志贺氏菌可视浊度/荧光环介导等温扩增方法的建立

论文摘要

为给实验室和现场检测提供一种快速且易于操作的志贺氏菌检测方法,通过将LAMP技术分别与荧光检测技术和浊度检测技术相结合,建立了灵敏、特异、准确的可视浊度/荧光环介导等温扩增（LAMP）检测方法。根据志贺氏菌基因保守序列,利用LAMP在线软件设计4条最佳引物,通过优化反应温度,分别建立了可视浊度环介导等温扩增检测方法（LAMP-浊度）以及可视荧光环介导等温扩增检测方法（LAMP-荧光）,并分析所建立的两种方法的特异性和灵敏度。结果显示:所建立的LAMP-浊度方法最适反应温度是63℃,菌液灵敏度为13.6 cfu/mL,是普通PCR方法的10倍;所建立的LAMP-荧光方法最适反应温度是64℃,菌液灵敏度为1.36 cfu/mL,是普通PCR方法的100倍。利用4株志贺氏菌和10株非志贺氏菌,证实了建立的两种可视化LAMP方法具有良好的特异性。通过环介导等温扩增技术分别与浊度检测技术和荧光检测技术相结合,使其完成时间缩短至1 h内,整个扩增过程可实时监测,并可避免由于开盖加染料而导致的假阳性。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株
•     1.1.2 试剂
•     1.1.3 仪器设备
•   1.2 方法
•     1.2.1 LAMP引物设计
•     1.2.2 菌株核酸提取
•     1.2.3 LAMP-浊度扩增体系、LAMP-荧光扩增体系、PCR扩增体系
•     1.2.4 LAMP-浊度、LAMP-荧光方法特异性分析
•     1.2.5 LAMP-浊度、LAMP-荧光方法灵敏度分析
• 2 结果
•   2.1 LAMP引物序列
•   2.2 LAMP-浊度、LAMP-荧光反应温度优化
•   2.3 LAMP-浊度、LAMP-荧光方法特异性分析
•   2.4 LAMP-浊度、LAMP-荧光方法灵敏度分析
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 贺生芳,郭澍强,谈静惠,马晓花,杨旭光,郝俊虎

关键词: 志贺氏菌,环介导等温扩增,荧光,浊度

来源: 中国动物检疫 2019年05期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 银川海关综合技术中心

基金: 国家重大科学仪器设备开发专项(2012YQ090197)

分类号: S852.61

页码: 93-98

总页数: 6

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