导读:本文包含了人防御素论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:人防,天然免疫,蛋白,获得性免疫,质粒,细胞,葡萄球菌。
人防御素论文文献综述
尚晓宇,顾国威,柳国权,齐靖,解强[1]（2019）在《人防御素HD-5在胃癌发生发展中的作用研究》一文中研究指出目的研究人防御素HD-5在胃癌发生发展中的作用,探讨其作为胃癌标志物的可能性。方法组织标本来自于广州市番禺区中心医院接受胃癌切除手术的患者,采用免疫组化、实时荧光定量PCR技术比较HD-5在胃癌组织和正常组织中的表达差异,并通过细胞培养、细胞转染技术在胃癌细胞系AGS中过表达HD-5基因,研究其对胃癌细胞增殖能力、迁移能力和裸鼠成瘤的影响。结果 HD-5在胃癌组织中的mRNA水平和蛋白表达均明显低于周围正常组织(P<0.05),胃癌细胞系AGS中过表达HD-5显着抑制细胞增殖能力(P<0.05),细胞迁移能力(P<0.05);此外,HD-5过表达的AGS细胞在裸鼠体内的生长速度较对照组显着变慢(P<0.05)。结论 HD-5能够抑制胃癌的增殖、迁移和体内肿瘤生长速度,是一个潜在的肿瘤抑制因子。(本文来源于《分子诊断与治疗杂志》期刊2019年04期）
陈飞,任琛琛,杨立,张小安,刘灵[2]（2019）在《HPV感染患者阴道灌洗液人防御素5、人防御素2浓度测定》一文中研究指出目的:研究人乳头瘤病毒(HPV)感染患者阴道灌洗液人防御素5(HD-5)、人防御素2(HBD-2)浓度的变化,分别探讨HD-5、HBD-2与HPV不同感染状态的关系。方法:研究对象分为HPV持续感染组(n=30)、HPV一过性感染组(n=30)及阴性对照组(n=11)。采用ELISA法检测患者阴道灌洗液中HD-5、HBD-2的浓度。结果:与阴性对照组相比,HPV持续感染组与HPV一过性感染组阴道灌洗液HD-5、HBD-2的水平均升高(P <0. 05),但两HPV感染组间差异无统计学意义(P> 0. 05); HD-5曲线下面积为0. 762,HD-5诊断HPV感染的最佳临界值为37. 54 ng/L,诊断敏感度为58. 3%,特异度为100%。HBD-2曲线下面积为0. 775,HBD-2诊断HPV感染的最佳临界值为458. 5 ng/L,诊断敏感度为53. 3%,特异度为82. 0%。结论:HD-5及HBD-2在HPV感染早期起作用,可作为宫颈肿瘤的辅助诊断指标。(本文来源于《郑州大学学报(医学版)》期刊2019年03期）
刘文彬,吴立蓉,汪洁,李小波,植奇升[3]（2019）在《人防御素2和酸性成纤维因子1融合蛋白hBD2-haFGF1的构建、表达及生物信息学分析》一文中研究指出目的为开发新型抗痤疮药物,构建具有杀菌和促进愈合的人防御素2和酸性成纤维因子1融合蛋白。方法以人肝癌细胞HepG2 cDNA为模板,分别扩增hBD-2基因和haFGF-1基因。采用SOE-PCR方法构建hBD2-haFGF1融合基因。构建hBD2-haFGF1/pET21b原核表达载体,并转化入E.coli BL(21)进行诱导表达。通过生物信息学方法对融合蛋白的理化性质进行预测和分析。结果 RT-PCR分别获得123 bp的hBD-2基因和420 bp的haFGF-1基因,SOE-PCR获得了588 bp的hBD2-haFGF1融合基因,成功构建原核表达载体hBD2-haFGF1/pET21b,经过IPTG诱导,hBD2-haFGF1融合蛋白可在E.coli BL(21)中有效表达,相对分子量为23 800。生物信息学显示hBD2-haFGF1蛋白适合在大肠杆菌中表达,是一个不稳定的亲水性蛋白,具有较好的热稳定性。hBD2-haFGF1融合蛋白主要由延伸链、β转角和随机卷曲组成,结构中保留了β防御素保守结构域和FGF超家族保守结构域。结论构建了hBD2-haFGF1融合基因,并在体外诱导表达了hBD2-haFGF1融合蛋白,通过生物信息学分析对融合蛋白的理化性质进行了预测和分析,上述研究为进一步的纯化和活性分析奠定了研究基础。(本文来源于《广东药科大学学报》期刊2019年01期）
孙娇,朱佩华[4]（2016）在《人防御素1研究进展》一文中研究指出防御素(defensins)为参与机体最初防御活动的小分子肽,是极为重要的一类内源性抗菌肽,具有广谱的抗微生物活性,能有效地杀灭病毒、细菌、真菌、螺旋体等,对肿瘤细胞也有细胞毒作用,在粘膜上皮广泛表达,是粘膜防御系统的重要介质,还可作为趋化因子连接天然免疫和获得性免疫。人体防御素主要以α-防御素、β-防御素两种为主,目前已经识别和分离出6种α-防御素和6种β-防御素。研究表明,hβD1具有广谱的抗菌活性。在体外hβD1在毫摩尔浓度下对革兰阳性菌、革兰阴性菌、真菌、螺旋体、(本文来源于《家庭医药.就医选药》期刊2016年08期）
王成[5]（2016）在《基于人防御素5(HD5)高效抗菌肽的设计、筛选及构效关系研究》一文中研究指出人体受辐照后免疫力低下,容易被外源病原菌感染。随着耐药现象日趋严重[1],受照者被耐药细菌感染的风险正逐渐提升。由于肠道对辐照非常敏感,且肠腔内定殖着大量细菌,辐照常诱发机体肠源性感染[2]。肠道防御素是存在于哺乳动物体内的两亲性天然免疫蛋白,具有抗菌作用强、不易被细菌耐受等特点[3,4]。人防御素5(HD5,小鼠体内对应的是隐窝素4)由小肠隐窝Paneth细胞分泌[5],可调节肠道菌群[6-8],保护机体免受病原菌侵袭[9,10],在放射性肠源性感染防治方面具有很好的应用前景。我们前期围绕HD5开展了系列研究,探讨了放射性肠源性感染时HD5的表达变化及生理意义[2,11],并通过基因重组表达技术成功制备出高纯度HD5[12]。然而,受盐离子和负电荷蛋白的屏蔽干扰,HD5在体内的抗菌作用受到限制[13]。为此,本研究旨在从构效角度优化HD5的氨基酸序列,使其能够在复杂环境中依然保持高效抗菌性,提高HD5的生物利用价值。HD5由32个天然氨基酸组成(ATCYCRTGRCARESLSGVCEISGRLYRLCCR);半胱氨酸以Cys1-6/Cys2-4/Cys3-5方式配对形成叁对二硫键,使HD5呈现?片层样结构[14]。HD5具有多齿结合能力,可呈浓度依赖地形成多聚体[15],放大单体的抗菌效应[16]。新近研究发现,人?防御素1(HBD1)在肠道内可被硫氧化还原蛋白(Trx)催化还原成线性多肽,且二硫键还原后HBD1的抗菌活性显着增强[17]。通过体内外分子生物学实验,我们首先确定了线性HD5在肠腔中的存在,继而发现与HBD1不同,二硫键还原减弱了HD5的抗菌活性。HD5的C末端有一个由Arg25-Leu26-Tyr27-Arg28组成的抗菌活性区域:碱性氨基酸(正电荷)Arg驱动多肽静电吸附细菌,疏水性氨基酸Leu和芳香族氨基酸Tyr破坏细菌菌膜[16,18-20]。Glu21是人?防御素中除保守盐键Glu外唯一的酸性氨基酸(负电荷),邻近HD5的活性区域[21]。我们将Glu21反电荷替换为Arg,发现E21R突变可增强HD5的抗菌性,但破坏了多肽的聚合作用。在此基础上,我们将E21R-HD5的Thr7替换为Arg。T7R突变不仅可以进一步强化E21R-HD5的抗菌活性,还能恢复单体肽的聚合作用,致使T7E21R-HD5突变肽在高浓度盐溶液和血清中依然保持高效抗菌性。二硫键的正确配对能够保护HD5免受胰蛋白酶降解,利于多肽在体内的稳定性[22]。由于线性肽容易合成,且在局部组织,如角膜、皮肤、呼吸道等,胰蛋白酶含量极低,应用线性抗菌肽治疗局部耐药细菌感染成为新近研究热点[23-25]。综合氧化还原和arg突变对hd5抗菌性的影响,我们设计出仅含一对二硫键、具有高效抗多重耐药鲍曼不动杆菌(mdra.baumannii)活性的突变肽。除了抗菌肽的设计、筛选,本研究还采用一系列生物化学方法分析了多肽的结构-效应关系,探讨了多肽的抗菌机制。所取得的主要研究结果与结论如下:1.联合应用醋酸尿素-聚丙烯酰氨凝胶电泳(au-page)westernblot和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(maldi-tof)首次在人小肠液中检测到以氧化型和还原型两种形式存在的hd5;体外实验证实,肠道硫氧化还原蛋白trx可催化还原氧化型hd5。2.氧化型hd5二硫键还原后抗菌活性减弱;细菌表面电位检测、生物膜干涉(bli)、npn摄取、e.coliml35内膜渗透及流式细胞检测等实验发现还原型hd5静电吸附细菌、与细菌外膜脂质a相互作用、破坏细菌内外膜及诱导菌膜去极化的能力均明显减弱,揭示了氧化型hd5还原后抗菌作用减弱的机制。3.氧化型hd5二硫键还原后lps中和活性增强;圆二色谱(cd)、等温滴定量热(itc)、lbp阻断、免疫荧光及荧光定量pcr等实验发现还原型hd5结构弹性增强,可调整构象结合lps,阻断lps与下游lps结合蛋白(lbp)相互作用,抑制tlr4-nf-?b信号通路的活化,减少炎症因子的释放。4.虚拟克隆计数抗菌实验发现将glu21突变为arg(e21r)能够增强hd5的抗菌作用;生物膜干涉(bli)、npn摄取及e.coliml35内膜渗透实验检测到e21r-hd5结合细菌外膜脂质a和脂磷壁酸(lta)及破坏细菌内外膜的能力均明显增强,阐明了e21r突变增强hd5抗菌性的机制。5.itc观察到e21r突变后hd5的自缔合能力减弱;利用x-射线单晶衍射,我们解析了e21r-hd5的晶体结构并将其提交至蛋白数据库(pdb),编号为4rbx;e21r-hd5呈现为典型的单体肽。自缔合能力减弱可致使防御素抗菌性下降;e21r突变虽然破坏hd5的自缔合,却增强了多肽的抗菌作用,提示适宜的arg突变可补偿hd5因构象缺陷引起的功能不足。6.晶体可视化分析发现glu21、thr7、ser23及gly24残基均邻近hd5的c末端抗菌活性区域;将这些位点分别突变为arg(e21r、t7r、s23r、g24r),虚拟克隆计数抗菌实验结果显示各突变肽的活性强弱依次是:e21r-hd5>t7r-hd5>s23r-hd5≈g24r-hd5。7.虚拟克隆计数抗菌实验和itc发现t7r突变不仅可以增强e21r-hd5的抗菌作用,还能提高单体肽的自缔合能力。利用X-射线单晶衍射,我们解析了T7E21R-HD5的单晶结构并将其提交至PDB,编号为4RBX;T7E21R-HD5呈现为非典型二聚体。该结果首次证实Arg突变可促进单体肽自缔合。8.BLI、NPN摄取及E.coli ML35内膜渗透实验发现T7E21R-HD5结合细菌外膜脂质A和LTA及破坏细菌内外膜的能力均强于E21R-HD5,揭示了T7R突变增强E21R-HD5抗菌活性的机制。9.T7E21R-HD5能够耐受盐离子的屏蔽干扰,在高浓度血清中依然保持高效抗菌性。此外,该突变肽溶血性低、可耐受胰蛋白酶降解。10.Ala突变证实去除二硫键或仅保留一对二硫键均可减弱HD5的抗MDR A.baumannii活性;其中,含Cys2-4二硫键的突变肽HM3抗菌作用相对较强。将HM3的非碱性和非疏水性氨基酸突变为Arg后,突变肽HM5的抗菌性显着增强。11.细菌涂布计数抗菌实验发现突变肽HM5呈浓度、时间依赖地杀伤MDR A.baumannii,并在生理浓度盐溶液中依然保持高效抗菌性;BLI、NPN摄取及细胞流式检测到突变肽结合细菌外膜脂质A、破坏细菌外膜及诱导菌膜去极化的能力均显着增强,阐明了HM5的抗菌机制。12.利用基因重组表达技术,我们制备了高纯度的A.baumannii外膜蛋白A(OMPA)。A.baumannii OMPA具有细胞毒性;突变肽HM5中和OMPA的活性强于HD5。BLI检测到HM5与OMPA的相互作用强于HD5,提示结合能力增强与其OMPA中和相关。(本文来源于《第叁军医大学》期刊2016-05-01）
朱颜鑫,江滟[6]（2016）在《人防御素的抗病毒活性及机制》一文中研究指出防御素属于阳离子抗菌肽家族,具有广泛的抗微生物活性、细胞毒性和免疫趋化作用,在先天免疫系统中起着重要作用。近些年,随着防御素抗病毒的研究更加深入,越来越多的证据表明防御素不仅能直接灭活病毒和阻止病毒吸附、穿入及细胞内信号转导抑制病毒复制,还可以间接通过介导免疫反应发挥抗病毒作用。这种天然的抗菌肽具有抗包膜病毒和无包膜病毒的活性。(本文来源于《医学综述》期刊2016年06期）
刘同欣[7]（2015）在《输卵管特异性表达人防御素4基因转基因鸡的制备》一文中研究指出抗菌肽是一类具有生物活性的小分子多肽,具有广谱的抗菌活性且不易引起细菌的耐药性,因其独特的抑菌机制,未来可能成为一种新型的抗菌药物。防御素是人体中一类重要的抗菌肽,根据结构可将其分为α和p防御素。人的防御素4(HNP4)是一种由DEFA4基因编码的α类型的防御素,成熟的HNP4由33个氨基酸残基组成,分子量约为3.7 kD。HNP4具有高效的抑菌活性,其抗大肠杆菌的活性是其他α防御素(HNP1～HNP3)的100倍左右,对链球菌和白色念珠菌的抗菌活性是其他α防御素(HNP1～HNP3)的4倍左右,另外HNP4还可以抵抗HIV及HSV等病毒的感染。利用动物生物反应器生产重组蛋白是一种具有应用前景的技术。鸡的输卵管生物反应器是理想的动物生物反应器之一,其优点在于表达的外源蛋白能够分泌到蛋清中,可避免对鸡本身造成伤害,同时蛋清成分简单,便于后期的纯化。但是鸡的生殖系统较特殊,鸡胚的发育在蛋壳内进行,这些特点使得制备转基因鸡较困难。目前利用慢病毒和PGCs制备转基因鸡被认为是最可行的两种方法,但因外源基因的生殖传递效率较低,使得制备转基因鸡的技术仅在少数的发达国家有成功报道。本课题结合输卵管生物反应器的优势,利用慢病毒制备在输卵管中特异表达HNP4的转基因鸡。首先克隆了包含激素依赖性调控元件(SDRE)和负调控元件(NRE)的2.8 kb卵清蛋白启动子(Ova),并在细胞水平上验证了该启动子的生物活性。同时,通过化学合成的方法获得了5’端带有鸡溶菌酶信号肽序列并经过鸡密码子优化的HNP4序列,进而构建了利用ova启动子驱动HNP4基因表达的载体(pWPXL-Ova-HNP4和pWPXL-Ova-HNP4-His),并将其包装成相应的慢病毒。将慢病毒载体注射到自来航鸡胚的胚盘(X期)下腔中以制备转基因鸡,共注射了669个鸡胚,孵化得到了218只小鸡,孵化率为32.6%。将10只G0代生殖嵌合的公鸡与非转基因母鸡交配,在1274只后代中,鉴定得到了15只G1代转基因阳性鸡,生殖传递效率为0.6%～3.4%。Southern blot和Genome Walking结果显示G1代转基因鸡具有6个不同的插入位点,即单拷贝的HNP4分别插入到了鸡的1,2,3,4,6以及24号染色体中。对G1和G2代转基因鸡进行RT-PCR和免疫荧光分析,结果表明HNP4在G1和G2代鸡的输卵管组织中特异表达,而且ELISA检测的结果表明HNP4在G1和G2代转基因杂合体鸡蛋清中的表达量为1.65 μg/mL～10.18 μg/mL,不同插入位点的HNP4基因在转录和翻译水平存在显着差异。综上所述,本论文成功制备了能够在蛋清中表达HNP4的转基因鸡,且外源基因HNP4能够在G1和G2代转基因鸡中稳定表达,这一研究成果为利用输卵管反应器生产药物蛋白奠定良好的基础。(本文来源于《中国农业大学》期刊2015-11-01）
刘文俊,吴倩,高慧,徐碧,张鑫宇[8]（2014）在《类弹性蛋白和内含肽融合表达纯化重组人防御素3》一文中研究指出为建立简单、经济的重组人β防御素3(HBD3)制备方法,将HBD3序列插入类弹性蛋白(ELP)与△I-CM内含肽融合表达载体,将重组载体转化大肠杆菌,20℃下用IPTG诱导融合蛋白表达,在优化条件下进行相变循环,用内含肽自裂解活性释放目的蛋白,用琼脂扩散和最小抑菌浓度法测定重组HBD3抗菌活性。结果表明:融合蛋白在重组菌中获得可溶性表达,第1轮相变循环的纯度为85.7%,再次相变循化的纯度达93.1%;内含肽裂解温度为28℃,孵育12 h裂解效率达90.3%;重组HBD3回收率达74.8%,产量为0.98 mg·L~(-1),纯度为92.6%,内毒素含量低于0.03 U·mg~(-1)(蛋白),对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有显着的抑菌活性。说明基于ELP相变循化和内含肽自裂解的重组蛋白表达与纯化系统可用于重组}tBD3的规模化制备。(本文来源于《扬州大学学报(农业与生命科学版)》期刊2014年04期）
黄强[9]（2014）在《人防御素-3对金黄色葡萄球菌生物膜影响的实验研究》一文中研究指出金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是一种常见的病原菌，也是各种原发感染细菌的生物。创伤内植物相关性感染败血症病原菌，金黄色葡萄球菌占15.4%，排名第二。金黄色葡萄球菌作为生物膜的主要组成部分，可以通过集体免疫系统的识别，从而具备很高的耐药性。该种感染不容易被控制，所以，对于抑制金黄色葡萄球菌生物膜研究就极具价值。人β-防御素-3（Human beta-defensin3，HBD-3）是一种新发现的人体骨细胞产生的抗菌肽，对金葡菌有极强的杀伤力。与其结构相似的α-防御素有抗生物膜作用，但HBD-3对生物膜的作用未见报道。我们推测HBD-3对金葡菌生物膜可能也有作用。因此，我们对HBD-3对金黄色葡萄球菌生物膜的影响进行了探讨。金黄色葡萄球菌形成生物膜的过程分为定植阶段（0-3hours）粘附阶段（3-6hours）、聚集阶段(6-12h)、成熟阶段(18-24h)、老化阶段（72h以后）。我们对金黄色葡萄球菌生物膜的形成过程分阶段的划分，对HBD-3作用于金葡菌生物膜各个阶段的影响进行研究。目前对金黄色葡萄球菌生物膜的形成机制仍不清楚。初步研究表明，生物膜的形成首先连接到细胞壁相关因素的调节细胞表面，然后细菌介导的介导因子是一种叫做多糖胞间粘附素(polysaccharide intercellular adhesin，PIA)的物质，细胞增殖和细胞团块聚集到对方，然后形成生物膜。这个过程涉及在生物膜形成的多种基因。用对特定的金黄色葡萄球菌实验室菌株敲除icaA基因的研究发现，icaA缺失的菌株在某些条件下仍能形成生物膜。另外， dltABCD操纵子也被认为是生物膜形成的关键调控因素之一。RNA干扰可以有效的抵制基因的靶向性，和“基因敲除”记为相似，主要是与siRNA转录后导致基因不能表达的现象。有报道能够代替基因打靶技术。我们构建dltB基因siRNA干扰质粒，为探讨机制提供了一条新的思路。材料与方法：菌株：金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC25923；动物：Wister SD大鼠；试剂：HBD-3、万古霉素、克林霉素；荧光增白剂、LIVE/DEAD试剂盒；试样：镍铬合金、铝合金、超高分子聚乙烯；仪器：激光扫描共聚焦显微镜。1. HBD-3对金黄色葡萄球菌生物膜的作用：实验分组按照药物试剂类别及其最低抑菌浓度（Minimum inhibitory concentration,MIC）的倍数梯度1/2MIC、1MIC、2MIC、4MIC分组。HBD-3为4、8、16、32ug/ml的浓度梯度，万古霉素为0.25、0.5、2、8ug/ml的浓度梯度，克林霉素为0.125、0.25、0.5、1.0ug/ml的浓度梯度。将金黄色葡萄球菌培养后，分别于3、6、12、18、24h等时间节点加入各组药物，药物作用6h后染色观察。荧光增白剂染色生物膜用于评估生物膜的改变；LIVE/DEAD探针对死活菌区别染色用于评估膜内的活菌率。激光共聚焦显微镜观察HBD-3、万古霉素、克林霉素对金葡菌生物膜以及膜内活菌生存率的影响。2. HBD-3对金黄色葡萄球菌生物膜影响机制的研究：金葡菌培养分别加入HBD-3、万古霉素、克林霉素，培养6h、24h后提取总RNA；逆转录合成cDNA；实验需求设计PCR引物，用设计得到的菌株cDNA为模板，进行PCR扩增检测。3.利用生物信息学，对目的序列进行筛选，合成了叁对64nt寡核苷酸。与BamHI和HindIII酶切的质粒pRNAT-U6.1/NEO连接,转化大肠杆菌DH5a。质粒扩增后经酶切、测序鉴定。4.HBD-3对内植物材料形成金黄色葡萄球菌生物膜影响的体外及体内研究：按照常用医用内植物材料镍铬合金、铝合金及高分子聚乙烯分组，分别与金黄色葡萄球菌共同培养，按时间节点分别加入HBD-3、万古霉素、克林霉素以及HBD-3+万古霉素或者HBD-3+克林霉素，染色后激光共聚焦显微镜观察；体内试验分为HBD-3组、万古霉素组及氯克林霉素组，建立大鼠皮下囊内植物感染模型，置入超高分子聚乙烯试样，在置入前试样分别在生理盐水、浓度8ug/ml的HBD-3、浓度0.5ug/ml万古霉素及浓度0.25ug/ml氯林可霉素等各药液组中浸泡20分钟，缝合后将金黄色葡萄球菌菌液注入皮下囊，术后观察大鼠生命体征变化和不同时间点的存活率，并观察试样表面金黄色葡萄球菌生物膜及膜内活菌变化。结果：1.有3株金黄色葡萄球菌形成金黄色葡萄球菌生物膜，其中以金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC25923最明显。在初始粘附阶段，HBD-3、万古霉素、克林霉素都促进了金葡菌ATCC25923分泌多糖基质的增加，使细菌分泌多糖基质时间提前。药物作用于已形成的金葡菌生物膜时，HBD-3和克林霉素能够减少金葡菌生物膜，万古霉素对成熟生物膜及生物膜内的细菌没有作用；对已形成的金葡菌生物膜，HBD-3浓度大于2MIC时能够减少生物膜内活菌率。2.在细菌与表面的粘附期以及生物膜初始形成期， HBD-3对金葡菌标准菌株ATCC25923中dltB及icaA的转录水平无明显影响，克林霉素则能够刺激dltB及icaA的转录水平显着上调，万古霉素也能上调dltB的表达，但加入万古霉素的菌株在生物膜粘附聚集期icaA转录水平无明显改变，在生物膜初步形成期icaA转录水平出现了显着上调。3.成功构建3个dltB基因的siRNA表达质粒载体（pRNAT-U6.1/NEO-shRNA-1、pRNAT-U6.1/NEO-shRNA-2、pRNAT-U6.1/NEO-shRNA-3），测序证实插入序列正确。4.体外研究：加入HBD-3后，镍铬合金，铝合金，超高分子量聚乙烯各组表面生物膜形成均减少。HBD-3+万古霉素、HBD-3+克林霉素组均能显着减少金黄色葡萄球菌生物膜的形成。大鼠术后情况，万古霉素组全部存活，克林霉素组第四天死亡1只，HBD-3第叁天及第四天各死亡1只，空白对照组第二、叁、四、五天各死亡1只。体内实验HBD-3组生物膜没有显着减少。结论：1.HBD-3能显着抑制金葡菌生物膜形成能力、降低生物膜内活菌数，对已形成的生物膜的也有同样明显抑制效果。此抗菌肽是治疗金葡菌感染以及抑制外科内植物感染的有效工具。2.对于基因dltB和icaA这些形成生物膜的关键因素，和克林霉素、万古霉素不同的是，HBD-3不会上调它们的表达，从而不会诱发生物膜的产生。3. HBD-3与在体外能够抑制内植物表面金黄色葡萄球菌生物膜的形成，并且与万古霉素、克林霉素等抗菌药对金黄色葡萄球菌生物膜感染有协同作用，但体内试验尚未发挥出其应有抗生物膜特性。上述研究结果为阐明HBD-3对金葡菌生物膜的抑制作用提供了有力的实验依据，并对其机制进行了一些初步探讨，为金葡菌生物膜感染的治疗提供了新的思路，但其用于临床还需要进一步深入研究。(本文来源于《第叁军医大学》期刊2014-11-01）
单颖,吴学敏,卢颖[10]（2014）在《人防御素6基因的克隆、亚克隆及在酵母中的分泌表达》一文中研究指出探讨人防御素6(HD-6)在毕赤酵母中表达的可行性,为进一步研究HD6的功能提供理论依据和实验基础。采用PCR方法,设计引物从cDNA文库中扩增出人α防御素6基因片段,并将其插入到克隆载体pMD-18T中,再与毕赤酵母表达载体pPICZαA重组,以得到重组的HD-6酵母表达载体pPICZαA/HD-6,并进行琼脂糖电泳和测序鉴定。再将构建好的毕赤酵母重组表达质粒pPICZαA/HD-6经SacⅠ线性化后,应用LiCl法转化毕赤酵母菌株GS115感受态中,Zeocin平板筛选,PCR鉴定转化子。经摇瓶发酵和甲醇诱导,SDSPAGE分析重组HD-6的表达。从cDNA文库中扩增出的HD-6基因片断大小正确;电泳和测序结果均证明已将此片段克隆到酵母表达载体pPICZαA内;线性化的重组质粒pPICZαA/HD-6成功转化进入毕赤酵母感受态中,PCR鉴定结果与预期相符;蛋白电泳证实重组HD-6在酵母中获得分泌表达。提示重组HD-6可以在毕赤酵母中实现分泌表达。(本文来源于《微生物学杂志》期刊2014年03期）
人防御素论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:研究人乳头瘤病毒(HPV)感染患者阴道灌洗液人防御素5(HD-5)、人防御素2(HBD-2)浓度的变化,分别探讨HD-5、HBD-2与HPV不同感染状态的关系。方法:研究对象分为HPV持续感染组(n=30)、HPV一过性感染组(n=30)及阴性对照组(n=11)。采用ELISA法检测患者阴道灌洗液中HD-5、HBD-2的浓度。结果:与阴性对照组相比,HPV持续感染组与HPV一过性感染组阴道灌洗液HD-5、HBD-2的水平均升高(P <0. 05),但两HPV感染组间差异无统计学意义(P> 0. 05); HD-5曲线下面积为0. 762,HD-5诊断HPV感染的最佳临界值为37. 54 ng/L,诊断敏感度为58. 3%,特异度为100%。HBD-2曲线下面积为0. 775,HBD-2诊断HPV感染的最佳临界值为458. 5 ng/L,诊断敏感度为53. 3%,特异度为82. 0%。结论:HD-5及HBD-2在HPV感染早期起作用,可作为宫颈肿瘤的辅助诊断指标。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人防御素论文参考文献
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