湖南省衡阳市南华大学附属第一医院湖南衡阳421001
【摘要】目的：研究分析非小细胞肺癌患者肿瘤组织中驱动基因的分子病理检测。方法：收集2016年1月--2017年6月期间的295例非小细胞肺癌石蜡组织，采用Taqman-ARMS方法，检测组织中的EGFR基因、KRAS基因、ALK基因、ROS1基因、c-Met基因、Her-2基因，观察其变化。结果：第一，EGFR基因，突变率为36.61%（108/295），KRAS基因，突变率为4.74%（14/295），Her-2基因，突变率为1.01%（3/295）。第二，295例患者中，ALK融合基因率9.15%（27/295），ROS1融合基因阳性率为2.37%（7/295），c-Met基因扩增率为4.06%（12/295）。第三，295例标本中，13例各驱动基因双突变共存型。结论：非小细胞肺癌患者，EGFR基因基因19及21外显子与ALK融合基因的突变率较高，根据基因突变亚型分类，可指导临床治疗。同时，KRAS、ROS1、c-Met和Her-2基因基因，突变率虽然不高，但需予以重视。
【关键词】非小细胞肺癌；肿瘤组织；驱动基因；分子病理检测
如今，肺癌，成为危害人类生命健康的重要疾病，且多表现为非小细胞肺癌。以往，肺癌，一般接受放化疗、支持治疗等综合治疗，在一定程度上，可控制病情，但疗效欠理想[1]。近些年，靶向治疗，得到了医师的普遍关注，其优势日渐突出，拥有广阔的前景。然而，驱动基因检测，是靶向治疗的重要环节。在此，本文以295例患者为对象，探讨分析了非小细胞肺癌患者肿瘤组织中驱动基因的分子病理检测。现报道如下：
1资料与方法
1.1一般资料
选择我院2016年1月--2017年6月期间经手术切除、穿刺活检的295例非小细胞肺癌标本，作为研究对象。
1.2方法
1.2.1仪器与试剂
（1）由美国Stratagene公司生产的Mx3000P实时荧光定量PCR仪。（2）上海创萌生物科技有限公司提供的B-500核酸蛋白质浓度测量仪。（3）试剂盒包括FFDE样本DNA分离试剂盒、人EGFR基因突变定性检测试剂盒、人Her-2基因突变定性检测试剂盒、人ALK基因表达检测试剂盒、人KRAS基因突变定性检测试剂盒、人c-Met基因扩增检测试剂盒、人ROS1基因表达检测试剂盒，所有试剂盒均由福建厦门艾德生物医药科技有限公司提供。
1.2.2提取DNA
借助FFDE样本DNA分离试剂盒，提取组织，与苏木精—伊红染色（HE）进行比照，基于显微镜作用下，对肿瘤区域进行标记，切片时，仅仅选择与肿瘤相关的区域，制作包含肿瘤区域的DNA组织蜡块，厚10um，连续切片，共5张，参照试剂盒，规范操作。提取DNA后，采用紫外分光光度计，对DNA质量与浓度进行测量。根据DNA测量浓度，适当稀释，达到2-5mg/L标准，以供备用。
1.2.3检测非小细胞肺癌肿瘤组织的驱动基因
将DNA作为模板，使用对应的试剂盒，按照说明书，采用Mx3000P实时荧光定量PCR仪，予以扩增处理。
2结果
2.1基因突变
EGFR基因，108例基因突变，突变率为36.61%（108/295），其中，外显子19占15.93%（47/295），外显子21占17.28%（51/295）。
KRAS基因，14例基因突变，突变率为4.74%（14/295），外显子2的密码子12占3.38%（10/295），外显子2的密码子13占1.35%（4/295）。
Her-2基因，3例基因突变，突变率为1.01%（3/295），A型突变2例，B型突变1例。
2.2融合基因与基因扩增
295例患者中，27例ALK融合基因，占9.15%（27/295），均表现为A型融合。7例ROS1融合基因，阳性率为2.37%（7/295），2例A型融合，2例B型号融合，3例A型与B型融合共同存在。另外，c-Met基因，12例扩增，扩增率为4.06%（12/295）。
2.3驱动基因共存型
本次研究的295例标本中，13例各驱动基因双突变共存型，占4.41%（13/295），其中，3例（1.01%）EGFR基因突变与ALK融合基因阳性共存，4例（1.35%）EGFR基因、KRAS基因突变共存，6例（2.03%）EGFR基因突变与c-Met基因扩增共存。
3讨论
近些年，在医疗技术发展的推动下，非小细胞肺癌，朝着靶向治疗方向发展，以驱动基因为基础的个体化靶向治疗，成为该病治疗的主流趋势。大量研究显示，与化疗相比，靶向治疗优势明显，不仅可延长PFS，还可以控制毒副作用，提高患者生存质量，改善预后效果[2]。因此，关于非小细胞肺癌的驱动基因检测，成为临床医师探讨的重要话题之一。
法国BM项目[3]，以9911例非小细胞肺癌患者为对象，检测10种基因突变，其中，涉及EGFR、BRAF、ALK、PIK3CA、KRAS、Her-2。结果发现，EGFR突变率10.3%，BRAF为1.7%，ALK阳性率为3.7%，PIK3CA为2.6%，KRAS高达27%，Her-2仅有0.9%。本次研究中，以295例患者为对象，经检测，结果，EGFR基因突变率为36.61%（108/295），KRAS为4.74%（14/295），Her-2为1.01%（3/295），ALK融合基因率9.15%（27/295），ROS1为2.37%（7/295），c-Met基因扩增率为4.06%（12/295）。
综上，非小细胞肺癌患者，科学检测驱动基因，掌握基因突变情况，指导靶向治疗，有助于提高临床疗效。
参考文献：
[1]徐建平，赵洁婷，叶伟，朱东波，孙晓，宋蓉蓉，许春伟，陈燕坪.非小细胞肺癌患者肿瘤组织中EGFR和KRAS基因突变的分子病理检测分析[J].临床与病理杂志，2016，36（10）：1658-1664.
[2]刘春来，李永文，董云龙，张洪兵，李颖，刘红雨，陈军.H2228细胞和EML4-ALK阳性肺癌组织中SOCS3基因启动子区甲基化状态的研究[J].中国肺癌杂志，2016，19（09）：565-570.
[3]宋业颖，许春伟，吴永芳，班怡，张博，李晓兵.非小细胞肺癌患者肿瘤组织中EGFR、K-Ras和BRAF基因突变的分子病理检测分析[J].解放军医药杂志，2015，27（04）：16-19.