论文摘要
目的构建人促甲状腺素受体（TSHR）A亚单位重组腺相关病毒2/9杂合载体（rAAV2-9-hTSHR289-IRES-ZsGreen）,为研究格雷夫斯病建立理想动物模型和探索基因预防提供更佳手段。方法以EcoRⅠ和BamHⅠ将腺相关病毒骨架质粒pAAV-IRES-ZsGreen和含hTSHR289的pDC315质粒双酶切,回收酶切病毒骨架质粒及目的片段进行连接,产物转化JM109感受态细菌,获取重组腺相关病毒骨架质粒pAAV-hTSHR289-IRES-ZsGreen。经酶切电泳、测序鉴定后,将pAAV-hTSHR289-IRES-ZsGreen、辅助质粒pHelper、包装质粒pAAV-2/9（AAV2-Rep,AAV9-Cap）采用磷酸钙法转染293AAV细胞系,获取大量rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen,经纯化后荧光显微镜下观察其包装效率,rQ-PCR法测定病毒滴度。将rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen感染HEK293细胞,ELISA法检测不同时间点hTSHR289蛋白表达水平。结果重组腺相关病毒骨架质粒pAAV-hTSHR289-IRES-ZsGreen经双酶切及测序鉴定,质粒构建正确;荧光显微镜下观察显示转染293AAV细胞72 h,病毒包装效率达92%～94%,rQ-PCR法测定的rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen病毒滴度为1×1013vg/mL;ELISA法显示rAAV2/9介导的hTSHR289蛋白表达96 h明显高于72 h及48 h。结论成功构建rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen重组腺相关病毒载体并能有效转染和表达。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 赵凤仪,何明倩,王悦,张萌,胡诗倩,施秉银,伍丽萍
关键词: 促甲状腺素受体亚单位,重组腺相关病毒,格雷夫斯病
来源: 西安交通大学学报(医学版) 2019年06期
年度: 2019
分类: 医药卫生科技,基础科学
专业: 生物学,内分泌腺及全身性疾病
单位: 西安交通大学第一附属医院内分泌科
基金: 国家自然科学基金资助项目(No.81873638,No.81670725),陕西省重点项目(No.2017ZDXM-SF-060),陕西省自然科学基础研究计划项目(No.2018JM7108096)~~
分类号: Q78;R581.1
页码: 997-1001
总页数: 5
文件大小: 2522K
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标签：促甲状腺素受体亚单位论文; 重组腺相关病毒论文; 格雷夫斯病论文;