴壁能力明显下降,部分克隆在培养基中处于悬浮状态。多能性检测发现,贴壁能力下降的小鼠多能干细胞退出na?ve状态,出现primed状态。以上结果表明,四型胶原和纤维粘连蛋白被四型胶原酶降解后,多能干细胞在甲醇固定的饲养层上的贴壁能力下降,细胞多能状态发生转变,即甲醇固定的饲养层细胞的胞外基质蛋白对多能干细胞贴壁能力和多能状态的转变有重要影响。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2018-06-01）
虎啸[4]（2018）在《兔原始生殖细胞（PGCs）无血清无饲养层培养的研究》一文中研究指出选择适宜的种子细胞是细胞工程学研究的重要前提,原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)因其无限增殖和多向分化的能力而备受关注。传统的培养体系常常使用血清和饲养层为胚胎干细跑提供支持,但血清和饲养层含有大量成分复杂的异源蛋白和不利于细胞生长的抑制因子,具有潜在的细胞毒性,同时也给细胞产物的分离和细胞特化等调控机制的研究带来极大困难。本研究选用14-18 d胎龄的胎兔原始生殖细胞为研究对象,建立了一种无血清无饲养层培养兔原始生殖细胞的方法。1.本试验选取日本大耳白兔14-18 d胎龄胎兔无菌剥离生殖嵴,体外分离PGCs,使用KSR代替血清,在培养体系中添加细胞因子LIF制成无血清培养液对兔PGCs培养。采用酶组织化学检测碱性磷酸酶活性、RT-PCR检测转录因子Oct-4的表达等方法对PGCs进行鉴定,探究了细胞传代数与冻存30天后的复苏率之间的关系。结果表明:(1)AKP染色与RT-PCR检测结果均为阳性,说明使用添加了LIF的培养液可成功培养兔PGCs。(2)冻存30天后无血清培养方法的复苏率与常规培养无差别(P>0.05);2.本试验使用无血清培养体系下的兔PGCs,进行条件培养基的过渡培养,之后在添加LIF、b FGF、TGF-β1的无血清无饲养层培养条件下培养,通过RT-PCR检测不同代数和培养天数的PGCs转录因子Oct-4的表达,体外拟胚体的形成实验,冻存30天后的复苏培养探究了无血清无饲养层培养兔PGCs的方法,结果表明:(1)兔原始生殖细胞可通过条件培养基的过渡培养成功进行无血清无饲养层的培养;(2)在无饲养层无血清培养液中添加LIF、b FGF、TGF-β1叁种细胞因子可以使兔原始生殖细胞持续增殖并保持全能性;(3)冻存30天后无血清无饲养层培养的复苏率与常规培养并无差异(P>0.05)。(本文来源于《河南农业大学》期刊2018-06-01）
魏含清,裴轶劲,王丹丹,蒋杨,王春[5]（2018）在《持续低氧对小鼠胚胎成纤维细胞增殖及饲养层制备的影响》一文中研究指出背景:在传统的胚胎干细胞培养体系中,饲养层细胞制备和胚胎干细胞的培养扩增大都是在常氧条件下进行的,氧培养条件的改变有可能影响饲养层细胞,从而改变胚胎干细胞的生长特性或分化能力,但尚未见到这方面的系统研究报道。目的:观察低氧培养对饲养层细胞及小鼠胚胎干细胞干性维持的影响。方法:原代小鼠胚胎成纤维细胞分为常氧组(体积分数20%O——2)和低氧组(体积分数5%O——2)持续传代培养,绘制生长曲线,检测活性氧水平和线粒体膜电位。将小鼠胚胎干细胞分为常氧组(饲养层为常氧组小鼠胚胎成纤维细胞,体积分数20%O——2条件下培养)和低氧组(饲养层为低氧组小鼠胚胎成纤维细胞,体积分数5%O——2条件下培养),观察胚胎干细胞的生长形态,检测干细胞多能性指标Oct4、Sox2以及低氧诱导因子HIF-1αmRNA表达。结果与结论:(1)与常氧组相比,低氧组小鼠胚胎成纤维细胞增殖较快,线粒体膜电位上升,产生活性氧减少(P<0.05);(2)胚胎干细胞碱性磷酸酶染色阳性,Oct4、Sox2高表达,低氧组形成的中小集落及HIF-1αmRNA表达比常氧组显着增多(P<0.05);(3)结果表明,体积分数5%O2持续低氧培养利于维持饲养层细胞(小鼠胚胎成纤维细胞)的活力和胚胎干细胞的干性维持。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2018年09期）
程雪军[6]（2018）在《用大鼠星形胶质细胞作为饲养层制备小鼠少突胶质前体细胞的研究》一文中研究指出转基因小鼠少突胶质前体细胞正在越来越多的应用于探索调节少突胶质细胞分化和发育的分子机制以及相关信号通路。然而,不同于大鼠的是,小鼠少突胶质前体细胞依然难以制备。至今,关于大、小鼠少突胶质前体细胞制备种间差异的原因仍然未知。在本实验中,我们发现大鼠星形胶质细胞更能支持小鼠少突胶质前体细胞的体外增殖及生存。小鼠星形胶质细胞在体外培养中表现出较差的生命力,用大鼠和小鼠星形胶质细胞制备的条件培养基分别来培养小鼠少突胶质前体细胞,发现小鼠星形胶质细胞条件培养基支持少突胶质前体细胞自我更新的能力显着低于大鼠。这些结果解释了为何小鼠中枢神经组织体外培养难以获得少突胶质前体细胞和星形胶质细胞分层生长的混合培养物。基于以上发现,我们将经钝化处理的大鼠星形胶质细胞作为饲养层来培养小鼠少突胶质前体细胞,获得了数量较多且纯度较高的小鼠少突胶质前体细胞。(本文来源于《杭州师范大学》期刊2018-03-01）
张晓芳,赵姝灿,张豫,郑桂纯,李京华[7]（2017）在《粤黄鸡PGCs无饲养层培养体系的建立》一文中研究指出原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)是生殖母细胞的前体细胞,作为一种多能干细胞,具有与胚胎干细胞相似的形态及分化潜能,能在体外进行培养、传代,并在一定条件下保持未分化状态及多能性。现阶段PGCs的体外培养体系中往往存在饲养层细胞和血清,为后期研究造成了困难和混淆。为建立粤黄鸡(Gallus gallus)PGCs的体外无饲养层培养体系。本研究通过改进培养体系成分分离纯化PGCs并进行体外培养。结果显示,所得无饲养层培养的PGCs直径为6~8μm,生长曲线呈现"S"形,群体倍增时间(3.75±0.15)d,结果表明,PGCs具有良好的增殖生长状态;对分离纯化的PGCs特异性基因胚胎阶段特异性表面抗原(stage specific embryonic antigen-1,SSEA-1)和类无精症缺失基因(deleted in azoospermia-like,DAZL)进行免疫荧光鉴定,结果显示二者在PGCs均有表达,经化学免疫染色的细胞可观察到绿色的荧光;将无饲养层培养的PGCs用PKH26标记,注射到孵化至17~20期受体鸡胚的背主动脉中,继续孵化至第5.5天,结果显示,分离纯化并通过PKH26标记的鸡胚血液PGCs仍然具有PGCs的特性,可随鸡胚的血液循环定殖于鸡胚性腺中。本研究优化了PGCs体外培养的条件,建立无饲养层无血清培养体系,为家禽PGCs应用于现代保种技术、转基因技术以及家禽的发育生物学等研究领域提供了重要的技术支持。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2017年08期）
王孟丽,刘俊晓[8]（2017）在《诱导多能干细胞培养中饲养层制备的条件优化》一文中研究指出目的建立分离培养小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblast MEF)的体系,探讨诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cell,iPSC)培养所需饲养层的最佳制备方法,制备高质量的IPSC饲养层细胞。方法采用胰蛋白酶消化法,将昆明小鼠胚胎制成细胞悬液接种培养。用不同浓度的丝裂霉素C处理MEF细胞制备饲养层,观察处理后的细胞活力及有无再增殖现象,在制备的饲养层细胞上接种IPS细胞,观察各组IPS细胞生长状态。结果采用0.0625%胰蛋白酶消化孕12.5-14.5d雌鼠胚胎组织获得高活力的MEF细胞,用15μg/ml的丝裂霉素C处理后MEF细胞无明显增值,细胞活力在90%以上,其IPS细胞生长状况最好,效果最佳。结论该方法可获得高活力的MEF细胞。15μg/ml的丝裂霉素C处理1.5h后的MEF细胞制成的饲养层最适于IPS细胞生长。(本文来源于《中国优生与遗传杂志》期刊2017年05期）
岑妍慧,杨瑞,贾微,李中华,钟振国[9]（2017）在《饲养层条件下昆明小鼠胰岛来源胰腺干细胞的建系及鉴定（英文）》一文中研究指出背景:到目前为止关于胰腺干细胞能建株甚至建系的报道极少,而且建系率较低,纯化出胰腺干细胞仍有一定的困难。目的:探索一套更合理、更有效的胰腺干细胞在体外分离及连续传代的技术和方法,使其有望能建立成细胞株甚至细胞系,为后续胰腺干细胞治疗糖尿病的相关研究奠定基础。方法:实验首先通过Percoll不连续密度梯度离心的方法,使小鼠胰腺的内、外分泌部的细胞分布在不同的密度界面,然后获得来源于胰腺内分泌部即胰岛的干细胞,使用经丝裂霉素C作用的小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层,在饲养层条件下对来源于胰岛的胰腺干细胞进行连续传代,使其连续传至第30代,并通过生长特性检测、形态学观察、相关分子标志物鉴定以及分化特性鉴定等一系列的检测完善对该胰岛来源的胰腺干细胞株检测和鉴定。结果与结论:在连续传代过程中胰腺干细胞均体现了活跃的分裂增殖能力,并保持典型的干细胞形态学特征、表达胰腺干细胞分子标志物Nestin,经诱导分化后表达胰岛素基因,体现出了分化潜能。结果说明,实验饲养层条件下成功建立并鉴定了昆明小鼠胰岛来源的胰腺干细胞株。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2017年13期）
赵振强[10]（2017）在《不同饲养层对人胚胎干细胞分化为多巴胺能神经元的影响》一文中研究指出研究背景和目的小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)和人包皮成纤维细胞(HFFs)是人类胚胎干细胞(hESCs)建系和维持最常用的饲养层。MEFs和HFFs在hESCs增殖和状态维持方面均有差异,且对hESCs的心肌细胞分化潜能有影响。本研究目的是评价MEFs和HFFs对hESCs的多巴胺能神经分化的影响。研究方法为了使培养条件变异对神经分化影响的最小化,本研究选用了自有的、在MEFs建系的HN4人胚胎干细胞系和在混合饲养层(MFCs,MEFs:HFFs = 1:1)建系的P96人胚胎干细胞系。分化实验在无饲养层培养系统中完成。采用SMAD通道双抑制剂诱导启动多巴胺能神经分化,采用倒置相差显微镜、免疫细胞化学法、实时荧光定量PCR、扫描电镜和透射电镜、以及膜片钳等检测方法从形态学、分子生物学标记物、转录因子基因表达、叁维超微结构、电生理特性等方面分析人胚胎干细胞源多巴胺能神经元的各种特征。通过SPSS19.0软件进行分析。P<0.05认为有统计学差异。研究结果HN4和P96细胞系在分化过程中均表现出从典型铺路石样、高核质比的干细胞形态分化为典型神经元的形态学变化过程。HN4和P96源神经元均表达多巴胺脱羧酶(TH)阳性,P96系分化细胞中TH阳性细胞比率更高(P<0.05)。扫描电镜和透射电镜结果显示HN4和P96源多巴胺能神经元均显示典型的神经元形态及突触结构,并形成复杂的神经网络。实时荧光定量PCR结果显示,与HN4神经元相比,P96神经元FOXA2、PITX3、NURR1、TH表达上调(P<0.05)。膜片钳结果显示:在电压钳模式下,HN4和P96源多巴胺能神经元均记录到了电压门控性钠、钾离子电流,Y-氨基丁酸(GABA)和谷氨酸(Glu)等配体门控性电流及自发性突触后电流。在电流钳模式下,HN4和P96源多巴胺能神经元均记录到了动作电位序列发放。动作电位发放的个数与去极化电流的强度均呈线性关系。HN4和P96源多巴胺能神经元动作电位时程均大于2mS。HN4,和P96源多巴胺能神经元静息电位分别为-63.38 ± 0.01和-58.7 ± 0.04 mV,阈电位分别为-36.15 ± 0.34和-39.58 ± 0.17 mV,两者差异呈显着性。HN4和P96源多巴胺能神经元对去极化注射电流刺激均呈现出“爆发”性的放射模式,在连续发放的动作电位序列中,动作电位幅度递减,而动作电位的时程逐渐延长。研究结论1、在MEFs和HFFs上的建系的人胚胎干细胞系HN4及P96均可以分化为形态成熟的多巴胺能神经元,并且形成复杂的神经网络及典型的突触结构;P96细胞系更倾向于分化为多巴胺能神经元。2、在MEFs和HFFs上的人胚胎干细胞系HN4及P96均可以分化电生理功能成熟的多巴胺能神经元;P96源多巴胺能神经元兴奋性更高。(本文来源于《南方医科大学》期刊2017-03-15）
饲养层论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
该研究以14~18天胎兔为试验对象,体外分离培养扩增原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs),观察其形态变化及集落形成过程。用AKP染色(alkaline phosphatase staining)及分子生物学等方法鉴定兔PGCs,结果均为阳性,将兔PGCs分别接种于鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryo fibroblast,MEF)、兔胚胎成纤维细胞(rabbit embryo fibroblast,REF)制成的不同密度饲养层来确定种属跟密度对体外培养兔PGCs的影响。结果显示,兔PGCs接种于用同源胚胎成纤维细胞所制成的密度为6×104的饲养层上所得到的集落个数最多,集落形态最好,分化速度较慢。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
饲养层论文参考文献
[1].周芳颖,刘玉琴.饲养层细胞作用机制研究进展[J].基础医学与临床.2019
[2].王亚丹,虎啸,丁雪粉,朱邯豫,赵玉玺.饲养层种类及密度对体外培养兔原始生殖细胞的影响[J].中国细胞生物学学报.2018
[3].任亚辉.甲醇固定法制备饲养层细胞的应用和作用机制[D].西北农林科技大学.2018
[4].虎啸.兔原始生殖细胞（PGCs）无血清无饲养层培养的研究[D].河南农业大学.2018
[5].魏含清,裴轶劲,王丹丹,蒋杨,王春.持续低氧对小鼠胚胎成纤维细胞增殖及饲养层制备的影响[J].中国组织工程研究.2018
[6].程雪军.用大鼠星形胶质细胞作为饲养层制备小鼠少突胶质前体细胞的研究[D].杭州师范大学.2018
[7].张晓芳,赵姝灿,张豫,郑桂纯,李京华.粤黄鸡PGCs无饲养层培养体系的建立[J].农业生物技术学报.2017
[8].王孟丽,刘俊晓.诱导多能干细胞培养中饲养层制备的条件优化[J].中国优生与遗传杂志.2017
[9].岑妍慧,杨瑞,贾微,李中华,钟振国.饲养层条件下昆明小鼠胰岛来源胰腺干细胞的建系及鉴定（英文）[J].中国组织工程研究.2017
[10].赵振强.不同饲养层对人胚胎干细胞分化为多巴胺能神经元的影响[D].南方医科大学.2017
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