大鼠Pdcd4基因真核载体的构建与表达

论文摘要

目的构建大鼠程序性细胞死亡因子4（programmed cell death 4,Pdcd4）基因真核表达载体,为进一步研究该基因的功能提供条件。方法提取E3大鼠肺组织总RNA,RT-PCR扩增大鼠Pdcd4基因全长c DNA;经过双酶切、连接等反应,构建p EGFP-C1-Pdcd4重组表达载体。将该载体转染大鼠巨噬细胞系NR8383细胞,通过RT-q PCR与Western blot法检测NR8383细胞Pdcd4基因的表达。结果 RT-PCR扩增的大鼠Pdcd4全长c DNA为1410bp; p EGFP-C1-Pdcd4重组真核表达载体中插入片段与NCBI Gen Bank文库中大鼠Pdcd4 c DNA的序列完全一致;倒置荧光显微镜下观察转染后NR8383细胞中绿色荧光蛋白的表达确定转染成功; RT-q PCR与Western blot法检测NR8383细胞中Pdcd4基因的表达水平明显上调。结论成功构建p EGFP-C1-Pdcd4重组真核表达载体,为进一步研究Pdcd4基因的作用机制奠定基础。

论文目录

• 材料与方法
•   1．菌株与载体:
•   2．细胞与实验动物:
•   3．试剂:
•   4．引物:
•   5．实验方法
•   6．统计学方法:
• 结果
•   1．肺组织总RNA电泳鉴定:
•   2．重组质粒的构建与鉴定:
•   3.NR8383细胞转染:
•   4．检测Pdcd4的表达:
• 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 钟波,李静,吕社民,侯伟,刘海燕,金巧艳,魏伟

关键词: 程序性细胞死亡因子,基因重组,载体,支气管哮喘

来源: 医学研究杂志 2019年10期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 西安交通大学医学部第二附属医院小儿内科,西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系,西安交通大学医学部第二附属医院检验科

基金: 国家自然科学基金资助项目(81800017),陕西省自然科学基础研究计划项目(2017JQ8045),西安交通大学自由探索与创新项目(1191329843),西安交通大学第二附属医院院基金资助项目[YJ(QN)201504]

分类号: Q78

页码: 58-62

总页数: 5

文件大小: 1893K

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