导读:本文包含了组成性表达论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,低氧,诱导,蛋白,周期,树突,生物防治。
组成性表达论文文献综述
王锋[1]（2017）在《椎间盘髓核细胞组成性表达低氧诱导因子-1α的发育基础以及类泛素化修饰调控机制》一文中研究指出第一部分椎间盘形成、发育、退变整个自然史的组织学与影像学演变目的探明椎间盘从胚胎期形成到老化后退变的整个自然史,细化认识椎间盘形成、发育、退变过程中的组织病理学演变。方法获取胚胎第13天、14天、18天、刚出生、4周、12周、30周、60周共8个时间点大鼠脊柱正中冠状面切片。HE染色观察细胞成分及形态演变,阿利辛蓝+天狼星红复合染色观察软骨基质与纤维基质表达变化,马松染色观察肌纤维与胶原纤维表达变化,过碘酸雪夫染色评价糖元及其代谢产物糖蛋白与葡萄糖胺聚糖表达水平。免疫组织化学染色Ki67、PCNA表达分布,评价胚胎椎间盘不同解剖区域内细胞增殖活力。取刚出生、2周、6周龄叁组大鼠行脊柱MRI检查;取12周和60周龄大鼠腰段脊柱行X线、CT、MRI检查。结果胚胎期大鼠椎间盘形成过程中脊索结构发育成髓核,轴旁中胚层分化成生骨节后其头侧的非致密区发育成椎体和软骨终板,而尾侧的致密区演变成纤维环;在此过程中脊索细胞快速空泡化,成对的生骨节非致密结构对称性的向中线融合并将空泡化的脊索挤压入椎间盘中央,而生骨节致密结构向外侧扩张最终形成纤维环。组织化学染色发现胚胎期内层纤维环与软骨终板具有相近的细胞密度和软骨基质表达,免疫组织染色见内层纤维环细胞的增殖活性也与软骨终板细胞相近。大鼠脊索细胞在空泡化之前由致密的脊索鞘包裹,大鼠脊索鞘富含软骨基质和纤维成分,其中胶原纤维染色强于肌纤维染色,糖蛋白及葡萄糖胺聚糖成分也呈阳性表达。在脊索细胞充分空泡化之前脊索鞘已开始变薄,在脊索结构被挤压入椎间盘过程中脊索鞘逐渐消失。随着年龄增加,髓核细胞的胞浆空泡数量和大小逐渐丢失,空泡化髓核细胞在30周时已大部分被软骨样髓核细胞取代。12周时次级骨化中心在软骨终板的外周成对出现并向内侧浸润,使得软骨终板内的软骨细胞层逐渐变薄;内层纤维环的软骨基质向外层纤维环浸润,使得纤维环外侧的纤维层厚度逐渐变薄。在影像学退变的老龄大鼠椎间盘内,细胞数量的整体下降与局部细胞丛性聚集共存,较大的纵向裂隙出现在内外层纤维环的交界区附近。结论椎间盘的形成、发育、自然退变涉及复杂而动态的细胞与基质成分调控;髓核与纤维环具有不同的胚层起源和组织细胞学演变过程。第二部分椎间盘细胞类泛素化修饰信号的低氧调控及其对低氧诱导因子-1α稳定性和低氧耐受能力的影响目的探明类泛素化(SUMO化)修饰信号是否在椎间盘细胞内表达。探讨低氧环境下髓核细胞与纤维细胞对SUMO化修饰信号分子的表达调控规律及调控差异;明确SUMO化修饰信号调控对髓核细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)稳定性和低氧耐受力的影响。方法获取刚出生和10周龄大鼠脊柱正中冠状面切片,免疫组织化学染色SUMO化修饰信号成员:SUMO分子SUM01和SUMO2/3,SUMO化E1激活酶SAE1和SAE2,SUMO化E2连接酶UBC9,SUMO化蛋白酶SENP1在椎间盘内的表达分布。平面培养大鼠腰椎髓核细胞与纤维环细胞,免疫荧光染色SUMO化修饰信号成员在体外培养椎间盘细胞内的表达与分布。髓核细胞与纤维环细胞分别低氧培养0-24小时,CCK-8法检测细胞增殖率变化;Annexin-V/PI染色后流式细胞仪检测细胞凋亡率变化,PI染色后流式细胞仪检测细胞周期分布变化,SA-β-gal染色并量化细胞老化率变化;Realtime-PCR和Western-blot检测并比较髓核细胞与纤维环细胞对SUMO1、SUMO2/3、SAE1、SAE2、UBC9、SENP1的转录和表达调控规律。SENP1特异性干扰RNA下调髓核细胞内SENP1表达,低氧培养0-24小时,Realtime-PCR和Western-blot检测HIF-1α的转录与蛋白稳定性变化,HIF-1α下游靶点VEGF、Glut-1、PDK1的转录和表达变化;SA-β-gal染色量化SENP1下调对低氧环境下髓核细胞老化的影响,Hoechst33342/PI染色后流式细胞仪检测SENP1下调后髓核细胞在低氧环境下的细胞凋亡率变化。结果SUMO化修饰信号成员在刚出生及10周龄大鼠椎间盘髓核、纤维环、软骨终板都表达,以胞核表达为主。SUMO化修饰信号成员在体外培养的髓核细胞与纤维环细胞内都表达,以胞核表达为主,但SUM01仅在细胞核表达。游离的SUMO-2/3小分子在常氧与低氧下都表达,但游离的SUMO1小分子常氧下罕有表达,低氧后诱导性表达。椎间盘细胞内SUM01主要与RanGAP1结合,Western-blot法未检测到被SUMO1修饰的HIF-1α。髓核细胞低氧4小时后SUM01、SUMO2/3、SAE2、UBC9的转录与表达显着上调,随后恢复至常氧水平,SAE1低氧4-12小时表达下降。纤维环细胞低氧12小时后SUM01转录上调,SUMO2/3、SAE1、SAE2、UBC9的转录与表达无显着改变。髓核细胞与纤维环细胞内SENP1随低氧培养时间延长逐渐上调。髓核细胞常氧和低氧环境下都表达HIF-1α,低氧时间延长并不上调髓核细胞HIF-1α表达。特异性下调SENP1表达后低氧环境下髓核细胞HIF-1α表达下降,下游靶点VEGF、Glut-1的转录激活减少,PDK1的蛋白表达下调。髓核细胞与纤维环细胞在低氧环境下的细胞增殖率、老化率、细胞周期分布以及细胞凋亡水平与常氧相比无显着改变。下调SENP1表达的髓核细胞尽管HIF-1α稳定性下降,但低氧环境下的细胞老化率和凋亡率无明显上调。结论SUMO化修饰信号机制在椎间盘细胞内存在且应答低氧微环境。低氧时髓核细胞与纤维环细胞差异性调控SUMO化修饰关键信号分子表达,其中SENP1的低氧诱导上调参与髓核细胞内HIF-1α的蛋白稳定性及下游转录激活调控。髓核细胞与纤维环细胞具有相近的低氧耐受性,HIF-1α的稳定性调控不是髓核细胞耐受低氧的唯一信号基础。(本文来源于《东南大学》期刊2017-06-01）
刘萍,郑慧玲,吴建伟,苏晓庆[2]（2012）在《绿色荧光蛋白在贵阳腐霉的组成性表达》一文中研究指出以潮霉素抗性基因hph为筛选标记,以双元载体pPK2为基本骨架,将增强型绿色荧光蛋白基因egfp置于组成型启动子PgpdA和色氨酸C终止子TtrpC之间,构建了组成性表达egfp的载体pPK2-EGFP,利用根癌农杆菌介导的遗传转化法,转入贵阳腐霉(Pythium guiyangense)表达。对转化子进行RT-PCR和荧光显微镜检测,结果表明,egfp基因在贵阳腐霉转化子中能稳定表达。(本文来源于《湖北农业科学》期刊2012年24期）
包婉蓉,张腾腾[3]（2012）在《树突状细胞表面钙网蛋白的组成性和诱导性表达》一文中研究指出目的检测树突状细胞(DC)表面钙网蛋白(CRT)的组成性和诱导性表达,并初步分析细胞表面CRT在DC分化及免疫应答中的作用。方法 AriaⅢ流式分选仪分选出C57 BL/6小鼠脾脏来源的DC,以荧光素标记的CRT多抗和CRT单克隆抗体染色,检测静息态DC表面CRT的组成性表达;静息态DC在体外以脂多糖(LPS)刺激培养24 h后,同样以抗体染色法,流式细胞仪检测培养后DC表面CRT表达量的变化;并检测DC诱导活化前后细胞表面CD86表达量的变化,以确定诱导前后DC的分化状态。结果静息态DC表面能检测到CRT的低水平组成性表达;LPS体外刺激能够有效诱导DC成熟,促使其高表达CRT,商品化CRT多抗和CRT单抗流式检测结果趋势一致,LPS能够诱导DC活化,成熟DC表面CD86的表达量较静息态DC显着提高。结论 CRT表达于静息态及活化态DC细胞表面,在LPS诱导下表达量会明显增加,初步提示在某些疾病状态下,DC细胞膜表面CRT表达量明显提高的状态,可能与其免疫学功能及某些病理状态相关,如抗原提呈、诱导T细胞分化等。(本文来源于《苏州大学学报(医学版)》期刊2012年05期）
刘萍,郑慧玲,赵竟男,吴建伟,苏晓庆[4]（2012）在《根癌农杆菌介导的Pr1基因在贵阳腐霉的组成性表达》一文中研究指出【目的】构建组成性表达贵阳腐霉Pr1基因的载体pCambia-hph-Pr1,转化贵阳腐霉,以获得高毒力的基因工程转化菌株。【方法】以双元载体pCambia-Pnos-PNN-hph为基本骨架,将Pr1基因置于组成型启动子PgpdA和终止子TtrpC之间,获得含Pr1基因的表达元件。以贵阳腐霉菌丝体为受体材料,利用根癌农杆菌介导的遗传转化法转化贵阳腐霉,观察转化株的生物学特征和灭蚊毒力。【结果】转化株的菌丝生长速度和游动孢子产量与野生株无显着性差异。生物测定表明转化株对蚊幼虫平均致死率达到32.9%,比野生株提高了约一倍,并且使受试蚊幼虫生长速度明显减缓。【结论】利用根癌农杆菌介导的遗传转化获得了遗传稳定的高毒力菌株。(本文来源于《微生物学通报》期刊2012年06期）
刘涛[5]（2009）在《慢病毒介导的Foxa2和Hnf4a组成性表达对胚胎干细胞向肝细胞分化的影响》一文中研究指出肝炎病毒、药物、酒精等因素引起的肝功能衰竭(简称肝衰竭)是临床治疗中的一大顽疾。迄今,肝脏移植是唯一证实有效的治疗手段,但其受到肝脏来源缺乏、手术费用昂贵等因素的限制。生物人工肝、肝细胞移植、肝组织工程的研究为终末期肝病的治疗带来新的希望,但缺乏有效的肝细胞来源是这叁者临床应用的最大瓶颈。胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs),由于具有多向分化、自我更新、无限增殖的特性,有望成为新的肝细胞来源。然而,目前仍缺乏有效的ESCs向肝细胞定向诱导分化策略。近年来,随着对细胞可塑性的重新认识,越来越多的证据证实转录因子在细胞的命运归属与转换中发挥着决定性的作用,少量关键的转录因子可以直接促进各类细胞发生分化、去分化以及转分化。我们推测,是否存在特定的转录因子或转录因子组合可以促进ESCs向肝细胞定向分化。已知叉头框A2(forkhead box A2,Foxa2)与肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4 alpha , Hnf4a)是分别在肝脏发育早期和中期开始表达的两个肝脏核心转录因子,在促进肝脏发育与维持肝细胞功能中发挥着核心的作用。共组成性表达Foxa2和Hnf4a对ESCs向肝细胞的定向分化有何影响尚无相关研究报道。为此,本研究探索了组成性表达Foxa2和Hnf4a对ESCs向肝细胞定向分化中的影响,试图为从ESCs获取肝细胞提供一种新模式。快捷而高效的ESCs基因修饰是本文研究的前提,而ESCs是难以进行基因修饰的细胞之一。质粒转染、腺病毒等瞬时基因修饰方法不适用于ESCs。第叁代慢病毒表达载体具有可稳定介导外源基因整合入目的细胞基因组、可感染静止期细胞和相对安全等特点,是进行ESCs基因修饰的较好选择。但第叁代慢病毒表达载体包装制备难度大,ESCs对其进入细胞内具有一定程度的抵抗,在ESCs中目的基因容易发生基因沉默。另外,ESCs的维持培养需要在含白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor, LIF)的特殊培养基中,并且一般需要小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast, MEF)作为饲养层细胞。在进行基因修饰时,阳性克隆的筛选和ESCs特性的维持是一大难题。因此,有必要探索优化第叁代慢病毒表达载体的构建、包装制备以及慢病毒介导的ESCs基因修饰等方法。为此,本研究拟首先构建适于荧光示踪标记、利于ESCs基因修饰和稳定表达的系列第叁代慢病毒表达载体。其次,基于磷酸钙转染系统与携带绿色荧光的慢病毒表达载体2K7bsd-EFp-EGFP,探索大量、高效包装制备慢病毒的方法,并利用该方法包装制备携带Foxa2和Hnf4a的慢病毒颗粒。然后,利用制备的2K7bsd-EFp-EGFP慢病毒颗粒和小鼠胚胎干细胞株CCE,建立ESCs快速基因修饰的方法,并采用该方法制备组成性表达Foxa2和Hnf4a的ESCs。最后,基于携带有外源基因的ESCs和不同的诱导环境,评价Foxa2和Hnf4a单独和共同组成性表达(Constitutive Expression)对ESCs向肝细胞诱导分化的影响。本研究的主要研究方法和结果如下:1.利用第叁代慢病毒表达载体2K7bsd和2K7neo、人延长因子1A启动子(human elongation factor 1 alpha promoter, EFp)、小鼠白蛋白增强子启动子(mouse albumin enhancer promoter, ALBep)、土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(woodchuck hepatitis virus posttranscriptional response element,WRPE)、编码人源Foxa2和Hnf4a全长开放阅读框(open reading frame,ORF)的cDNA等元件,成功的构建了适于荧光示踪标记和利于ESCs基因修饰和稳定表达的系列慢病毒表达载体2K7bsd-EFp-EGFP, 2K7neo-EFp-Foxa2, 2K7bsd-EFp-Hnf4a, 2K7bsd-ALBep-EGFP。2.基于磷酸钙转染的方法,利用293FT细胞、包装质粒(pLP1、pLP2、pLP/VSVG)和慢病毒表达载体2K7bsd-EFp-EGFP,从质粒的浓度和质量、表达载体质粒和包装质粒四种质粒的比例,转染液的pH值、293FT细胞状态、转染的时机、慢病毒的收获浓缩以及滴度测定等方面进行了优化,探索出了一套慢病毒表达载体的高效包装和大量制备的方法。并利用优化的制备慢病毒颗粒的方法,大量包装制备了慢病毒颗粒2K7bsd-EFp-EGFP, 2K7neo-EFp-Foxa2, 2K7bsd-EFp-Hnf4a。3.建立了大量制备、处理和冻存小鼠胚胎成纤维细胞的方法,并且该方法廉价、方便,适合小鼠ESCs的维持培养。4.利用前期制备的2K7bsd-EFp-EGFP慢病毒颗粒,从慢病毒的感染时机和方式、ESCs培养基、感染后药物筛选时间、饲养层细胞的添加、克隆挑选等方面优化了慢病毒介导的小鼠ESCs基因修饰方法。探索出了一套高效快速的慢病毒介导的小鼠ESCs基因修饰的方法。利用前期制备的慢病毒颗粒和以上摸索好条件的小鼠ESCs基因修饰方法,进行了ESCs的基因修饰,成功构建了CCE-EGFP、CCE-Foxa2, CCE-Hnf4a, CCE-Foxa2/Hnf4a的细胞株。并通过了PCR酶切鉴定和蛋白免疫印迹(Western Blot)、免疫荧光检测鉴定。5.进行了CCE,CCE-Foxa2, CCE-Hnf4a, CCE-Foxa2/Hnf4a维持培养和畸胎瘤形成实验,结果提示经过基因修饰的ESCs,仍然能维持ESCs正常增殖和形态特征。将四种细胞移植到裸鼠体内均能畸胎瘤,并在其中均可发现内中外叁个胚层的细胞组织,四者之间无明显差异。6.将CCE、CCE-Foxa2、CCE-Hnf4a、CCE-Foxa2/Hnf4a四种细胞在不同的诱导培养环境中,通过形态观察、实时荧光定量PCR检测、免疫荧光检测等监测指标,探索了Foxa2和Hnf4a组成性表达对ESCs向肝细胞分化的影响。结果提示在自发分化、无任何外界诱导剂的情况下,四种细胞在向肝细胞分化方面无明显差异。而在含有DMSO等诱导剂的协助下,Foxa2可明显的促进ESCs向肝细胞分化。同样的条件下,Hnf4a并无明显的促进ESCs向肝细胞分化的作用,而在Foxa2和Hnf4a共同的作用下,有一定的促进ESCs向肝细胞分化作用,但效果并不如单独Foxa2作用明显。总之,本研究在前期首先构建了课题所需的系列第叁代慢病毒表达载体,基于磷酸转染方法,探索了一套高效而大量的慢病毒表达载体包装制备方法,制备了相关的慢病毒颗粒;而后进行了慢病毒介导的ESCs快速基因修饰研究,制备了可稳定表达目的基因的ESCs株;并利用这些细胞进行了组成性表达Foxa2和Hnf4a对ESCs向肝细胞分化影响的初步研究。本研究为进行ESCs基因修饰相关研究提供了稳定可靠的方法和工具,也为进一步研究其它转录因子在ESCs定向分化中的作用提供了新的思路与实验依据。(本文来源于《第叁军医大学》期刊2009-11-01）
郎海滨,糜漫天,张乾勇,韦娜,黄国荣[6]（2000）在《视黄酸对CDK_2组成性表达HL-60细胞增殖的影响》一文中研究指出目的探讨细胞周期素依赖性激酶 2 (CDK2 )在视黄酸对急性早幼粒细胞白血病 HL- 6 0细胞的增殖抑制和分化调控过程中的作用。方法应用真核细胞基因转染技术将外源 CDK2 基因转入人 HL- 6 0早幼粒细胞白血病细胞中 ,进而以视黄酸处理 1～ 4d。结果 HL - 6 0细胞的增殖受到明显抑制 ,且出现了分化趋势 ,与对照组相比 ,更多的 CDK2 组成性表达的 HL - 6 0细胞被阻止于 G0 / G1 期 ,但与未转染的 HL - 6 0细胞相比 ,视黄酸的抑制增殖、诱导分化作用均有所削弱 ,同时 ,CDK2 的蛋白表达量变化并不明显。结论 CDK2 在视黄酸诱导的增殖抑制和分化过程中起重要作用 ,由于 CDK2 的组成性超表达 ,导致视黄酸对 HL- 6 0细胞的增殖抑制和诱导分化作用下降。(本文来源于《免疫学杂志》期刊2000年02期）
组成性表达论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
以潮霉素抗性基因hph为筛选标记,以双元载体pPK2为基本骨架,将增强型绿色荧光蛋白基因egfp置于组成型启动子PgpdA和色氨酸C终止子TtrpC之间,构建了组成性表达egfp的载体pPK2-EGFP,利用根癌农杆菌介导的遗传转化法,转入贵阳腐霉(Pythium guiyangense)表达。对转化子进行RT-PCR和荧光显微镜检测,结果表明,egfp基因在贵阳腐霉转化子中能稳定表达。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
组成性表达论文参考文献
[1].王锋.椎间盘髓核细胞组成性表达低氧诱导因子-1α的发育基础以及类泛素化修饰调控机制[D].东南大学.2017
[2].刘萍,郑慧玲,吴建伟,苏晓庆.绿色荧光蛋白在贵阳腐霉的组成性表达[J].湖北农业科学.2012
[3].包婉蓉,张腾腾.树突状细胞表面钙网蛋白的组成性和诱导性表达[J].苏州大学学报(医学版).2012
[4].刘萍,郑慧玲,赵竟男,吴建伟,苏晓庆.根癌农杆菌介导的Pr1基因在贵阳腐霉的组成性表达[J].微生物学通报.2012
[5].刘涛.慢病毒介导的Foxa2和Hnf4a组成性表达对胚胎干细胞向肝细胞分化的影响[D].第叁军医大学.2009
[6].郎海滨,糜漫天,张乾勇,韦娜,黄国荣.视黄酸对CDK_2组成性表达HL-60细胞增殖的影响[J].免疫学杂志.2000
论文知识图
