LncRNA-Cox2对BCG诱导巨噬细胞凋亡/坏死调控作用的研究

论文摘要

背景:结核病（Tuberculosis,TB）是由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,Mtb）感染引起的人畜共患传染病。巨噬细胞,作为结核分枝杆菌的宿主细胞,与结核分枝杆菌相互作用复杂。一方面,巨噬细胞在被Mtb侵染后,可启动自身的凋亡程序以抵抗胞内的结核分枝杆菌,而Mtb侵染后会导致巨噬细胞坏死,破坏机体免疫应答,以达到大量扩散和繁殖的目的。凋亡和坏死过程十分复杂,并受到多种因素调控。在众多调控因素中,长链非编码RNA（Long non-codingRNA,LncRNA）受到广泛关注。近年来对于LncRNAs的研究多集中于细胞的免疫应答方面,其中LncRNA-Cox2分子由于其对凋亡与坏死的调控作用而成为研究的热点之一。但LncRNA-Cox2是否参与结核分枝杆菌感染后巨噬细胞的凋亡和坏死尚不明晰。因此探讨LncRNA-Cox2在巨噬细胞抵抗Mtb感染过程中对细胞凋亡和细胞坏死的调控作用具有重要的意义。目的与方法:本试验以小鼠肺泡巨噬细胞（RAW264.7）为研究对象,使用结核分枝杆菌疫苗株BCG感染,并通过小干扰RNA（siRNA）敲弱RAW264.7细胞中LncRNA-Cox2的表达。利用流式细胞术、透射电子显微镜、实时荧光定量PCR、Western Blotting、ELISA、荧光原位杂交和免疫荧光等手段,分析BCG感染后LncRNA-Cox2对小鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡和坏死的调控作用。通过以上的研究内容,取得了以下研究结果:结果:（1）BCG感染巨噬细胞12h时,与对照组相比,LncRNA-Cox2的表达量极显著增高（p<0.001）,且小干扰RNA能够显著下调LncRNA-Cox2的表达（p<0.001）;同时,利用荧光原位杂交技术检测发现巨噬细胞中LncRNA-Cox2高表达于细胞质中。进一步研究发现,TLR2通路激活剂Pam3CSK4可以激活巨噬细胞中LncRNA-Cox2的表达,推测BCG诱导的LncRNA-Cox2高表达与TLR2通路激活相关。（2）BCG感染巨噬细胞12h时,与对照组相比,细胞凋亡率显著升高（p<0.001）;同时干扰LncRNA-Cox2可显著提高细胞凋亡率（p<0.001）,并促进Caspase3、Cytochrome c等促凋亡相关因子的mRNA及蛋白的表达并下调抑凋亡蛋白MCL-1的表达;进一步研究发现,siRNA-Cox2可显著升高细胞内Ca2+浓度（p<0.001）,并提高内质网应激相关因子PERK、eIF-2α和CHOP的mRNA与蛋白水平的表达;而阻断内质网应激会抑制因干扰LncRNA-Cox2而诱导的巨噬细胞凋亡。上述研究结果表明,干扰LncRNA-Cox2后会通过影响内质网应激参与调控BCG诱导的巨噬细胞凋亡。（3）BCG感染巨噬细胞12h时,与对照组相比,细胞坏死率显著升高（p<0.001）;同时干扰LncRNA-Cox2可显著降低细胞坏死率（p<0.001）,并抑制坏死相关因子RIP1、RIP3及MLKL的mRNA及蛋白水平的表达（p<0.001）,表明干扰LncRNA-Cox2会通过下调RIP1、RIP3及MLKL的表达影响BCG感染所诱导的巨噬细胞坏死。结论:BCG感染会上调巨噬细胞中LncRNA-Cox2的表达,并促进细胞凋亡与坏死的发生;进一步研究发现,BCG感染巨噬细胞过程中,干扰LncRNA-Cox2的表达,会通过影响内质网应激途径的激活调控细胞凋亡的发生;同时能够下调坏死相关因子RIP1、RIP3及MLKL的表达调控巨噬细胞坏死的发生。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 中英文对照
• 第一章 文献综述
•   1.1 结核病流行概况
•   1.2 结核分枝杆菌与宿主细胞凋亡
•   1.3 结核分枝杆菌与宿主细胞坏死
•   1.4 LncRNAs的研究进展
•   1.5 研究目的及意义
• 第二章 LncRNA-Cox2干扰载体的构建及验证
•   2.1 试验材料
•   2.2 试验方法及数据统计分析
•   2.3 结果与分析
•   2.4 小结
• 第三章 LncRNA-Cox2对BCG诱导巨噬细胞凋亡的调控作用及机制研究
•   3.1 试验材料
•   3.2 试验方法及数据统计分析
•   3.3 结果与分析
•   3.4 小结
• 第四章 LncRNA-Cox2对BCG诱导巨噬细胞坏死的调控作用
•   4.1 试验材料
•   4.2 试验方法及数据统计分析
•   4.3 结果与分析
•   4.4 小结
• 第五章 结论与讨论
•   5.1 LncRNA-Cox2干扰模型的构建
•   5.2 LncRNA-Cox2对BCG诱导巨噬细胞凋亡的调控作用
•   5.3 LncRNA-Cox2对BCG诱导巨噬细胞凋亡的调控机制
•   5.4 LncRNA-Cox2对BCG诱导巨噬细胞坏死的调控作用
•   5.5 讨论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简介

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 徐雅楠

导师: 邓光存,吴晓玲

关键词: 细胞凋亡,细胞坏死

来源: 宁夏大学

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 宁夏大学

基金: 国家自然科学基金(项目编号:31560322,31760326)宁夏科技创新领军人才培养(项目编号:KJT2017002)

分类号: R378.911;Q255

DOI: 10.27257/d.cnki.gnxhc.2019.000421

总页数: 72

文件大小: 6429K

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