水貂犬瘟热病毒核衣壳基因TaqMan荧光定量PCR方法的建立

论文摘要

为了建立快速检测水貂犬瘟热病毒的TaqMan荧光定量PCR方法,试验根据犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因的保守区域设计一对特异引物和探针,优化体系反应条件,并进行敏感性试验、特异性试验、重复性试验和水貂外周血淋巴细胞感染犬瘟热病毒后的检测。结果表明:建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法最低检出量为3.96个拷贝;与水貂细小病毒、水貂阿留申病毒均无交叉反应;批内重复和批间重复循环阈值(Ct)变异系数均小于1%;应用该方法可成功检出水貂外周血淋巴细胞中的犬瘟热病毒。说明建立的检测方法敏感性、特异性、重复性好,可以用于水貂犬瘟热病毒的临床检测。

论文目录

• 1 材料
•   1.1 病毒及质粒
•   1.2 主要试剂
•   1.3 试验动物
• 2 方法
•   2.1 引物的设计与合成
•   2.2 标准品质粒拷贝数的计算
•   2.3 CDV-N TaqMan荧光定量PCR扩增体系和扩增程序的建立
•   2.4 标准曲线的建立
•   2.5 敏感性试验
•   2.6 特异性试验
•   2.7 重复性试验
•   2.8 CDV-N基因 TaqMan荧光定量PCR方法对人工感染CDV淋巴细胞的检测
• 3 结果与分析
•   3.1 CDV-N基因 TaqMan 荧光定量PCR扩增体系和扩增程序的建立
•   3.2 CDV-N 基因TaqMan 荧光定量PCR标准曲线的建立
•   3.3 CDV-N 基因TaqMan 荧光定量PCR方法的敏感性试验
•   3.4 CDV-N基因 TaqMan 荧光定量PCR方法的特异性试验
•   3.5 CDV-N基因 TaqMan 荧光定量PCR方法的重复性试验
•     3.5.1 批内重复试验
•     3.5.2 批间重复试验
•   3.6 CDV-N 基因TaqMan荧光定量PCR方法对人工感染CDV的淋巴细胞的检测
• 4 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王介淞,陶新磊,黄娟

关键词: 荧光定量,犬瘟热病毒,核衣壳蛋白,水貂

来源: 黑龙江畜牧兽医 2019年16期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 青岛农业大学动物医学院

基金: 国家自然科学基金项目(31472196),2017年大学生科技创新项目(248)

分类号: S852.65

DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.08.0345

页码: 81-84+95

总页数: 5

文件大小: 290K

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