雌二醇对人羊膜间充质干细胞增殖、凋亡的影响

论文摘要

目的:研究不同浓度雌二醇（estradiol,E2）对人羊膜间充质干细胞（human amniotic mesenchymal stromal cells,HAMSCs）体外培养中增殖、凋亡的影响。方法:采用改良酶消化法提取HAMSCs,流式细胞学方法和免疫荧光法鉴定提取细胞。HAMSCs培养方法分为对照组和E2组（分别加入浓度为10-5、10-6、10-7、10-8 mol/L E2）。CCK-8检测各组HAMSCs增殖情况;q RT-PCR检测干细胞特异基因Oct-4和凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:CCK-8检测显示各浓度E2组和对照组的HAMSCs增殖活性在16 d都随时间的变化而变化（F时间=2 418.132,P时间=0.000）;各浓度E2组在14 d的增殖率与对照组无明显差异;4 d后,各浓度E2组的增殖率明显高于对照组（F组别=246.601,P组别=0.000）,各浓度组间无明显差异。q RT-PCR检测显示10-6 mol/L E2组（1.00±0.10）的Oct-4 m RNA表达水平较对照组（0.58±0.16）和其他E2浓度组（1.31±0.22、0.81±0.04、0.78±0.07）上调（P=0.000,P=0.020,P=0.001,P=0.000）;除10-6 mol/L E2组（0.83±0.47,P=0.084）外,其他E2浓度组（0.49±0.25、0.38±0.19、0.32±0.10）抗凋亡基因Bcl-2基因表达量均较对照组（1.06±0.13）下调（P=0.038,P=0.015,P=0.010）。10-5 mol/L E2组（2.20±0.58）的Bax基因较对照组、其他E2浓度组（1.00±0.05、1.52±0.38、1.38±0.17、1.17±0.19）上调（P=0.001,P=0.028,P=0.012,P=0.003）。Western blot检测提示10-5 mol/L E2组（0.514±0.014）的促凋亡蛋白表达Bax较对照组（0.201±0.017）明显上调（P=0.000）,而抗凋亡蛋白Bcl-2（0.366±0.024）与对照组（0.215±0.080）之间差异无统计学意义（P=0.055）。而10-6 mol/L E2组（0.378±0.016）的促凋亡蛋白Bax较其他浓度E2组（0.514±0.014、0.547±0.036、0.577±0.028）表达降低（P=0.000）。结论:E2促进HAMSCs的增殖呈时间依赖性,高浓度E2（10-5 mol/L）促进HAMSCs凋亡,较高浓度E2（10-6 mol/L）维持HAMSCs活性并保护其分化潜能。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 组织标本
•     1.1.2 主要试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 细胞分离
•     1.2.2 细胞传代培养
•     1.2.3 流式细胞学鉴定第3代HAMSCs表面标志物
•     1.2.4 免疫荧光鉴定HAMSCs特异性蛋白表达
•     1.2.5 不同浓度E2处理HAMSCs
•     1.2.6 不同浓度E2下HAMSCs的生长曲线
•     1.2.7 qRT-PCR检测干细胞特异基因Oct-4, 凋亡相关基因bcl-2、bax的表达
•     1.2.8 Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白的表达量
•   1.3 统计学分析
• 2 结果
•   2.1 HAMSCs的生长特性及鉴定
•   2.2 不同浓度E2对HAMSCs增殖影响
•   2.3 qRT-PCR检测Oct-4、Bcl-2、Bax mRNA表达
•   2.4 Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达量
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 毛艳华,阳媛,张应凤,孙聪聪,陈芯培,王佳

关键词: 间充质干细胞,雌二醇,增殖,凋亡

来源: 重庆医科大学学报 2019年03期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 重庆医科大学附属大学城医院妇产科

基金: 重庆市卫生计生委医学科研资助项目(编号:20141014),重庆市医疗特色专科建设资助项目(编号:2013-46)

分类号: R329.2

DOI: 10.13406/j.cnki.cyxb.001995

页码: 282-288

总页数: 7

文件大小: 2708K

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